刘静静 刘巧玲

（河南省焦作市第二人民医院检验科，河南 焦作 454001）

化学发光法和酶联免疫吸附法检测丙型肝炎病毒抗体的观察与对比

刘静静 刘巧玲

（河南省焦作市第二人民医院检验科，河南 焦作 454001）

目的 分析和对比应用化学发光法（CLIA）和酶联免疫吸附法（ELISA）对检测丙型肝炎病毒抗体（抗 -HCV）准检率和临床意义。方法 收集临床血清标本 906 例，分别应用化学发光法（CLIA）和酶联免疫吸附法（ELISA）监测，并收集监测后阳性标本和可疑阳性标本。最后用第三代重组免疫印迹法（RIBA-3）进行确定再监测。结果 两种方法共筛选出血清标本阳性者 43 例，可疑阳性标本 4 例。其中CLIA 筛选监测出血清阳性者 21 例，确证为 20 例，1 例可疑阳性。后经 RIBA 重新确认监测为阳性。敏感性 100%。ELISA 筛选监测出血清阳性为 22 例，阴性者 3 例，确证后阳性为 19 例，后经 RIBA 重新确认监测后 1 例为阴性，2 例为阳性。敏感性为 95%。结论 CLIA 监测法较 ELISA 监测法灵敏、准确，使用 CLIA 提高了临床监测率，减少了漏诊现象。对于 CLIA 和 ELISA 监测法均显示可疑时，一定要应用 RIBA 再确诊定性。

丙型肝炎抗体；化学化光法；酶联免疫吸附法；敏感性

近年，丙型肝炎的感染例数逐年上升，已成为一种危及全球性的感染性疾病，其危害性很大，严重地影响了民众的健康。目前，各级医院大多采取酶联免疫吸附法监测筛选丙型肝炎的抗体为感染依据。化学发光法具有灵敏度高、线状范围宽等特点已经开始应用于临床。现就两种监测方法对HCV诊断检测结果进行了有目的地观察和比较性分析，现将方法报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 样本收集

2012年1月至2012年6月之间我院收集的住院患者血清样本共906份，男，556例，女350例，年龄在25～70岁，平均年龄（47±0.5），抽血4h内分离血清。4℃保存，次日进行CLIA和ELISA监测。收集CLIA/ELISA检测阳性血清标本及可疑血清标本（S/CO的临界范围，0.9＜S/CO＞1.0）分别置于-20℃条件下集中保存[2]。

1.1.2 仪器试剂

ELISA抗-HCV检验诊断试剂，由北京万泰生物制剂有限公司提供。高灵敏度化学发光法免疫分析仪型号为（GL-200A）由北京艾兰科技提供。另配有相关配套的HCV抗体诊断盒。

1.2 方法

1.2.1 化学发光法

应用间接化学发光免疫分析原理，测定其发光值（RLU），与其临界值（CO）做比较，判断血清样本中是否含有GCV抗体，结果判断以S/CO≥1.0为阳性，S/CO＜1.0为阴性。

1.2.2 酶联免疫吸附法

采用间接ELISA法检测样本血清中有无HCV抗体，结果判断以S/CO≥1.0为阳性，S/CO＜1.0为阴性。

1.2.3 第三代重组免疫印迹法

RIBA-3是临床用于确诊丙型肝炎的一种最后检测工序。一般用于筛查抗HCV假阳性或疑似阳性病例的进一步补充试验，通过显色带判断标本的阴性和阳性。其确认率高，但工序繁杂，操作次数多，代价昂贵，临床多采取CLIA和ELISA监测，对疑似病例或假阳性者多用此法做鉴别确诊。

2 结 果

化学发光法CLIA和酶联免疫吸附法ELISA检测结果，共检测血清样本906例，所有阳性及可疑阳性标本为47例，均已经过RIBA-3复检，其阳性结果基本一致，阳性结果最后确定为42例，阳性率为97%。①检测结果：CLIA检测阳性结果为21例，可疑阳性1例；用RIBA-3法确证法确证，1例可疑阳性者被确证为阳性，合计阳性为22例。②检测结果：ELISA检测阳性结果为22例，阴性3例；用RIBA-3法确证法确证，20例为阳性，5例为阴性，合计阳性为20例。经过以上两各检测结果的比较可以清楚看出，CLIA的检测敏感性为100%，ELISA的检测敏感性为95%。

3 讨 论

HCV为单股正链线状RNA病毒，一般是在输血后感染，不但可以损伤肝细胞，还常可以产生免疫损伤和肝外病变，是导致肝硬化和肝癌的主要原因，其发病确切机制目前还不十分清楚，主要学说是，机体感染HVV后，明显诱导免疫细胞产生细胞应答和体液应答。HCV自身抗体的说法近年来的报道越来越多，因此，检测怀疑HCV感染的患者筛查有无HCV-Ab也成了监测是否感染HCV的一项重要指标。还有一点应该郑重说明的是，HCV和其它型的肝炎病毒和艾滋病毒一样也有窗口期，这就为漏检找到了借口和托辞。所以患者为新增病例，并且在窗口期者，不易检出，另外，有一部分患者感染HCV后，其免疫功能欠佳，对外来抗原刺激不产生应答，不产生抗体，也就是抗原为阳性，但抗体为阴性。再者，机体免疫应答的反应强度和持续时间也是造成漏检的一个原因。但是随着病情的进展，机体产生的HCV-Ab的浓度达到了一定的阈值，血清标本就能够检出[1-3]。

目前，临床上监测HCV感染的实验室方法有分子生物学方法和血清学方法，分子生物学方法试剂较为贵重，且操作复杂，血清学方法与之相比较，有着操作简单，费用低廉等好处，多为临床上所采用。初筛实验一般选取金标法、ELISA法和CLIA法。由于在监测HCV感染的过程中，机体爱多方面因素的影响，血清标本也会收到相应的影响，检测结果因人为等多种因素影响较多，用ELISA法会因这诸多因素受到诱惑，出现假阳性率增高。同时，因自身试剂的因素，敏感度不够又出现了一假阴性。这也是酶联免疫吸附法的一大缺点。而化学发光法CLIA就较之出现了临床上大受欢迎的趋势。CLIA是应用笨并荧葱为发光底物，且洗涤液的特殊配方可有效清洗去诸多干扰因素，使得其检测出HCB抗体的监测率大大增高。本实验为血清标本和溶血标本，且为次日检测，彻底排除了因血沉沉降不充分的干扰，但仍出现一例疑似阳性病例。经过第三代重组RIBA-3的确证后仍为阳性。因此，建议不管是CLIA 法和ELISA法，只要是S/CO较低的标本均应慎重，对有接触丙型肝炎患者和疑似感染HCV的患者一定要应用第三代重组RIBA-3法进行确证。排除其假阳性和假阴性，减少误诊和误治率。

[1]上海第6次全国病毒性肝炎会议,病毒性肝炎防治会议试行方案[J].中华传染病杂志,1991,9(1):52-60.

[2]汤 巧,吴 文 静,夏 永祥.化 学 发 光 法 和 酶 联 免 疫 吸 附 法 检 测 丙 型肝炎病毒缸体的比较分析 [J].国际检验医学杂志,2011,32(8): 834-835.

[3]牛文强,陈杰.慢性丙型病毒性肝炎患者相关自身抗体、血清HCV、RNA、水平及AST/ALT比值的关系探讨[J].中国医疗前沿,2009, 4(14):73-74.

R512.6+3

：B

：1671-8194（2013）09-0120-02