张大鹏，李 阳，崔乃强，王 丰

急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）时，肠黏膜破坏引起细菌移位、肠源性内毒素血症，通过门脉系统、淋巴途径，常造成远隔器官损伤，尤以肺损伤最为常见[1-2]。肝脏网状内皮系统可在一定程度上清除门脉系统中的细菌、内毒素，而肠淋巴可通过胸导管直接到达肺脏。乳糜池是胸导管起始处的膨大部，收集乳糜和来自全身的大部分淋巴[3]。本实验在建立大鼠AP模型的基础上，研究乳糜池结扎对急性胰腺炎相关性肺损伤的影响。

1 材料和方法

1.1 主要试剂 雨蛙素（Sigma 公司），大鼠IL-1、ICAM-1、Ang-2 ELISA 试剂盒（Cusabio 公司），髓过氧化物酶测试盒（南京建成），考马斯亮兰蛋白测定试剂盒（南京建成）。

1.2 模型制备及分组 选取健康雄性Wistar 大鼠，体质量250～300 g，由中国医学科学院实验动物研究所提供(编号SCXK 京2005- 0013)。随机分为4 组，每组10只，即A组（假手术组）、B组（AP组）、C组（乳糜池结扎组）、D 组（乳糜池结扎加AP 组）。大鼠适应性饲养1周，实验前12 h禁食，自由饮水。10%水合氯醛3 mL/kg 腹腔注射麻醉，固定，备皮消毒，行正中开腹手术。C、D组通过乳糜池结扎阻断肠淋巴回流，A、B组予剖腹手术后关腹。48 h后，C、D组采用皮下注射雨蛙素50 μg·Kg-1·h-1的方法建立AP模型，A、B组予等量生理盐水，连续6次。

1.3 检测指标 术后48 h 记录大鼠存活率。各组大鼠于造模后6 h处死，解剖游离出右主支气管，结扎，2 mL 生理盐水进行肺泡灌洗。5 min 后缓慢吸出，共2次。回收率80%以上。将2次灌洗液放入同一离心管，离心（1500×g，10 min，4 ℃），将离心管上清液分装，-80 ℃冰箱保存。

肺脏组织髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)测定 采用酶化学法，按试剂盒（南京建成生物研究所提供）说明操作。

肺泡灌洗液蛋白测定 采用考马斯亮兰法，按试剂盒（南京建成生物研究所提供）说明操作。

大鼠肺泡灌洗液白介素1（interleukin-1，IL-1）、细胞间黏附分子1（intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）、血管生成素-2（angiopoietin-2，ANG-2）测定 采用ELISA法，按试剂盒（Cusabio公司提供）说明操作。

1.4 病理学检查 取大鼠胰腺、右肺组织及末端回肠，置于10%福尔马林中固定，石蜡切片，HE 染色，光镜下观察。

1.5 统计学方法 数据均以均数±标准差(mean±SD)表示，应用统计软件SPSS 18.0进行统计描述、数据处理。计量资料采用完全随机设计单因素方差分析(one-way ANVOVA)，多个样本均数间的两两比较采 用LSD(Least Significant Difference)。P ＜0.05 有统计学意义。

2 结果

2.1 术后存活率 A、B两组与C、D两组比较，术后48 h存活率无显著性差异。见表1。

表1 各组大鼠术后存活率

2.2 肺脏MPO 水平 肺脏MPO 水平：A、C、D 组显著低于B组，D组显著高于C组，P＜0.05。见表2。

表2 各组大鼠肺脏MPO水平（mean±SD，U/g）

2.3 肺泡灌洗液蛋白含量测定 肺泡灌洗液蛋白含量,B、C、D 组显著高于A 组，D 组显著低于B 组，P＜0.05。如表3。

表3 各组大鼠肺泡灌洗液蛋白含量（mean±SD，g/L）

2.4 肺泡灌洗液IL-1、ICAM-1、Ang-2 水平 肺泡灌洗液IL-1 水平比较, B、D 组显著高于A、C 组，P＜0.05；肺泡灌洗液ANG-2水平比较, D组显著低于B组，P＜0.05。如表4。

表4 各组大鼠肺泡灌洗液IL-1、ICAM-1、ANG-2水平比较（mean±SD, pg/mL）

2.5 病理学检查 B、C、D组胰腺、末端回肠间质不同程度水肿伴炎细胞浸润。B、D 组肺间质水肿，肺泡壁断裂、融合，肺泡腔内可见炎细胞浸润，但D 组较B组损伤明显减轻。A、C组无明显病理变化。见图1～图3。

