曲义坤，徐 剑，张英海，刘伟新 (佳木斯大学附属第一医院普通外科，黑龙江佳木斯154002)

胃癌是一种常见的消化道肿瘤，也是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，并且有逐渐上升趋势，日益年轻化。浸润转移是肿瘤的最重要恶性特征之一，是胃癌治疗失败导致死亡的主要原因［1］。本课题应用免疫组化技术检测胃黏液癌组织和癌旁组织中RAB5A的表达水平，并观察它们与临床病理特征的关系，旨在探讨各指标在胃癌发生、发展、转移中的作用，为胃癌的治疗提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取佳木斯大学附属第一医院2010年12月至2012年12月手术切除胃黏液腺癌标本60例以及22例正常胃黏膜组织。所有组织均经HE染色病理证实。60例患者中男46例，女36例，年龄25～82岁，平均年龄54.82岁，术前均未进行放疗、化疗及药物治疗等抗肿瘤措施。

1.2 方法

1.2.1 免疫组化染色 组织经10%中性甲醛固定，蜡块4 μm连续切片，贴于预先涂有APES的载波片上，捞片后置烤箱58～60℃，30～60 min以使切片紧密粘附，备用;置入枸橼酸盐缓冲液中加热抗原修复;加3%过氧化氢溶液，室温下孵育10 min，以阻断内源性过氧化物酶;PBS冲洗3次，每次5 min;滴加10%山羊血清室温封闭20 min;复温后PBS冲洗3次，每次5 min;加二抗37℃恒温水浴箱下孵育20 min;PBS冲洗3次，每次5 min;加酶标SABC，室温下孵育30 min;PBS冲洗3次，每次5 min;加新配制的DAB显色液，显微镜下观察，阳性显色为棕黄色;自来水冲洗，苏木素复染，0.1%盐酸分化，自来水冲洗，PBS冲洗返蓝;梯度酒精脱水干燥，中性树脂封片。

1.2.2 RAB5A蛋白过表达测定 RAB5A免疫反应阳性细胞为棕黄色，主要存在于细胞质或细胞膜。免疫组化结果采用半定量记分法判定［2］，按阳性着色程度评分:0分为无着色，与背景色一致;1分为浅黄色，略高于背景色;2分为棕黄色，明显高于背景色;3分为棕褐色。按阳性细胞所占比例评分:0分为阴性;1分为小于10%;2分为11% ～50%;3分为51% ～75%;4分为大于75%。两者乘积判定阳性结果:0～2分为阴性(-);3～4分为弱阳性(+);5～8分为中度阳性(++);9～12分为强阳性(+++)。

1.2.3 统计学处理 采用SPSS 16.0软件进行χ2检验或者Fisher确切概率检验，相关性检验采取Spearman秩相关分析法，显著性水准取0.05。

2 结果

2.1 在胃黏液癌、癌旁组织及正常黏膜组织的表达

RAB5A阳性染色主要被定位于细胞浆或细胞膜上，镜下呈黄色或黄褐色颗粒，阳性表达结果见图1。42例胃黏液腺癌组织中RAB5A(+)14例，RAB5A(++)22例，阳性表达率为85.8%;18例印戒细胞癌组织中RAB5A(+)7例，RAB5A(++)10例，阳性表达率为94.4%;60例癌旁组中有10例表达均呈弱阳性，RAB5A的阳性表达率为11.2%。癌旁组织中少见阳性表达，主要表现为轻度不典型增生上皮;22例正常黏膜组织中无RAB5A阳性表达。RAB5A在胃黏液癌、癌旁组织及正常黏膜组织的表达实验结果见表1。

图1 胃癌组织中RAB5A的表达(SABC×200)

