邹 亮，马育彪，傅秀娟，许丽佳，彭镰心，赵江林，赵 钢*

1成都大学生物产业学院，成都610106;2泸州医学院药学院，泸州646000

苦荞为蓼科荞麦属植物苦荞麦Fagopyrum tataricum(L．)Gaertn．的干燥成熟种子，又名鞑靼荞、万年荞、野南荞［1］，是我国的一种特色小杂粮作物。苦荞中富含芦丁、槲皮素、山萘酚等黄酮类化合物［2，3］，现代研究表明，苦荞具有降糖降脂、抗氧化、抗衰老及治疗心脑、血管系统疾病等多种功效作用［3-5］。

普通黄酮类成分的油水分配系数较小，人体吸收较差。而据许多研究报道，将天然活性成分与磷脂在一定条件下进行复合，可制得活性成分的磷脂复合物(phospholipid complex)。复合物的理化性质较原物质发生较大的改变，亲脂性增强;并由于磷脂是细胞膜的基本组成部分，与细胞膜的亲和力较强，从而能够使磷脂复合物的生物性质发生明显的改善，生物利用度大大提高［6，7］。

为更好的开发利用苦荞这一药食同源的植物资源，本研究设计将苦荞提取物与大豆磷脂制备成磷脂复合物，以有效提高芦丁等黄酮类物质的生物利用度，增强其功效作用。

1 试药与仪器

1．1 试药

苦荞提取物(成都大学生物产业学院自制，含芦丁19．2%，槲皮素5．1%);大豆卵磷脂购自上海棋阳进出口有限公司(S75);槲皮素对照品(批号:100081-200907)、芦丁对照品(批号:100080-200707)均购于中国药品生物制品检定所;无水乙醇、四氢呋喃、二氯甲烷、甲酸、正辛醇、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、氢氧化钠等均为分析纯，甲醇为色谱纯，水为超纯水。

1．2 仪器

LC-20A高效液相色谱仪:LC-20AB泵，SPDM20A检测器，LC-solutions工作站(日本岛津公司);RE-52B旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);B5-2型恒温磁力加热搅拌器(上海司乐仪器有限公司);数显恒温水浴锅HH-S(金坛市医疗仪器厂);BT403S、TB-214电子天平(赛多利斯科学仪器公司);KQ-100DE超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)。

2 试验方法与结果

2．1 苦荞总黄酮含量测定

色谱柱:Kromasil C18柱(4．6 mm × 150 mm，5 μm);流速:1．0 mL/min;检测波长:280 nm;柱温:30℃;流动相:甲醇-0．2%甲酸溶液(50∶50);进样量:10 μL。

2．1．2 样品的测定

对照品溶液的制备:分别精密称取芦丁和槲皮素对照品适量，甲醇溶解稀释制成每1 mL含芦丁0．048 mg，含槲皮素0．012 mg的混合对照品溶液。

供试品溶液的制备:精密称取制备好的磷脂复合物约40 mg，置于50 mL量瓶中，加甲醇适量，超声30 min，取出，冷却至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

取上述对照品溶液和供试品溶液10μL，按照拟定的色谱条件检测。

2．2 制备工艺评价标准的建立

利用苦荞提取物不溶于二氯甲烷，而磷脂与苦荞提取物磷脂复合物均易溶于二氯甲烷的特性，将一定量的苦荞提取物与磷脂在一定条件下反应后，减压除去反应溶剂，然后再加入适量二氯甲烷，充分溶解其中的磷脂及复合物，过滤，收集滤液。将二氯甲烷于水浴蒸干，收集固体，测定总黄酮的复合率。

总黄酮含量=芦丁含量+槲皮素含量

《商品学》教学质量评估多以试卷的形式，考察的内容以理论知识为主，不能有效的了解到学生是否能学以致用、举一反三，目的性太差。《商品学》课程中实行实践教学后，实践教学成果的相关信息如何反馈、实践教学的质量如何评估也是一个待解决的难题。

按下式计算黄酮复合率:

2．3 单因素影响试验

2．3．1 反应溶剂

当苦荞提取物与磷脂的质量比为1∶2，苦荞提取物的浓度为1mg/mL时，在室温下反应8 h的条件下，分别以无水乙醇、四氢呋喃、二氯甲烷-甲醇(6∶1)作为反应溶剂，进行溶剂的选择。试验结果见表1。

表1 溶剂对复合率的影响(n=2)Table 1 The effect of solvent on the complexing rate(n=2)

结果显示，以四氢呋喃和无水乙醇为溶剂时，苦荞总黄酮与磷脂的复合率较高，考虑到试验中四氢呋喃制得的样品呈液态状，比较难以干燥，在一定程度上影响了结果的准确性，且四氢呋喃毒性比较大、价格贵，故选用无水乙醇作为反应溶剂。

2．3．2 提取物浓度的影响

以无水乙醇作为反应溶剂，提取物与磷脂的质量比为1∶2，室温，反应时间8 h，考察提取物的反应浓度分别为0．5、1．0、2．0 mg/mL 时的复合率。试验结果见表2。

