魏金凤，顾海鹏，康文艺

河南大学中药研究所，开封475004

枸骨叶为冬青科植物枸骨(Ilex cornutaLindl)的叶，又名:猫儿刺、枸骨刺、八角茶、老鼠刺和十大功劳叶等，分布于甘肃、陕西、江苏、河南和湖北等地［1］。文献报道枸骨叶中含有熊果酸、齐墩果酸、羽扇豆醇、皂苷、三萜类和多酚类等物质［2-7］，其中邢莹莹等人以水蒸气蒸馏法对枸骨叶中的挥发性成分进行研究，鉴定出了枸骨叶中的酸、酯、醇、酮和酰胺等化学成分［8］。药理研究发现枸骨叶具有抗菌活性、心血管作用、较强的抑制T淋巴细胞活化、增殖的作用，以及对小鼠的胚胎毒性［9-11］。本文首次应用顶空固相微萃取技术提取枸骨叶挥发性成分进行研究。

1 材料与仪器

枸骨叶于2010年7月采集于河南开封，由河南大学中药研究所李昌勤副教授鉴定为冬青科植物枸骨(Ilex cornutaLindl)的叶，标本存于河南大学中药研究所。

美国安捷伦公司GC 6890 N GC/5975 MS气相色谱-质谱联用仪;美国Supelco公司手动固相微萃取(SPME)装置;萃取头为65μm聚二甲基硅氧烷(PDMS-DVB);C6-C26正构烷烃(Alfa Aesar)。

2 方法

2．1 SPME 取样

使用前先将SPME的萃取纤维头在气相色谱的进样口老化10 min，老化温度为250℃，载气体积流量为1．0 mL/min。取枸骨叶0．7 g，置于5 mL 的样品瓶中，盖上盖子，插入65μm PDMS-DVB萃取纤维头，于50℃下顶空取样30 min后，取出后立即插入色谱仪进样口(温度250℃)脱附1 min。

2．2 GC-MS 分析条件

2．2．1 气相色谱

DB MS石英弹性毛细管柱(0．10μm×30．0 m× 250 μm)，载气为高纯氦气(99．999%)，流速1．0 mL/min，进样口温度250℃;色谱柱初始温度50℃(保持2．0 min)，以8℃/min升温至120℃(保持2 min)，最后以4℃/min升温至220℃(保持5 min)。分流进样，分流比为10∶1。

2．2．2 质谱条件

电离方式:EI源，电离能量70 eV;离子源温度为230℃;四极杆温度150℃;传输线温度为280℃;电子倍增器电压1588V。质量扫描范围30～400 amu，谱图检索:采用NIST08．L进行检索。

2．2．3 保留指数测定

按照文献［13，14］进行 KI(Kovats 保留指数)计算。

3 结果与讨论

HS-SPME-GC-MS从枸骨叶中鉴定出32个化合物，占总峰面积的91．30%，峰面积归一法确定各组分质量分数。结果列于表1。

表1 枸骨叶挥发性成分Table 1 Volatile components of Ilex cornuta Lindl leaves

31 Nonadecane 十九(碳)烷 C19 H40 97 1．50 32 Butylisobutyl phthalate 邻苯二甲酸二异丁酯 C16H22 O4 96 1．49 Total 91．30

本实验从枸骨叶中分离鉴定出的化合物由表1所示，枸骨叶主要挥发性成分是植酮(19．64%)，其次是二氢猕猴桃内酯(5．38%)、壬醛(5．10%)、六氢假紫罗酮(3．94%)、己醛(2．69%)和香叶基丙酮(2.22%)。

本文利用SPME技术对枸骨叶挥发性成分提取，与邢莹莹等以水蒸气蒸馏法提取差异大，水蒸气蒸馏法得到的成分主要是棕榈酸(31．02%)和邻苯二甲酸甲酯(14．22%)以及萜类衍生物(11．03%)为主［8］，本文得到的主要为饱和酮类化合物。

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