刘 颖，陈 怡，刘益飞

（1南通大学附属医院病理科，江苏226001；2南通市肿瘤医院头颈外科）

喉癌中VEGF和Cyclin D1的表达及意义

刘 颖1*，陈 怡2，刘益飞1

（1南通大学附属医院病理科，江苏226001；2南通市肿瘤医院头颈外科）

目的：检测血管内皮细胞生长因子（VEGF）和细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）在喉癌中的表达，探讨其与喉癌生物学行为及临床病理学特征间的关系。方法：采用免疫组织化学（EnVision法）检测喉癌84例中VEGF和Cyclin D1的表达，分析其与喉癌临床病理因素的关系及两者表达相关性。结果：（1）84例喉癌中VEGF阳性59例（70.2%)。Cyclin D1阳性46例（54.7%)。VEGF和CyclinD1表达均与喉癌分化程度、分期及淋巴结转移有相关性（P＜0.05）。（2）VEGF和CyclinD1在喉癌中的表达呈正相关（P＜0.05）。结论：VEGF和CyclinD1高表达在喉癌的发生发展中起重要作用，二者可协同作用。两者联合检测有助于揭示喉癌的发生发展机制。

喉癌；血管内皮细胞生长因子；免疫组织化学法；细胞周期蛋白D1

喉癌来源于喉粘膜上皮组织，绝大部分喉癌为鳞状细胞癌，是耳鼻喉科常见的恶性肿瘤[1]。血管内皮细胞生长因子（VEGF）为肿瘤血管生成因子，在许多肿瘤的发生发展中起重要的作用。细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）被视为癌基因，其过度表达可导致细胞增殖失控而恶性变。本文通过检测喉癌中VEGF 和Cyclin D1表达情况，探讨喉癌的发病机制，为喉癌治疗提供新的思路。

1 资料与方法

1.1 一般资料 喉鳞癌84例中，男77例，女7例，年龄42～83岁，平均61.8岁。其中低分化3例，中分化32例，高分化49例，淋巴结转移14例。另取不典型增生和声带息肉各5例作为对照组。所有患者为首发病例且临床病理学资料完整，术前未经生物治疗及放化疗。

1.2 方法 采用免疫组织化学（EnVision法）检测组织中VEGF和Cyclin D1蛋白的表达情况。VEGF以胞浆呈棕黄色为阳性表达。Cyclin D1以胞核呈棕黄色为阳性表达。每例随机计数10个高倍视野下500个细胞的阳性细胞数，以%表示阳性表达情况。无阳性细胞或阳性细胞<5%（－），5%～25%（+），26%～50%（++），>50%（+++）。

1.3 统计学处理 采用SPSS 17.0统计学软件分析数据。率的比较用χ2检验。两两相关性比较用Spearman等级相关分析。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 VEGF和Cyclin D1的表达 84例外喉癌中VEGF阳性59例（70.2%）。VEGF阳性信号除定位于癌细胞外，还定位于肿瘤间质新生血管内皮细胞。喉癌组与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05，χ2= 18.865）。Cyclin D1阳性46例（54.7%）。喉癌组与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05，χ2=10.724），见表1。

