张晶晶,范开席

山东省医学科学院附属医院内三科 济南 250031

胃癌是世界上第四大常见恶性肿瘤，全世界有52%的胃癌患者在亚洲，其中41%的胃癌患者在中国[1]。在我国大中城市，胃癌死亡率男性为52.24/10万，居恶性肿瘤的第2位；女性为29.26/10 万，居恶性肿瘤的第3位。Artemin是神经胶质细胞源性神经营养因子家族配体(GFL)的一个亚型，是一种分泌性的磷酸化糖蛋白，具有促进细胞趋化、黏附和迁移的作用，可以介导各种类型神经元的存活、分化和迁移[2]。有研究[3]表明Artemin及其受体GFRα3/RET在恶性肿瘤细胞中表达升高，并且在介导肿瘤细胞的侵袭、转移中具有重要的意义。作者通过免疫组化技术检测胃癌组织中Artemin的表达，分析其与肿瘤患者临床病理特征的关系，探讨其在胃癌发生发展和转移中的作用。

1 材料与方法

1.1标本来源收集山东省医学科学院附属医院2008年1月至2012年12月手术切除的胃癌组织标本，所有患者术前均未接受过放疗和(或)化疗，术中常规取材，体积分数10%中性甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，4 μm厚连续切片。共122例患者入组，其中男90例，女32例；年龄32～81岁,<60岁66例，≥60岁56例；高、中分化32例，低分化62例；黏液腺癌12例，印戒细胞癌16例(统计分析时黏液腺癌和印戒细胞癌归为低分化癌)；96例伴有淋巴结转移，26例无淋巴结转移；按照2010年《AJCC癌症分期手册》7版分期标准进行分期：Ⅰ期6例，Ⅱ期28例，Ⅲ期80例，Ⅳ期8例。同时另取98例距离肿瘤5 cm以上的癌旁正常胃组织作对照。

1.2正常及胃癌组织中Artemin蛋白表达的免疫组化检测羊抗人Artemin单克隆抗体购自美国R&D公司，DAB显色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。切片脱蜡至水，枸橼酸修复，H2O2封闭内源性过氧化物酶。切片滴加羊抗人Artemin单克隆抗体(按1150稀释)，4 ℃过夜后复温，滴加二抗孵育20 min，DAB显色3～8 min，苏木素复染，脱水，中性树脂封片，显微镜下观察结果。以PBS代替一抗作阴性对照，以已知阳性片作阳性对照。

1.3结果判定染色结果由2名病理科医生采用双盲原则评定。Artemin染色以细胞膜和(或)细胞质出现明显的黄色或棕黄色颗粒为阳性细胞。在高倍镜下计数20个细胞，计算阳性细胞百分比：0～5%为0分，～25%为1分，～50%为2分，～75%为3分，～100%为4分；染色强度：不着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，黄褐色为3分。两者的乘积0～4分为阴性，5分及以上为阳性。

1.4统计学处理采用PEMS 3.1 进行分析。应用χ2检验和精确概率法比较胃癌、癌旁正常胃组织中Artemin蛋白表达的差异以及胃癌组织中该蛋白表达与临床病理特征的关系，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1胃癌和癌旁正常胃组织中Artemin蛋白的表达见图1。122例胃癌组织中有94例(77.1%)Artemin蛋白呈阳性表达，98例癌旁正常胃组织中阳性表达16例(16.3%)，差异有统计学意义(χ2=80.154，P<0.001)。

图1 胃癌(A)和癌旁正常胃组织(B)中Artemin蛋白的表达(SP，×400)

2.2胃癌组织中Artemi蛋白的表达与临床病理特征的关系见表1。

表1 胃癌组织中Artemin蛋白的表达与临床病理特征的关系 例

*：精确概率法。

3 讨论

胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，严重威胁着人们的身体健康。胃癌起病隐匿，早期常无特殊明显症状，也无明显的体征，部分患者仅有消化不良的症状，且极易发生侵袭和远处转移，故发现时多数已是晚期。晚期胃癌多失去了手术完全切除病灶的机会，预后极差，所以胃癌的早期诊断显得尤其重要。现代研究认为，胃癌是一种多基因疾病，许多基因参与了胃癌的发生发展，已经证实，BNIP3L、SLP-2与胃癌的生物学行为有关[4-5]。

人artemin基因位于染色体1p32-p33区，全长约3.9 kb。其开放阅读框编码的前体蛋白经蛋白酶切割后被加工成113个氨基酸序列的成熟Artemin蛋白。该蛋白易于和GFRα3受体结合，形成复合物，通过糖基-磷脂酰肌醇锚定于细胞膜上，激活Ret，从而传递信号[6]。Artemin也可以和GFRα1结合，已有研究[7]显示Artemin和信号传导通路中的这些分子联合对乳癌的进展有显著的意义。

有研究[8-9]发现，在一些消化系统肿瘤组织中Artemin高表达，而降低患者体内Artemin的表达水平能提高疗效并降低手术复发率；目前已证实Artemin和食管癌、胰腺癌的发生和发展密切相关，Artemin与其受体GFRα3能促进胰腺癌细胞的运动和侵袭，且随着Artemin表达水平的升高，胰腺癌的侵袭转移能力增强。也有研究[10]显示Artemin和GFRα3通过增加MMP-2表达和下调E-cadherin表达而增强胰腺癌细胞的运动和侵袭能力。Artemin在食管癌组织中的表达水平是正常食管组织的3倍，随着食管癌的不断恶化，其表达水平也不断升高[11]。有学者报道[12-13]Artemin能增强子宫内膜癌和乳癌的侵袭能力。精原细胞高表达Artemin可促使睾丸恶性肿瘤的发生[14]。另外，GFL受体Ret的突变可以导致甲状腺癌、嗜铬细胞瘤和多种内分泌肿瘤的发生[15]。

作者应用免疫组化的方法对胃癌组织进行了研究，结果显示Artemin在胃癌组织中的表达水平明显高于癌旁正常组织，提示Artemin蛋白的高表达与胃癌的发生有关。随着肿瘤浸润程度的加深，Artemin蛋白阳性表达率上升，说明该蛋白表达或表达升高以后胃癌的浸润能力增强。有淋巴结转移的胃癌组织中Artemin蛋白阳性表达率升高，提示Artemin蛋白表达水平可作为判断胃癌转移的指标之一。随着临床分期的升高，Artemin蛋白阳性表达率逐渐升高，说明Artemin蛋白在胃癌的进展中发挥了非常重要的作用，Artemin蛋白阳性表达率的高低也可作为判断临床分期的一个分子指标。

总之，Artemin蛋白可能参与了胃癌的发生发展，与胃癌的侵袭转移有关，因此其可作为胃癌早期诊断的一个依据，也可作为胃肿瘤恶性程度、转移潜能和预后判断的一个指标。

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