张 艳，刘 剑，茅国新，刘益飞

（南通大学附属医院1化疗科；2病理科，江苏226001）

卵巢上皮性癌中Kras和P53的表达及临床意义

张 艳1*，刘 剑1，茅国新1，刘益飞2

（南通大学附属医院1化疗科；2病理科，江苏226001）

目的：探讨Kras和P53蛋白在卵巢上皮性癌中的表达及与临床病理特征关系。方法：采用免疫组织化学SP法分别检测Kras、P53蛋白在非肿瘤性卵巢上皮组织10例及卵巢上皮性癌80例组织中的表达，并分析2种蛋白与临床病理特征的关系。结果：Kras蛋白在非肿瘤性卵巢组织中的阳性表达0例（0%），在上皮性癌中的阳性表达15例（18.75%）。P53蛋白定位于细胞核。P53蛋白在非肿瘤性卵巢组织阳性表达0例（0%），在上皮性癌组织中的阳性表达31例（38.75%）。（2）在卵巢上皮性癌中，Kras蛋白表达与卵巢上皮性癌组织分化程度、临床分期相关（P< 0.05），而与年龄、淋巴结转移无关；P53蛋白表达与组织分化程度、临床分期、淋巴结转移均相关，即P53蛋白在组织分化程度越低的上皮性卵巢癌中表达越高。结论：Kras和P53蛋白的表达与组织学分级相关，且两者高水平表达可能是卵巢癌预后不良的重要指标。

卵巢上皮性癌；Kras；P53；免疫组织化学SP法

卵巢癌（ovarian cancinoma）是女性生殖系统常见恶性肿瘤之一，占妇科恶性肿瘤死亡率首位。卵巢肿瘤中上皮性肿瘤较多见，占卵巢恶性肿瘤的85%~ 90%[1]。近年来Kurman等[2]对上皮性卵巢癌提出二元发生学模型，其中Ⅰ型卵巢癌中Kras基因变异较常见，而Ⅱ型卵巢癌具有TP53基因的特征性变异和高度的遗传不稳定性。全部标本取自2005年1月-2009年1月南通大学附属医院病理科档案，本研究应用免疫组织化学法检测正常卵巢和卵巢上皮性癌组织中Kras和P53蛋白的表达情况，以探讨Kras、P53蛋白与卵巢上皮性癌的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 卵巢癌患者80例，年龄25~75岁，平均50.24±10.52岁，均已生育。根据2000年FIGO手术-病理分期[3]：Ⅰ~Ⅱ期44例，Ⅲ~Ⅳ期36例。根据组织病理学分级：高级别上皮性癌40例（含低分化、低-中分化），低级别上皮性癌40例（含高分化，高-中分化）。所有患者术前均未进行放射治疗及化学药物治疗。另有非肿瘤性卵巢组织10例作为对照。

1.2 方法 （1）标本制备方法：非肿瘤性卵巢组织为手术切除标本，卵巢癌标本均为手术切除标本，标本切除离体后即用10%中性甲醛固定，常规脱水浸蜡制成蜡块，4μm厚切片。（2）免疫组化SP法检测：Kras和P53蛋白染色方法均按即用型试剂盒说明书步骤进行，均为4℃过夜，经DAB显色。均设阴性和阳性对照，试剂（北京中杉生物技术公司）。（3）染色结果判定：双盲阅片法，由2名经验丰富的副高职称医师分别阅片。每张切片随机观察10个具有代表性的高倍视野，依照各自染色程度及染色细胞数进行综合分析评分。（A）按细胞显色深浅计分：0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色。（B）按着色细胞占计数细胞百分率计分：0分为无阳性细胞，1分为阳性细胞数＜10%，2分为11%～50%，3分为51%～80%，4分为＞80%，积分数=A×B。A×B=0～2分为（－），A×B=3～4分为（+），A×B=6～8分为（++），A×B=9～12分为（+++）。Kras主要表达于胞浆，少量表达于胞膜；P53主要表达于胞核。

1.3 统计学处理 运用SPSS16.0统计软件进行分析，率比较采用χ2检验，相关性分析用Spearman等级相关检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 Kras和P53蛋白在卵巢癌中表达 Kras蛋白表达主要定位在胞浆，少量定位在胞膜。Kras蛋白在非肿瘤性卵巢组织中的阳性表达0例（0%），在上皮性癌中的阳性表达15例（18.75%）。P53蛋白定位于细胞核。P53蛋白在非肿瘤性卵巢组织阳性表达0例（0%），在上皮性癌组织中的阳性表达31例（38.75%）。见图1、图2，表1、表2。