表1 喉癌组与不典型增生组、声带息肉组中Cyclin D1、VEG F的表达

2.2 CyclinD1和VEGF表达与临床病理因素之间的关系 见表2。

表2 CyclinD1、VEGF表达与喉癌临床病理因素的关系

2.3 VEGF和Cyclin D1表达的相关性分析 37例患者Cyclin D1与VEGF均呈阳性表达，16例均阴性表达，结果分析示：喉癌中Cyclin D1与VEGF的表达两者呈正相关（P＜0.05，r=0.245）。见表3。

表3 Cyclin D1与VEGF表达的相关性

3 讨 论

3.1 VEGF在喉癌中的表达及意义 VEGF家族基本成员包括：A、B、C、D、E和胎盘生长因子[2]。VEGF通过结合酪氨酸激酶特异性受体发挥作用，不仅促进血管内皮细胞增殖，诱导肿瘤内血管生成，它还是瘤细胞增殖的自分泌调控因子。本实验显示，在对照组中VEGF不表达，而喉癌组中VEGF阳性率为70.2%，T1T2组阳性34例（60.7%），T3T4组阳性25例（89.3%），低分化组阳性3例（100.0%），中分化组阳性27例（84.3%），高分组阳性19例（38.8%）。且随着TNM分期的增高，分化程度的降低，阳性率亦随之升高。由此可推测瘤细胞所产生的VEGF能导致其表面的神经菌毛蛋白磷酸化，进一步激活并经AKT通路和MAP/PI3激酶的活化，促进细胞的恶变和生长。

实验中淋巴结转移组 VEGF阳性表达率（100.0%）比无淋巴结转移组（64.3%）高，推测VEGF可能促进癌细胞的转移。其通过激活内皮细胞膜上相应受体，促进淋巴管及内皮细胞增生，增加淋巴管通透性。并使细胞间的粘附性下降，因而分泌VEGF的瘤细胞更容易侵犯淋巴管而发生转移[3]。结果显示，癌间质血管内皮细胞表达VEGF，在低分化鳞癌细胞间及癌巢周围显示新生血管密度高。可能在肿瘤发生初期，VEGF通过旁分泌作用于内皮细胞即靶细胞，诱导血管进入瘤组织。随着肿瘤的增大，VEGF又通过启动酪氨酸磷酸化通路，促进内皮细胞增生，支持新生血管，刺激肿瘤中血管生成，增加肿瘤内血管密度及通透性，从而满足肿瘤的快速生长和迁移的需要[4]。

3.2 Cyclin D1在喉癌中的表达及意义 Cyclin D1是细胞周期G1/S转换的重要正性调节因子[5]。其在肿瘤发生中有着多种变异方式，以基因扩增最为常见。研究显示Cyclin D1在正常组织中不表达或表达很少，而在很多恶性肿瘤组织中均有较高的表达。Ming等[6]研究肺癌100例中Cyclin D1的表达情况显示，Cyclin D1在低分化组中表达率明显高于高、中分化组；Ⅲ期表达率高于Ⅰ和Ⅱ期；淋巴结转移组的表达明显高于无淋巴结转移组。可见Cyclin D1在肿瘤发展、侵袭过程中发挥着重要的作用。Marsit 等[7]对头颈部鳞癌698例进行研究，结果显示Cyclin D1在头颈部鳞癌组织中均表达，T3、T4期肿瘤高表达，T1、T2期肿瘤不表达或低表达。提示Cyclin D1与肿瘤的分期相关，可作为头颈部鳞癌一个潜在的预后指标。

本文结果显示，喉癌组织中Cyclin D1阳性表达率显著高于对照组，随着分化程度的降低，Cyclin D1的表达率增高。结果与文献相符。本研究伴淋巴结转移者Cyclin D1表达率高于不伴淋巴结转移者，提示Cyclin D1表达上调与肿瘤侵袭性相关。本文Cyclin D1的表达与患者年龄、性别及分型间无相关性。

3.3 VEGF和Cyclin D1在喉癌中表达的相关性分析 刘红等[8]研究示：胃癌组织VEGF和Cyclin D1表达增加，Cyclin D1表达与胃癌分化程度相关。VEGF的表达与肿瘤大小、浸润深度、分化程度、分期及淋巴结转移相关。且Cyclin D1与VEGF的表达呈正相关。裴素霞等[9]对乳腺浸润性导管癌57例研究显示，乳腺癌中Cyclin D1和VEGF的表达增高，VEGF表达与组织学分级、淋巴结转移有关。本文结果示，喉癌中Cyclin D1与VEGF的表达呈正相关，与文献报道相符，提示两者在喉癌发生发展及转移中具有协同作用。推测CyclinD1高表达可能会上调VEGF的表达，机制可能是细胞周期调控点失控，瘤细胞快速生长而导致细胞缺氧，缺氧刺激瘤细胞致VEGF表达增高[9]。

[1]李楠.STAT3与VEGF在喉癌中的研究进展［J］.医学综述，2012，18（9）：1319-1322.

