葛 鹏 宋敬敬 兰杰 苏桂新 李晓亮 丁红梅 孙续国

分析多发性骨髓瘤伴发淀粉样变患者实验室检查指标的变化特征*

葛 鹏 宋敬敬 兰杰 苏桂新 李晓亮 丁红梅 孙续国

目的：报道多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）伴发骨髓淀粉样变实验室指标特征，进一步分析MM伴发淀粉样变患者实验室检查指标的变化。方法：临床诊断MM患者44例，骨髓涂片刚果红染色结合偏振光确定淀粉样变，将MM划分为淀粉样变阳性和阴性两组。分别对两组进行全血细胞、血清酶及免疫球蛋白含量测定。同时依据细胞形态学分析两组骨髓各系幼稚与成熟细胞及骨髓瘤细胞数量。结果：MM发现骨髓淀粉样变阳性患者免疫标志物IgG含量明显低于阴性组，κ和λ含量均值有降低趋势，但是未见统计学差异。淀粉样变阳性患者血清LDH和LDH1活性明显高于阴性组，而PT、Alb、PA、Glo、血液RBC、WBC和PLT数量等指标无统计学差异。结论：MM患者免疫球蛋白IgG含量降低及LHD和LDH1增高有可能作为辅助检查MM骨髓淀粉样变的标志物。

多发性骨髓瘤 淀粉样变 骨髓涂片

多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）患者逐年呈现上升趋势，大约占所有血液系统恶性肿瘤的10%，在50岁以上的人群中占3%以上，并以每年1%的恶化率转变为MM［1］。另外，随着医疗技术的进步MM患者生存时间逐渐延长，根据其他类型相关淀粉样变的形成特点，推测MM伴发淀粉样变发生率也将会增高。综合MM伴发淀粉样变的研究报道，淀粉样变沉积涉及的器官有骨髓淀粉样变、肾脏淀粉样变、肝脏淀粉样变、肌肉血管淀粉样变和舌组织淀粉样变［2-6］。分析MM伴发淀粉样变可以发生沉积的器官可直接影响辅助诊断伴发淀粉样变，具有临床价值。

目前对于MM形成淀粉样变的机制还未完全明了，但是大量研究报道MM患者组织内沉积淀粉样变具有免疫球蛋白抗原性［7-8］，说明其前蛋白为免疫球蛋白。另外，MM患者血液中IgM蛋白轻链二聚体含量明显增多［9-12］。但是伴发淀粉样变患者是否存在其他生物标志物的特征性改变缺少系统研究。

淀粉样变前蛋白形成淀粉样变纤维可沉积于组织器官，导致患者淀粉样变综合征［13］。临床判定组织淀粉样变的经典方法，主要依靠病理组织刚果红染色结合偏振光显微镜检查进行诊断。MM患者临床骨髓检查有两种基本方法，一种为骨髓涂片检查，另一种为骨髓病理检查［14］，两种方法各有检查适应症，但临床实验检查MM骨髓涂片检查法应用比较广泛［15］。

本研究系统探讨MM患者是否伴发骨髓淀粉样变，其造血细胞及血清实验室检查指标的变化特征，为临床筛选试验检查志物。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取天津医科大学肿瘤医院2012年3月至12月临床诊断多发性骨髓瘤（MM）患者44例，采集骨髓用于多发性骨髓瘤细胞检查和骨髓淀粉样变检查。同时采集静脉血液用于细胞学、血清蛋白及血清酶学检查。

1.2 方法

1.2.1 血清细胞学检测 SysmexXE-5100血细胞分析仪（日本，Sysmex公司）分别测定静脉血血红蛋白（Hemoglobulin，Hb）、红细胞计数（red blood cell，RBC）、白细胞计数（white blood cell，WBC）、血小板计数（Platelets，PLT）数量和白细胞各类型绝对值。

1.2.2 骨髓涂片制备 制备厚薄均匀细胞分布良好的骨髓膜涂片，骨髓膜面积为35 mm×65 mm，无水甲醇固定1 min，瑞氏染色3 min，加入pH 7.4 PBS缓冲液染色30 min，显微镜观察。

1.2.3 骨髓淀粉样变检测 骨髓涂片采用刚果红染色，涂片厚度与骨髓膜大小与上述相同，无水甲醇固定5 min，刚果红溶液染色30 min，苏木素溶液染色10 min，阿拉伯树胶封片，显微镜观察淀粉样变。

1.2.4 血清免疫学检测 西门子BNⅡ特种蛋白仪（德国，西门子公司）及配套试剂分别测定血清IgA、IgG、IgM、κ和λ5项免疫标志物含量。

1.2.5 血清酶学检测 HITACHI 7600全自动生化分析仪（日本，日立公司）及配套试剂，测定ALD、ALP、AST、ADA、mAST、LDH、LDH1等16项生化指标。

1.3 统计学分析

采用SPSS 19.0软件进行分析，组间正态分布采用t检验，率检验采用χ2检验，P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 MM患者骨髓伴发淀粉样变检测