图1 Kras蛋白在上皮性癌中的表达（免疫组化，100×）

图2 P53蛋白在浆液性卵巢癌中的表达（免疫组化，100×）

表1 Kras蛋白在正常卵巢组织及浆液性癌组织中的表达（例，%）

表2 P53蛋白在正常卵巢组织及浆液性癌组织中的表达 例（%）

2.2 Kras和P53蛋白表达与卵巢上皮性癌临床病理特征关系 Kras蛋白表达与卵巢上皮性癌的组织分化、临床分期相关（P<0.05），而与年龄、淋巴结转移无关；P53蛋白与组织分化、临床分期及淋巴结转移相关（P<0.05），而与年龄无关。见表3。

表3 Kras和P53蛋白表达与卵巢上皮性癌临床病理特征 例（%）

3 讨 论

近年来Kurman等[2]对上皮性卵巢癌提出二元发生学模型，将卵巢上皮性癌分为：Ⅰ型和Ⅱ型。Ⅰ型肿瘤生长较慢，属于低级别的新生物，被发现时仅局限于卵巢，且来源于分化较好的癌前病变区，遗传稳定并且有多个特征性的变异基因，其中Kras基因较为常见。而Ⅱ型肿瘤生长迅速，属于高级别的新生物，具有高度的侵袭性，具有TP53基因的特征性变异和高度的遗传不稳定性。Kras基因在信号传导通路的多个重要事件中均起到关键的作用，其蛋白产物在人类多种肿瘤细胞系中高表达。Kras蛋白表达水平与一些肿瘤转移及预后密切相关，如Kras蛋白在非小细胞肺癌、结直肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌高表达均提示预后不良[4]。Caduff等[5]用免疫组织化学法分析Kras蛋白在浆液性卵巢癌中表达，发现Kras蛋白在上皮性卵巢癌中的表达与组织分化程度有关。在低级别上皮性卵巢癌中表达较高，而在高级别上皮性卵巢癌中则表达较低。本研究中Kras蛋白在低级别上皮性癌和高级别上皮性癌中表达率分别为35.0%和2.5%，结果与Caduff等的报道一致。也提示Kras基因突变可能主要发生于低级别上皮性癌中，是肿瘤发生的早期分子事件，这与Hass等[6]研究的结果相似。高级别上皮性癌是通过卵巢表面上皮或其包涵囊肿直接恶变而来，因而个别病例Kras蛋白的表达较低，大部分甚至不表达。本研究显示Kras蛋白的表达除了与组织分化程度相关外，还与临床分期相关，与年龄及淋巴结转移无关。考虑可能Kras蛋白高表达的上皮性卵巢肿瘤发展缓慢，生长局限，导致临床分期较早。

P53基因是目前极为重要的抑癌基因之一，与细胞周期的调控、DNA修复、细胞分化、细胞凋亡等重要生物学功能有关[7]。作为“分子警察”的P53基因在多种肿瘤组织中突变率较高，成为多种肿瘤的分子标志物。突变型P53蛋白失去对G0、G1期细胞的停滞作用，对细胞的增殖失去控制，并诱导遗传不稳定，这些改变导致肿瘤的发生[8]。由于野生型P53蛋白的半衰期很短，很难用免疫组化方法检测出。而突变型P53蛋白构型发生变化，半衰期延长并在细胞内蓄积，可用免疫组化染色方法检出。所用P53抗体可与野生型P53蛋白及突变型P53蛋白反应，阳性反应基本代表突变型P53基因的存在。本研究采用免疫组织化学法，检测P53蛋白在正常卵巢组织及上皮性卵巢癌中的表达情况，阳性率分别为0%，38.75%。提示P53基因突变可能与上皮性卵巢癌的发生有着密切的联系，这与潘晓琳等[9]报道相一致。同时本研究发现，P53蛋白表达与上皮性卵巢癌的组织分化程度相关，P53蛋白的表达随着分化程度的降低而增高（图2）。一般认为肿瘤分化程度越低，恶性程度越高，预后越差。P53蛋白在组织分化程度越低的上皮性卵巢癌中表达越高，提示其可作为反应上皮性卵巢癌恶性程度的指标，与上皮性卵巢癌的不良预后相关。这一结果与Gershenson等[10]的报道一致说明P53蛋白表达是上皮性癌发展过程中的晚期事件。本研究结果显示P53高表达与临床分期及淋巴结转移相关，提示P53表达是上皮性癌发展过程中的晚期事件，其高表达可能促进癌细胞的浸润和转移。

[1]管艳玲，杨寒，王玉萍，等.Survivin、PKA在上皮性卵巢癌组织中的表达及意义［J］.中国当代医药，2013，20（22）：89-90，92.