表2 提取物浓度对复合率的影响(n=2)Table 2 The effect of extractions concentration on the recombination rate(n=2)

结果显示，提取物反应浓度较高时，复合率较高，但是当反应浓度为2 mg/mL时，将反应产物用二氯甲烷溶解过滤时，过滤较为困难，考虑到实际生产中缩短生产时间，节约生产成本，且2 mg/mL与1 mg/mL的复合率差异较小，因此选用1 mg/mL的提取物浓度进行反应。

2．3．3 苦荞提取物与磷脂的质量比

以无水乙醇作为反应溶剂，苦荞提取物的浓度为1 mg/mL，室温，反应时间8 h，分别对苦荞提取物与磷脂反应的质量比1∶1、1∶2、1∶3 的复合率进行考察。结果见表3。

表3 提取物与磷脂比对复合率的影响(n=2)Table 3 The effectofmass ratio of the extracts and phopholipid on the complexing rate(n=2)

结果表明，随着苦荞提取物与磷脂的反应质量比例越高，复合率越高，但是试验显示，当二者的比例为1∶3时，反应得到的产物难以完全干燥，对试验结果有所影响，且增加生产难度和生产成本。因此，选定苦荞提取物与磷脂的反应质量比为1∶2。

2．3．4 反应温度的影响

以无水乙醇作为反应溶剂，提取物的浓度为1mg/mL，提取物与磷脂的质量比为1∶2，反应时间8 h，分别在反应温度为室温、40、50℃时进行考察。试验结果见表4。

表4 温度对复合率的影响(n=2)Table 4 The effect of reaction temperature on the complexing rate(n=2)

结果显示，反应温度为40℃和50℃时，其复合率明显较室温有所提高，且由于磷脂在高温情况下稳定性较差。因此选择反应温度为40℃。

2．3．5 反应时间的影响

以无水乙醇作为反应溶剂，提取物的浓度为1mg/mL，提取物与磷脂的质量比为1∶2，反应温度为40℃，对反应时间分别为8、16、24、36 h进行考察，试验结果见表5。

表5 反应时间对复合率的影响(n=2)Table 5 The effect of reaction time on the complexing rate(n=2)

试验结果显示，苦荞提取物与磷脂在24 h时，反应复合率较高，与36 h差异不大，因此初步将反应时间定为24 h。

2．4 制备工艺的确定与验证

根据上述单因素试验的考察结果，确定苦荞提取物磷脂复合物的优化工艺为:反应溶剂为无水乙醇，提取物的浓度为1mg/mL，提取物与磷脂的质量比为1∶2，反应温度为40℃，反应时间24 h。按照优化工艺制备3批苦荞提取物磷脂复合物，结果见表6。

表6 工艺验证结果Table 6 Validation results of the preparation condition

以上结果表明，所确定的苦荞磷脂复合物制备工艺稳定，复合率较高，适合用于制备苦荞提取物磷脂复合物。

2．5 苦荞提取物磷脂复合物表观油水分配系数的测定

称取苦荞提取物与苦荞提取物磷脂复合物适量，分别用正辛醇溶解，离心后待用。精密移取10 mL各样品的正辛醇溶液及不同pH的水溶液，置于50mL的锥形瓶中，用磁力搅拌器搅拌8 h后，静置，取上层正辛醇溶液转移至离心管中，3000 rpm离心10 min。移取上清液5mL，按2．1．2项下的样品测定方法处理，按上述色谱条件检测，计算总黄酮的含量。结果见表7。

表7 苦荞提取物及复合物中总黄酮表观油水分配系数测定结果Table 7 Results of partition coefficient of total flavone in tartary buckwheat extracts and its phospholipid complex

结果表明，制成磷脂复合物以后，总黄酮在正辛醇 和不同pH值的水溶液中表观油水分配系数提高了约1．5～2．5倍，说明制成磷脂复合物以后总黄酮的脂溶性有了明显的提高。

3 结论与讨论

本试验以无水乙醇作为反应溶剂，采用搅拌法制备了苦荞提取物磷脂复合物，得出制备复合物的最佳工艺为提取物的浓度为1 mg/mL，提取物与磷脂的质量比为1∶2，反应温度40℃，反应时间24 h，复合率能够达到80%以上。同时分别测定了苦荞提取物与苦荞提取物磷脂复合物在不同pH溶液中总黄酮的表观油水分配系数，结果表明，形成复合物后确实提高了苦荞提取物中黄酮类成分的脂溶性，与文献［9，10］报道的天然活性成分形成磷脂复合物后可增强亲脂性的结论相符。

试验结果显示，苦荞提取物的复合率在80%以上，同时工艺验证结果证明该复合条件重复性较好。但与文献报道其他药物(如靛玉红［9］、吴茱萸碱［10］等)的复合率往往能达到90%以上相比要低一些，经初步分析，可能是由于苦荞提取物中的其他成分减弱了芦丁、槲皮素等黄酮化合物和磷脂的分子键合，以致苦荞提取物的复合率未能有进一步的提高。

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