所有临床诊断MM患者骨髓涂片进行刚果红染色并结合偏振光显微镜检查淀粉样变沉积，结果发现44例中有10例患者骨髓中出现刚果红阳性及偏振光出现蓝绿色荧光，确定为骨髓淀粉样变沉积（图1）。

2.2 淀粉样变阳性患者血液细胞学特征

分析MM患者伴发淀粉样变阳性及阴性两组患者静脉血中WBC、RBC、Hb、PLT数量，发现骨髓伴发淀粉样变患者WBC和单核细胞绝对值明显高于淀粉样变阴性组（P＜0.05），而RBC、Hb、中性粒细胞绝对值、PLT和淋巴细胞绝对值无统计学差异（表1）。

2.3 伴发淀粉样变患者血清生物标志物变化

骨髓淀粉样变阳性与阴性MM患者血清中能够指示骨代谢相关的ALP、5-NT等酶活性未发现具有统计学差异，而LDH和LDH1活性伴发淀粉样变组明显高于淀粉样变阴性组（表2）。

2.4 伴发淀粉样变患者血清免疫标志物特征

比较淀粉样变阴性与阳性两组之间血清中免疫标志物含量，发现两组在蛋白含量、白蛋白及系统性淀粉样变前蛋白PA含量均未发现具有显著性差异。免疫球蛋白单链κ和λ在淀粉样变阳性组均值低于阴性组，但是无统计学差异。免疫球蛋白类型只有IgG含量淀粉样阳性组低于阴性组（表3），其他均无统计学差异。

2.5 分析伴发淀粉样变患者骨髓细胞类型和比例

分析所有MM患者骨髓各种血细胞及骨髓瘤细胞的形态学特征和比例，发现伴发淀粉样变患者在原始浆细胞的比例明显增高，而幼稚浆细胞和成熟浆细胞的比例无明显增高（P＜0.05），其他幼稚粒细胞、幼稚红细胞的比例无显著性差异。

3 讨论

最近报道MM患者可以伴发组织器官淀粉样变沉积，可涉及肝脏、肾脏、骨髓、舌和血管淀粉样变［2-6］。因此选择何种组织器官用于检查淀粉样变，直接关系到临床MM患者伴发淀粉样变检出率。目前MM伴发淀粉样变缺少临床特征性辅助检查方法。本组先前建立了检查骨髓淀粉样变的方法，有助于辅助检查骨髓淀粉样变。

根据骨髓淀粉样变检查结果发现MM患者骨髓中淀粉样变可呈阳性，由此确定骨髓可用于检出MM患者伴发淀粉样变，并且大量研究报道MM淀粉样变的前蛋白为免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）［7-8］。

将MM患者划分为淀粉样变阳性与阴性两组［11］，由于这两组患者血液细胞学特征未见有明显差异，提示血液细胞学指标用于辅助检查MM伴发骨髓淀粉样变意义不大。进一步分析参与骨代谢相关酶类，结果LDH和LDH1活性明显高于阴性组，可能淀粉样变沉积导致细胞酶活性增加或通透性增加所致。

在伴发骨髓淀粉样变阳性组IgG含量明显低于对照组，而免疫球蛋白κ和λ虽然未见有统计学差异，但是均数低于阴性组，这一现象与FAP淀粉样变患者血清中淀粉样变前蛋白TTR水平有降低趋势现象相似。上述两项指标可能难以成为预测MM伴发淀粉样变的指标，但是有可能成为MM淀粉样变的参考指标。

MM骨髓典型的诊断特征为出现多发性骨髓瘤细胞，血浆中出现大量免疫球蛋白M。分析两组人群各类型骨髓细胞比例未见明显差异，因此单纯骨髓细胞分析难以成为预测MM伴发淀粉样变的指标。

本文报道MM伴发骨髓淀粉样变患者免疫球蛋白IgG含量降低及LDH、LDH1增高具有统计学意义，提示测定上述标志物可能有助于辅助检查MM伴发骨髓淀粉样变形成。

1 Therneau TM,Kyle RA,Melton LJ,et al.Incidence of monoclonal gammopathy of undetermined significance and estimation of duration before first clinical recognition[J].Mayo Clin Proc,2012,87 (11):1071-1079.

2 Wang XH,Zhang YL.1 case of multiple myeloma tongue amyloidosis misdiagnosed cases were analyzed[J].J Chinese PLA Postgrad Med Sch,2011,32(5):526-528.[王新花,张蕴莉.1例多发性骨髓瘤舌淀粉样变误诊病例分析[J].军医进修学院学报,2011,32(5): 526-528.]

3 Wang CY,Wang H,Liao YH,et al.Clinical Features of Multiple Myeloma Patients with Kidney Lesion and the Correlative Factors [J].Chinese General Practice,2011,14(10):3235-3237.[王成玉,王涵,廖蕴华,等.多发性骨髓瘤合并肾损害患者的临床特征及相关危险因素分析[J].中国全科医学,2011,14(10):3235-3237.]