[2]Sano K，Hirashima M.VEGF receptors［J］.Nihon Rinsho.，2012，70 Suppl 8：31-35.

[3]王中亮，陈尧，梁传余.等VEGF-C和VEGFR-3在喉鳞状细胞癌及转移淋巴结组织中的表达［J］.临床耳鼻喉杂志，2004，18（11）：664-667.

[4]Lohela M，Bry M，Tammela T，et al.VEGFs and receptors involved in angiogenesis versus lymphangiogenesis［J］.Curr Opin Cell Biol，2009，21（2）：154-165.

[5]Dionysopoulos D，Pavlakis K，Kotoula V，et al.Cyclin D1, EGFR，and Akt/mTOR pathway.Potential prognostic markers in localized laryngeal squamous cell carcinoma［J］.Strahlenther Onkol，2013，189（3）：202-214.

[6]Ming J，Jiang G，Zhang Q，et al.Interleukin-7 up-regulates cyclin D1 via activator protein-1 to promote proliferation of cell in lung cancer［J］.Cancer Immunol Immunother，2012，61（1）：79-88.

[7]Marsit CJ，Black CC，Posner MR,et al.A genotype-phenotype examination of cyclin D1 on risk and outcome of squamous cell carcinoma of the head and neck［J］.Clinical Cancer Research，2008，14（8）：2371-2377.

[8]刘红，刘倩，王文奇.Cyclin D1和VEGF在胃癌组织中的表达及其临床意义［J］.实用癌症杂志，2004，19（1）：27-29，39.

[9]裴素霞，齐贵胜.乳腺癌组织中Cyclin D1和VEGF的表达及意义［J］.山东医药，2010，50（15）：58-59.

Expression of VEGF and CyclinD1 in laryngeal carcinoma and its significance

LIU Ying1,CHEN Yi2,LIU Yifei1
（1Department of pathology,Affiliated Hospital of Nantong University,Jiangsu 226001；2Department of Head and Neck Surgery,Nantong Tumor Hospital）

Objective:To detect the expression of VEGF and CyclinD1 protein in laryngeal carcinoma tissues and investigate their possible relationships with biological behavior and clinicopathological characteristics in laryngeal carcinoma.Methods:Immunohistochemical staining was used to examine the expressions of VEGF and CyclinD1 protein in 84 laryngeal carcinoma tissues.The relationships among the expression of VEGF and CyclinD1 in laryngeal carcinoma and clinical pathologic characters were analyzed.Results:(1)The total expression rate of VEGF was 70.2%in laryngeal carcinoma.The total expression rate of Cyclin D1 was 54.7%in laryngeal carcinoma.The VEGF and Cyclin D1 expression was closely correlated to tumor,differentiation、lymphatic metastasis and TNM staging（P＜0.05）.(2)The expression of Cyclin D1 was positively correlated with VEGF（P＜0.05）.Conclusions:The higher levels expression of Cyclin D1 and VEGF play an important role in the cancinogenesis and progression of laryngeal carcinoma.Combined analysis of these two proteins might be useful in disclosure of the mechanism of both the occurrence and development of laryngeal carcinoma.

laryngeal carcinoma；VEGF；Cyclin D1；Immunohistochemical staining

R739.65

A

2014-09-27

1006-2440（2014）06-0590-03

刘颖，女，汉族，江苏南通人，生于1978年1月，硕士，主治医师。研究方向：肿瘤病理。 通讯作者：刘益飞，Tel：0513-85052118。