康文艺 ，黄 嬛，廉婷婷，许启泰

1河南大学中药研究所，开封475004;2 嘉兴学院医学院，嘉兴314001

杭白菊［Dendranthema morifolium (Ramat)Tzvel，DM］是浙江驰名中外的道地药材，为浙八味之一，其花序为传统植物学饮料。杭白菊性辛、甘、苦，微寒;归肺、肝经。其主要成分挥发油、氨基酸、类黄酮及维生素B 等［1］。杭白菊不仅具有很高的营养价值，而且具有很高的药用功效。传统中医理论认为见《药典》菊花具有散风清热、平肝明目的功效，可用于风热感冒，发热头痛、目赤昏花、眩晕惊风、疔疮肿毒。现代医学研究证明，杭白菊具有抗菌、抗氧化、清除生物体内自由基、降血脂、抗心血管疾病等功能［2，3］。但对杭白菊提取物是否有保肝作用尚未见报道。为了证明杭白菊对肝脏是否有保护作用，我们采用四氯化碳急性肝损伤动物模型，观察它的保肝降酶作用。

1 实验材料

1.1 杭白菊样品

杭白菊9.2 kg 水煎煮提取2 次，每次1 h，过滤，滤液调整酒精度65%，静置6 h，离心得到沉淀，上清液调整酒精度70%，得到沉淀，二者合并，微波真空干燥，得到2. 06 kg，得率22. 4% (B:多糖部分);上清液浓缩后微波真空干燥，得到0.96 kg 得率1.04%(A:乙醇提取物)。

1.2 实验动物

昆明种系实验小白鼠，雄性，18～22 g，购于河南省医学实验动物中心。

1.3 主要试剂

谷草转氨酶(GOP)，谷丙转氨酶(GPT)，超氧化物歧化酶(SOD)，丙二醛(MDA)测定试剂盒，均购于南京建成生物工程研究所;四氯化碳分析纯(天津市红岩化学试剂厂，批号:20091208);精制大豆油(市售金龙鱼大豆油);实验样品(河南大学中药研究所提供);联苯双酯(浙江万邦药业有限公司，批号:100311)。

1.4 主要仪器

UV-2000 型紫外可见分光光度计(尤尼克上海仪器有限公司);TGL-16 型高速离心机(江苏金坛市中大仪器厂);AE24 型电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。

2 实验方法

2.1 四氯化碳急性肝损伤模型的建立

综合文献［4-6］预试采用0.3%四氯化碳油溶液，腹腔注射方法建立急性肝损伤模型。0.3%四氯化碳油溶液要求先用现配，用磁力搅拌器强力搅拌2 h，按照0.1 mL/10 g 体重腹腔注射(ip)。

2.2 分组方法

健康KM 小鼠90 只，全部雄性，随机分为9 组，分别为空白组、模型组、阳性对照组、杭白菊乙醇提取物高中低组和杭白菊多糖部分高中低组。每天灌胃相应的药物，连续8 d，最后一次给药后2 h 开始造模，禁食不禁水16 h 后，摘眼球取血，分离血清，0～3 ℃保存，测GPT 和GOT。快速分离肝脏，制备10%和1%的匀浆液，离心取上清液，0～3 ℃保存，测MDA 和SOD，并用考马斯亮蓝法测定10%和1%组织匀浆液的蛋白含量。

2.3 数据处理

GPT、GOT、SOD 和MDA 的测定均按照试剂盒的要求进行，实验数据± s 表示，实验统计采用spss17.0 统计软件进行单因素方差分析。

3 实验结果

杭白菊对四氯化碳急性肝损伤小鼠血清GPT和GOT 的影响见表1。由表1 可知，与空白组比较，四氯化碳急性肝损伤小鼠血清GPT 和GOT 的含量均显著升高，证明造模成功。与模型组对比，乙醇提取物高剂量和多糖部分高剂量能明显降低四氯化碳致急性肝损伤小鼠血清中GPT 和GOT 的含量。表明杭白菊高剂量对化学性肝损伤有保护作用。

表1 杭白菊提取物对肝损伤小鼠GPT 和GOT 的影响(±s，n=10)Table 1 Effect of D.morifolium on serum GPT and GOT inmice of liver injury (±s，n=10)

表1 杭白菊提取物对肝损伤小鼠GPT 和GOT 的影响(±s，n=10)Table 1 Effect of D.morifolium on serum GPT and GOT inmice of liver injury (±s，n=10)

注:与空白组比较，△△△P ＜0.001;与模型组比较，* P ＜0.05，＊＊P ＜0.01，＊＊＊P ＜0.001。下同。Note:△△△P ＜0.001 vs normal control group;* P ＜0.05，＊＊P ＜0.01，＊＊＊P ＜0.001 vs liver injury model group.The same as follow.