表1 RAB5A在胃黏液癌、癌旁组织及正常黏膜组织的表达

2.2 在胃黏液癌的表达与临床病理因素的关系

通过对患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移以及腹膜种植情况进行综合评价得出RAB5A蛋白阳性表达与临床病理因素之间的关系，见表2。在胃黏液癌中RAB5A的表达与性别、年龄、肿瘤大小均无关(P＞0.05)，浸润深度、淋巴结转移以及腹膜种植情况与RAB5A蛋白的表达有着密切的关系。侵及浆膜组织，RAB5A蛋白的阳性表达率为96.7%，而未及浆膜组织57.1%，两者之间比较有极显著性差异(P＜0.01);有淋巴结转移RAB5A蛋白的阳性表达率为90.9%，无淋巴结转移RAB5A蛋白的阳性表达率为63.7%，两者比较有极显著性差异(P＜0.01);有腹膜种植情况RAB5A蛋白的阳性表达率为86.2%，无腹膜种植情况RAB5A蛋白的阳性表达率为70.9%，两者比较有显著性差异(P＜0.05)

表2 RAB5A在胃黏液癌的表达与临床病理因素的关系

3 讨论

近年来，胃癌的发病率逐年递增。针对胃癌的研究逐渐增多，包括早期淋巴结转移与术式关系的选择及中药在肿瘤方面的应用等［3-4］;也有腹腔镜下进展期胃癌的治疗［5］;针对基础性研究也很多，如CD105在胃癌中的表达［6］等，而早期诊断尤为重要，目前还没有特异指标。RAB5A是重要的蛋白质，RAB5A基因定位于人类染色体3p24～24之间，其编码蛋白是RAB家族的成员之一，是蛋白质跨膜运输通路的信号调控者［7］。李钰等［8］发现 RAB5A基因在具有高转移潜能的人肺腺癌细胞系Anip973中高表达，在其低转移潜能的母系AGZY83-a中低表达，是一个肺癌转移相关基因。在体内的细胞膜，质膜运输和GDP/GTP周期的关键调控因子的功能所涉及的细胞在调节蛋白质的运输中发挥了至关重要的作用［9-10］，可引起细胞生长调控紊乱，无限生长、增殖，最终导致细胞癌变。RAB5A基因的突变，使细胞生长调控紊乱，无限繁殖，并且RAB5A也可以使粘附分子受体下调，从而可以使细胞间的粘附力降低，从而导致了肿瘤的转移过程［11］。本实验表明RAB5A在正常胃黏膜组织、胃癌和癌旁组织中的阳性表达率为0%、85.8%和11.2%，差异均具有统计学意义。因此，可以推断出胃黏液腺癌的发生、浸润程度、淋巴结转移情况以及腹膜种植情况可能与RAB5A的表达增加有关。实验结果表明RAB5A在胃黏液癌和印戒细胞癌中表达有明显差异，印戒细胞癌中的表达明显高于胃黏液癌，说明RAB5A也可能是肿瘤分化差的重要标志。RAB5A在未侵及浆膜的胃黏液癌中的表达明显低于浸润到浆膜层的表达，提示 RAB5A可能与肿瘤的浸润深度有关。RAB5A在有淋巴结转移的组织中表达高于无淋巴结转移，提示RAB5A也可能是肿瘤转移进展的标志。

本组实验发现RAB5A蛋白的表达与胃癌的病理分型、浸润深度、淋巴结转移以及临床分期均存在明显相关性。而在临床中胃癌患者肿瘤的组织类型、临床分期、浸润深度、淋巴结是否转移恰恰是决定患者总体生存期 (overall survival，OS)的重要因素。因此RAB5A的阳性表达与胃癌预后较差成正相关性。

综上所述，RAB5A参与了胃癌的发生及发展，同时它们的过量表达与胃黏液癌的侵袭和转移等密切相关，检测RAB5A在胃癌组织的表达对评估胃黏液癌浸润转移风险具有重要意义，可作为估计胃癌预后的参考指标。

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［5］甄四虎，侯会池，王少文，等.腹腔镜辅助下进展期胃癌根治术16例临床分析［J］.局解手术学杂志，2011，20(4):405-406.

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