史丽华

（辽宁医学院畜牧兽医学院，辽宁 锦州 121001）

2011年5月下旬，义县某养羊户有7只山羊羔突然发病，数分钟内死亡2只，2～4h内死亡3只，2天内又死亡2只，病死率100%。死亡的山羊是膘情较好的2月龄大羔。死亡分散在圈舍、放牧途中和放牧地。发病后畜主自行购入阿莫西林进行治疗，但无效果。该群山羊膘情较好，以往没见任何疾病，也没打过任何疫苗和驱过虫。羊只平时采食良好，全天放牧不补料，饮水即在沟塘边的积水坑。

1 临床症状

羊群在放牧过程中有的山羊羔突然发病，病初相继出现2只山羊离群倒地抽搐，很快死亡，无明显症状。有2只山羊，肌肉抽搐，磨牙，口涎增多，眼球转动，倒地，四肢做划泳运动，随后头颈显著抽缩，2～4h内死亡。有1只山羊早期症状为步态不稳，以后卧倒，并有感觉过敏，流涎，上下颌“咯咯”作响，继而昏迷，角膜反射消失，3～4h内死亡。有2只山羊精神不振，全身无力，病初步态不稳，以后倒卧，继而昏迷，在2天内衰竭死亡。

2 病理剖检变化

死亡的山羊尸体腐败迅速，腹部臌胀，可视黏膜发绀。剖检3只，真胃膨满，充满食糜，在胃底腺区有出血，黏膜坏死、溃疡。小肠黏膜出血，特别是浆膜下严重出血，浆膜表面呈暗红色，似血肠，切开肠管见黏膜呈暗红色血样，肠黏膜坏死。肠系膜淋巴结肿大、出血。肾肿大、软化有波动感，有2只是一侧性，另1只是两侧性的。心包液、胸腔液、腹腔液增多，渗出液呈澄黄色透明，暴露在空气后不久凝结呈胶冻状，心脏扩张，心肌柔软，心内膜、心外膜呈点状或斑状出血。有1只羔羊的肺充血、水肿，肺的被膜下有出血点。胆囊扩张，积有多量淡绿色稍黏稠的胆汁。

3 实验室诊断

3．1 试验材料 无菌条件下采集病死羊的心血、肝、脾、肾脏等病料。

革兰染色液、葡萄糖血液琼脂平板培养基、肝片肉汤培养基、绵羊血琼脂平板培养基、牛乳培养基，上述染色液和培养基按常规方法制备。微量糖发酵管，购自上海医化所，产气荚膜梭菌定型血清，购自中国农业科学院兰州兽医研究所。试验动物用豚鼠，购置医学院动物中心。

3．2 试验方法

3．2．1 细菌形态学检查 无菌采集病死羊心血、肝、脾、肾，进行涂片和触片，进行革兰染色，镜检。

3．2．2 细菌分离培养 将无菌采集的心血、肝、脾、肾病料分别接种在肝片肉汤及葡萄糖血液琼脂平板上，在厌氧环境中，置于37℃恒温箱中培养8～24 h，观察细菌培养特性。取上述培养物涂片镜检，观察细菌形态特征。

3．2．3 纯培养 钓取葡萄糖血液琼脂平板上典型菌落，划线接种于绵羊血琼脂平板上，37℃培养8～12h。

3．2．4 生化试验 将绵羊血琼脂平板上细菌分别移种于葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、果糖、淀粉发酵管及牛乳培养基，37℃培养8～12h后观察结果。

3．2．5 肠毒素检查 取病死羊回肠的内容物100 mL，加4倍生理盐水稀释，充分混合后，3 000r／min离心10min，取其上清液分别给2组豚鼠腹腔注射0．2mL，0．5mL，每组5只。观察其发病死亡情况，以判断是否有肠毒素存在。同时设3只豚鼠为对照组，分别注射生理盐水0．5mL。

3．2．6 毒素定型试验 用前述回肠内容物上清液各0．4mL分别与A、B、C、D型产气荚膜梭菌定型血清各0．1mL混合，置于37℃恒温箱内中和50 min。其后分别给5只试验豚鼠腹腔注射。同时另外给3只豚鼠单独注射0．4mL回肠内容物之上清液作对照。

3．3 试验结果

3．3．1 细菌形态学检查 经100倍油镜检查，涂片上均见有两端钝圆，革兰阳性大杆菌，单个存在或2～3个菌体相连的短链，有荚膜。

3．3．2 细菌分离培养特性 肝片肉汤培养基 经37℃培养8h后，肝片肉汤浑浊，有气泡产生；培养24h，管底形成白色沉淀物。葡萄糖血液琼脂平板培养基 经37℃培养8h后，形成圆形或圆盘形中央隆起的浅灰色菌落，有溶血环或双溶血环。取上述培养物涂片镜检，可见革兰阳性大杆菌，与病料涂片上的细菌形态一致。

3．3．3 生化试验结果 能发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、果糖，产酸产气，不分解甘露醇、淀粉。在牛乳培养基上产生“暴烈发酵”现象。上述生化反应结果符合产气荚膜梭菌的生化特性。

3．3．4 肠毒素检查结果 注射病死羊回肠内容物上清液的2组豚鼠分别于4h和10h后死亡，对照组健活。说明病死羊肠内有肠毒素存在。

3．3．5 毒素定型试验结果 注射A、B、C型血清（抗毒素）＋肠内容物（肠毒素）的豚鼠和只注射肠内容物的对照组豚鼠均先后死亡，只有注射D型血清＋肠内容物的豚鼠存活。据此可判断肠毒素为D型。

4 小结与讨论

4．1 根据流行病学、临床症状、病理剖检及实验室检验，诊断本次疫情为由D型产气荚膜梭菌引起的山羊肠毒血症。

4．2 当羊群中出现本病时，立即转移到高燥的地区放牧。避免喂食蛋白质过多的饲草、饲料，及鲜嫩多汁牧草，避免在沼泽地或水田放牧，放牧时避免饮坑沟中不清洁积水。

4．3 在常发病地区，应定期注射羊肠毒血症菌苗。