[2]Shih IeM，Kurman RJ.Ovarian tumorigenesis:a proposed model based on morphological and molecular genetic analysis［J］.Am J Pathol，2007，164（5）：1511-1518.

[3]Osanai M，Nishikiori N，Murata M，et al.Cellular retinoic acid bioavailability determines epithelial integrity：Role of retinoic acid receptor alpha agonists in colitis［J］.Mol Pharmacol，2007，71（1）：250-258.

[4]Zenker M，Lehmann K，Schulz AL，et al.Expansion of the genotypic and phenotypic spectrum in patients with KRAS germline mutations［J］.J Med Genet，2007，44（2）：131-135.

[5]Caduff RF，Svoboda-Newman SM，Ferguson AW，et al.Comparison of mutations of Ki-RAS and p53 immunoreactivity in borderline and malignant epithelial ovarian tumors［J］.Am J Surg Pathol，1999，23（3）：323-328.

[6]Hass CJ，Diebold J，Hirschmann A，et al.In serous ovarian neoplasms the frequency of K-ras mutations correlatea with their malignant potential［J］.Virehow Arechir，2003，434 （2）：117-120.（待查）

[7]Hu J，Liu Z，Wang X.Does TP53 mutation promote ovarian cancer metastasia to omentum by regulating lipid metabolism ［J］?Med Hypotheses，2013，81（4）：515-520.

[8]Grelewski PG，Bar JK.The role of p53 protein and MMP-2 tumor/stromal cells expression on progressive growth of ovarian neoplasms［J］.Cancer Invest，2013，31（7）：472-479.

[9]潘晓琳，高志斌，陆天才，等.卵巢癌中k-ras基因点突变及p53蛋白表达［J］.临床与实验病理学杂志，2005，21 （1）：66-69，72.

[10]Gershenson DM，Deavers M，Diaz S，et al.Prognostic significance of p53 expression in advanced-stage ovarian serous borderline tumors［J］.Clinical Cancer Research，1999，5 （12）：4053-4058.

Research on the expression and significance of Kras and P53 in epithelial ovarian carcinoma

ZHANG Yan1，LIU Jian1，MAO Guoxin1，LIU Yifei2（1Department of Oncology;2Department of Pathology，Affiliated Hospital of Nantong University,Jiangsu226001）

Objective:To investigate the expression and significance of Kras protein and P53 protein between normal ovarian tissue and epithelial ovarian carcinoma as well as their association with clinicopathologic features.Methods:90 cases were collected to study,including 80 cases with epithelial ovarian carcinoma and 10 cases of nonneoplastic ovarian tissue.Immunohistochemical methods were used to detect the expression of Kras and P53.Results:The positive expression rate of Kras between non-neoplastic ovarian tissue and epithelial ovarian carcinoma was 0.00%and 18.75%.The positive expression rate of P53 between non-neoplastic ovarian tissue and epithelial ovarian carcinoma was 0.00%and 38.75%.The expression of Kras in epithelial ovarian carcinoma was associated with the histologic grade amd the clinical stage,and not correlated with age and lymphatic metastasis.The expression of P53 in epithelial ovarian carcinoma was associated with the histologic grade,the clinical stage,and the lymphatic metastasis,and not correlated with age.Conclusions:The expression of Kras protein in low-grade epithelial ovarian carcinoma was higher than that in high-grade epithelial ovarian carcinoma and in the early stage,indicating that the role of Kras was important in the low-grade epithelial ovarian carcinoma.The expression of P53 protein in high-grade epithelial ovarian carcinoma was higher than that in low-grade epithelial ovarian carcinoma.The high expression of P53 protein usually was seen more in the late clinical stage,and associated with lymph node metastasis,which provided cogent evidence that the development of high-grade epithelial ovarian carcinoma was possibly related with P53 gene mutation.

epithelial ovarian carcinoma;Kras;P53;immunohistochemistry

R737.31

A

2014-07-03

1006-2440（2014）06-0602-04

张艳，女，江苏海门人，生于1985年5月，硕士，住院医师。研究方向：肿瘤化疗。 通信作者：刘益飞：bluefiime@qq.com