刘冰松 袁昕蓉

（1 辽宁中医药大学附属第四医院，辽宁 沈阳 110101；2 沈阳市食品药品检验所，辽宁 沈阳 110013）

HPLC法测定妇科调经颗粒中阿魏酸的含量

刘冰松1袁昕蓉2

（1 辽宁中医药大学附属第四医院，辽宁 沈阳 110101；2 沈阳市食品药品检验所，辽宁 沈阳 110013）

目的 采用 HPLC 法测定妇科调经颗粒中阿魏酸的含量。方法 采用 Diamonsil C18 （200mm×4.6mm，5μm）色谱柱，以甲醇 -0.1%磷酸水溶液（30 ∶ 70）为流动相，检测波长 320nm。结果 阿魏酸进样量在 0.0104 ～ 0.1040μg 范围内线性关系良好（r=0.9999），加样回收率为 98.89%，RSD 为 1.05%。结论 本方法准确灵敏，重复性好，可用于妇科调经颗粒中阿魏酸的含量测定。

阿魏酸；妇科调经颗粒；高效液相色谱法

妇科调经颗粒为2005年版中国药典收载品种。处方由当归、川芎、香附、白芍、赤芍、熟地等10味药材组成，具有养血，调经，止痛的功效，用于治疗月经不调，经期腹痛。原标准中含量测定指标为芍药苷。由于当归为方中主药，有必要对其进行含量测定。而且药典同期收载的妇科调经片的含量测定指标也是阿魏酸。所以我们选取了当归中的有效成分阿魏酸作为含量测定的指标。由于方中另一味药材川芎中也含有阿魏酸，所以本含量测定项是测定其中的当归和川芎两味药材中的阿魏酸。我们在参考有关文献[1,2]的基础上，制定了妇科调经颗粒有效成分—阿魏酸的含量测定方法，并进行了方法学考察，结果表明该方法灵敏、准确，重复性好，可用于该制剂中阿魏酸的含量测定。

1 仪器与试药

岛津LC-10A液相色谱仪，SPD-10A vp Plus检测器，N2000色谱工作站；TB-114 电子分析天平（丹佛）；阿魏酸对照品（含量测定用，中检所，批号：0773-9910），妇科调经颗粒（自制，批号：20081101、20081102、20081103）；甲醇为色谱纯，水为重蒸水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 检测波长的确定

精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇稀释至适当的浓度，在190～400nm波长范围内扫描。扫描结果显示：在320nm波长处，阿魏酸有最大吸收，故选择320nm为检测波长。

2.2 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Diamonsil C18 （200mm×4.6mm，5μm）流动相：甲醇-0.1%磷酸水溶液（30∶70）；检测波长：320nm；流速：1mL/ min；理论板数以阿魏酸色谱峰计不低于5000。

2.3 专属性试验

2.3.1 对照品溶液制备：取阿魏酸对照品适量，制成每1mL约含2.5μg阿魏酸的甲醇溶液，即得。

2.3.2 供试品溶液制备：取本品细粉约5g，精密称定，置于具塞锥形瓶里，精密加甲醇20mL，称量，超声处理（功率160W，频率50kHz）20min，放冷，再称重，加甲醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.3.3 阴性对照液制备：按工艺制备不含有当归与川芎的阴性颗粒，取细粉适量，照上述方法制备阴性对照液。

2.3.4 取对照品溶液、供试品溶液、阴性液各20μL，分别进样，结果显示，处方中其他药材及辅料不干扰阿魏酸的检出（图1）。

2.4 线性范围

精密称取阿魏酸对照品10.40mg，置100mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度。分别精密吸取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、5.0mL上述溶液，置100mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度。分别吸取20μL注入色谱仪中，测定峰面积。将进样量作为横坐标，峰面积作为纵坐标，制作标准曲线，得回归方程：Y=5459812.0x+1306.5 r=0.9999。结果表明：阿魏酸的进样量在0.0104～0.1040μg范围内时，其线性关系良好。

2.5 精密度试验

精密量取阿魏酸对照品溶液（浓度2.5μg/mL）20μL，连续进样6针，照上述色谱条件分析，测定峰面积，RSD为0.65%，说明仪器精密度良好。

2.6 溶液稳定性试验

精密量取供试品溶液20 μL，分别在0、2、4、6、8、10h进样，测定峰面积，RSD为0.95%，说明供试品溶液在10h内稳定。

2.7 重复性试验

取一批妇科调经颗粒（批号：20081101），制备6份供试品溶液，测定出样品中的阿魏酸含量为11.51μg/g，RSD为1.03%，符合规定。

2.8 加样回收率

精密称取样品（批号：20081101）细粉6份，每份约2.5g，每份精密加入对照品溶液2.5mL（10.40μg/mL），照供试品溶液制备方法操作，进样20μL，测定其加样回收率，结果见表1。

2.9 样品含量测定

取3批样品，按上述方法测定每批样品的阿魏酸含量，结果见表2。

文中加样回收率的问题，取同一浓度的供试品，用六个测定结果评价的方法是可行的。根据：中国药典2010版一部附录P130《中药质量标准分析方法验证指导原则》中指出，取同一浓度的供试品，用6个测定结果进行评价，或设计3个不同浓度，用9个测定结果进行评价。说明我文中的验证方法和专家所提的按3个量级加入的方法都是正确的。因此没有修改。在中药新药研制中，用6个结果评价的方法更常用，化药是必须要用9个结果评价的。

图1 HPLC 色谱图

表1 阿魏酸加样回收率试验结果

表2 三批样品含量测定结果

回收率表中“样品中的量”，个人认为其数值应该是取样量乘以已知含量，即所取的样品中总共含有多少目标待测物。如果按专家的意见换算成μg，其实上是进样体积的样品溶液中含有多少目标待测物，表1的第一列为“取样量”，如果在第二列的“样品中的量”给出的是进样的量的话，容易引起误解。同理，“加入量”、“测得量”也应该是总量，而非进样量。至于说“测得量应在线性范围内”应该指进样体积乘以进样浓度的乘积即进样量在线性范围内。我们在新药申报资料中一般按文中的方法进行加样回收率试验并进行数据整理，没有遇到过问题。在此，作者保留个人看法，但尊重专家和编辑的意见，将回收率表的第二、三、四列的数据换算成进样质量。

3 讨 论

进行色谱条件筛选时，曾经对乙腈-0.085%磷酸水溶液（17∶83）[1]，乙腈-0.3%乙酸水溶液（30∶70），甲醇-0.1%磷酸水溶液（30∶70）等不同流动相系统进行了比较，结果表明，以甲醇-0.1%磷酸水溶液（30∶70）作为流动相时，分离效果较好[2]，峰形对称，保留时间适当，作为妇科调经颗粒中阿魏酸的含量测定方法可行。

[1]国家药典药典委员会.中华人民 共和国药典(一 部 )[M].北京:化 学工业出版社,2005:461.

[2]蒋心惠,张丹.RP-HPLC法测定普藏红胶囊中阿魏酸的含量[J].华西药学杂志,2001,16(4):374-375.

R927.2

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：1671-8194（2013）10-0070-03