4 Ikezawa Y,Oka K,Nagayama R,et al.Bence-Jones Protein-Type Myeloma With Amyloid Myopathy Presenting as Amyloidomas and Extensive Amyloid Deposits in the Propria Muscularis:A Rapidly Fatal Autopsy Case[J].Int J Surg Pathol,2012,20(1): 83-88.

5 Lee HJ,Chang SE,Lee MW,et al.Systemic amyloidosis associated with multiple myeloma presenting as periorbital purpura[J].J Der-matol,2008,35(6):371-372.

6 Mehta AA,Venkatakrishnan R,Jose W,et al.Multiple myeloma presenting as eosinophilic pleural effusion[J].Asia Pac J Clin Oncol, 2010,6(4):256-259.

7 Nagano S,Mori M,Kato A,et al.Therapeutic Effects of Lenalidomide on Hemorrhagic Intestinal Myeloma-associated AL Amyloidosis[J].Intern Med,2013,52(10):1101-1105.

8 Tosi P,Tomassetti S,Merli A,et al.Serum free light-chain assay for the detection and monitoring of multiple myeloma and related conditions[J].Ther Adv Hematol,2013,4(1):37-41.

9 Higeta D,Yokohama A,Osaki Y,et al.IgM-lambda multiple myeloma presenting with systemic amyloidosis[J].Rinsho Ketsueki, 2009,50(12):1711-1714.

10 Fernandez-Aguilar S,Sourtzis S,Chaikh A.IgM plasma cell myeloma with amyloidosis presenting as mammary microcalcifications[J]. APMIS,2008,116(9):846-849.

11 Gertz MA.Immunoglobulin light chain amyloidosis:2011 update on diagnosis,risk stratifi cation,and management[J].Am J Hematol,2011,86(2):180-186.

12 Siragusa S,Morice W,Gertz MA,et al.Asymptomatic immunoglobulin light chain amyloidosis(AL)at the time of diagnostic bone marrow biopsy in newly diagnosed patients with multiple myeloma and smouldering multiple myeloma[J].Ann Hematol,2011,90(1): 101-106.

13 Kyle RA,Gertz MA(1995)Primary systemic amyloidosis:clinical and laboratory features in 474 cases[J].Semin Hematol,1995,32(1): 45-59.

14 Petruzziello F,Zeppa P,Ciancia G,et al.Cytological and histological detection of amyloid deposits in bone marrow of patients aff ected by multiple myeloma[J].Leukemia&Lymphoma,2011,52(12): 2304-2307.

15 Petruzziello F,Zeppa P,Catalano L,et al.Amyloid in bone marrow smears of patients aff ected by multiple myeloma[J].Ann Hematol, 2010,89(5):469-474.

（2013-09-30收稿）

（2014-01-10修回）

（本文编辑∶周晓颖）

Variation in the characteristics of multiple myeloma with amyloidosis

Peng GE,Jingjing SONG,Jie LAN,Guixin SU,Xiaoliang LI,Hongmei DING,Xuguo SUN
Correspondence to:Xuguo SUN;E-mail:sunxuguo3@hotmail.com

Tianjin Medical University School of Medical Laboratory,Tianjin 300203,China

This work was supported by the National Natural Science Foundation of China(No.30973157)

Objective:Multiple myeloma(MM)complicated with bone marrow amyloidosis was previously reported.In this study,patients with MM complicated with amyloidosis were further analyzed using biochemical markers.Methods:A total of 44 patients diagnosed with MM were included in this study.Bone marrow smears stained with Congo red were used and polarized light was utilized to detect MM with amyloidosis.These smears were then divided into two groups:amyloidosis positive and amyloidosis negative.In these groups,blood cell,serum enzyme,and immunoglobulin content were determined.The morphological characteristics of bone marrow cells and the number of immature,mature,and myeloma cells were analyzed.Results:The immune marker IgG of the amyloidosis-positive patients with MM was significantly higher than that of the amyloidosis-negative group.Mean kappa and lambda contents decreased.Serum lactate dehydrogenase(LDH)and lactate dehydrogenase 1(LDH1)activities in the amyloidosis-positive group were significantly higher than those in the amyloidosis-negative group.Significant differences were also observed in several biochemical markers,including PT,Alb,PA,and Glo.Likewise,the index numbers of peripheral blood RBC,WBC,and PLT were significantly different.Conclusion:Immunoglobulin content was not correlated with amyloid deposition in patients with MM complicated with bone marrow amyloidosis.

multiple myeloma,amyloidosis,bone marrow

10.3969/j.issn.1000-8179.20131861

葛鹏 主管技师，硕生在读研究生，研究方向为临床检验诊断学。

天津医科大学医学检验学院（天津市300203）

*本文课题受国家自然科学基金项目（编号：30973157）资助

孙续国 sunxuguo3@hotmail.com

E-mail∶dreamskyer_2003@163.com