组别Group 给药量Dose (mg/kg)GPT(U/L)GOT(U/L)46.2275 ±8.9123 91.9556 ±9.5897模型组 880.4333 ±99.1554△△△ 952.9085 ±71.7397△△△A 高剂量组 600 577.1863 ±49.0927* 559.7265 ±76.5589＊＊＊A 中剂量组 300 632.2302 ±125.5977 679.5601 ±32.5820 A 低剂量组 150 622.7353 ±42.9355 693.8522 ±55.4017 B 高剂量组 600 618.5698 ±86.3813 597.3304 ±32.3903＊＊B 中剂量组 300 652.8191 ±122.5606 687.7121 ±51.0668 B 低剂量组 150 745.0755 ±130.9628 696.9161 ±42.9161联苯双酯 200 485.5809 ±43.4437* 339.8997 ±54.2074空白组＊＊＊

杭白菊对四氯化碳急性肝损伤小鼠血清MDA和SOD 的影响见表2。由表2 可知，与空白组比较，四氯化碳急性肝损伤小鼠血清MDA 显著升高，SOD含量显著降低，证明造模成功。与模型组对比，乙醇提取物高剂量能明显降低四氯化碳致急性肝损伤小鼠血清中MDA 的含量。杭白菊所以提取物都有不同程度升高SOD 的作用。

表2 杭白菊提取物对肝损伤小鼠MDA 和SOD 的影响(±s，n=10)Table 2 Effect of D.morifolium on MDA and SOD in mice of liver injur in mice of liver injury (±s，n=10)

表2 杭白菊提取物对肝损伤小鼠MDA 和SOD 的影响(±s，n=10)Table 2 Effect of D.morifolium on MDA and SOD in mice of liver injur in mice of liver injury (±s，n=10)

组别Group 给药量Dose (mg/kg)MDA(nmol/mgprot)SOD(nmol/mgprot)空白组0.7967 ±0.2398 339.1580 ±23.9330

模型组 2.0019 ±0.3931△△△ 132.2511 ±22.6864△△△A 高剂量组 600 1.3474 ±0.1768* 260.2039 ±41.1347＊＊＊A 中剂量组 300 1.4007 ±0.6727 257.6148 ±30.9572＊＊A 低剂量组 150 1.7863 ±0.9171 248.3827 ±28.7010*B 高剂量组 600 1.8273 ±0.3614 251.7397 ±14.1180＊＊B 中剂量组 300 1.5476 ±0.1995 254.6248 ±34.4352＊＊B 低剂量组 150 1.8111 ±0.6160 197.6813 ±11.0900*联苯双酯 200 1.1850 ±0.3216* 298.0469 ±16.4663＊＊

4 结论

肝损伤是由多种病因引起且有多种因素参与的复杂过程。体内模型特别是化学性肝损伤模型，在形态学、病理生理学的某些方面与人慢性肝病较为相似［7］。CCl4引起肝损伤的机制是CCl4在肝微粒体细胞色素P450 激活下生成自由基CCI3·及Cl·，这些自由基可与肝细胞内大分子发生共价结合，也可攻击膜下不饱和脂质，引起脂质过氧化，使肝细胞损伤，细胞质内GPT、GOT 渗入血液，结果血清中GPT、GOT 的活性升高［8-10］。SOD 活性及MDA含量常可反映体内脂质过氧化反应程度，间接反映机体组织、细胞损伤的程度，通过检测小鼠肝匀浆中的SOD 活性及MDA 含量可反映出药物对肝细胞的保护作用。因此本实验以血清GPT、GOT、肝组织SOD 活性及MDA 含量作为指标，探讨杭白菊提取物的肝损伤的保护作用。给予杭白菊上清液高剂量和沉淀物高剂量后，CCl4所致小鼠血清GPT、GOT的升高可明显降低。

本实验观察了杭白菊乙醇提取物和多糖部分对CCl4诱发的小鼠肝损伤的作用。杭白菊乙醇提取物和多糖部分高剂量组血清GPT、GOT 水平明显降低。说明杭白菊乙醇提取物和多糖部分高剂量组对CCl4所致小白鼠肝损伤具有一定的保护作用，能特异性地降低血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶的含量，减轻肝细胞损伤。杭白菊乙醇提取物高剂量组能显著降低CC14所致急性肝损伤小鼠肝组织MDA 含量升高，提高肝组织SOD 活性，提示杭白菊对肝细胞的保护是通过抗自由基，抑制脂质过氧化发挥作用的。

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7 Fu Y(傅颖)，Liu DY(刘冬英)，Wang Y(王茵). Fugan Peptide carbon tetrachloride in rats with chronic liver injury.Chin J Biol，2008，21:513-515.

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