图1 各组大鼠胰腺组织病理表现(HE×200)

图2 各组大鼠回肠病理表现(HE×200)

3 讨论

图3 各组大鼠肺组织病理表现(HE×200)

急性胰腺炎时常因肺部炎症、肺毛细血管通透性增加而造成肺损伤[4]。多形核白细胞（polymorphonuclear, PMN）在炎症反应中起着重要的作用，构成宿主的第一道免疫防线，但PMN的过度激活将会对机体造成损伤。MPO是PMN聚集的特征酶，可用于评估其浸润程度。在制备大鼠AP模型6 h后，肺组织MPO 水平显著增高，存在PMN 的浸润，肺部炎症反应。而乳糜池结扎可明显降低肺组织MPO 水平，减少PMN浸润，减轻肺部炎症反应。

PMN浸润将破坏肺泡-毛细血管屏障，血管通透性增加，使富含蛋白的水肿液流入肺泡[5-6]。BALF中总蛋白含量的增加，是肺泡-毛细血管屏障破坏的重要标志[7]。在制备大鼠AP模型6 h后，BALF蛋白含量增加，提示肺泡-毛细血管屏障的破坏。而乳糜池结扎可明显减少BALF蛋白含量，减轻AP时肺泡-毛细血管屏障的破坏。

同时，一些炎症介质（细胞因子、趋化因子等）在PMN的激活、聚集过程中起着重要作用，将进一步促进PMN浸润[8]。IL-1在炎症早期产生，是一类最重要的促炎细胞因子，在肺损伤过程中发挥重要作用。在制备大鼠AP模型6 h后，BALF中IL-1水平明显增高，提示AP时引起肺组织炎症反应。但乳糜池结扎并未减少IL-1水平，这可能是由于IL-1在炎症早期产生，在炎症发展过程中，肺泡内含量已趋于稳定。

ICAM-1可介导PMN黏附，在其渗出、游走和浸润过程中发挥重要作用，参与炎症反应。而且，一些细胞因子（如IL-1）可上调ICAM-1 的表达[9]。本实验在制备大鼠AP模型6 h后，BALF中ICAM-1水平并未明显增高，但存在上升趋势，乳糜池结扎后存在ICAM-1 水平下降趋势。这可能是因为本实验采用雨蛙素诱导的AP 模型为水肿型胰腺炎，ICAM-1 高表达出现较晚。

ANG-2是一种血管生长因子，可选择性作用于血管内皮，导致血管破坏，增加血管渗漏。最近的研究发现，Ang-2与炎症之间存在联系，可上调内皮对细胞因子的反应[10-11]。本实验在制备大鼠AP 模型6 h 后，BALF 中ANG-2 水平并未明显增高，但存在上升趋势，而乳糜池结扎可明显降低AP 大鼠BALF中ANG-2水平，减轻肺损伤。这可能是因为本实验采用雨蛙素诱导的AP 模型为水肿型胰腺炎，ANG-2高表达出现较晚。

在试验中选用雨蛙素造模，形成大鼠水肿性胰腺炎模型，因此胰腺病理仅观察到胰腺组织水肿和炎性细胞浸润，而无胰腺实质性坏死。模型组所形成的肺损害也相对重型胰腺炎为轻。但由于轻型胰腺炎造模具有方法简便且存活时间长的优点，因此在本次试验中被采用。

采用乳糜池结扎方法阻断肠淋巴回流，大鼠恢复48 h 后通过雨蛙素诱导法制备AP 模型，将手术应激对实验的影响降低到最小。AP 早期即可出现肺组织损伤性病理形态学变化。肠淋巴阻断可通过减少PMN聚集，减轻肺部炎症反应，来保护肺泡-毛细血管屏障，从而减轻AP引起的肺损伤。实验中未进行淋巴液外引流，其目的为了观察淋巴回流受阻对回肠的病理学影响。回肠的病理学检查结构显示，急性胰腺炎造模及对乳糜池的结扎均对回肠产生间质水肿的影响。实验中也观察到，淋巴回流受阻的大鼠其粪便软化并颜色变浅。因此，肠淋巴途径可能是肠道与肺脏产生病理生理学交互影响的纽带，为“肺与大肠相表里”由肠及肺途径的作用提供了基础理论依据。但是肠淋巴中具体何种物质引起肺损伤，以及肺损伤的发病机制，还有待进一步的研究证实。

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