范晓艳 金岳雷 于 洋 李 玉 吕冬霞 (佳木斯大学基础医学院，黑龙江 佳木斯 54007)

毛尖蘑属珍贵野生菌，是黑龙江省特有的食、药用真菌，其子实体营养丰富，是食品、医药、保健品行业开发利用的宝贵资源〔1〕。真菌多糖具有增强免疫力、抗菌、抗病毒、抑制肿瘤、增强心血管功能等作用。本研究通过提取毛尖蘑子实体粗多糖(MJMP)，检测不同浓度MJMP作用H22荷瘤小鼠后对胸腺指数、脾指数、抑瘤率的影响，为MJMP抗肿瘤作用及对免疫系统影响的进一步研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料 H22腹水瘤小鼠，购于哈尔滨医科大学附属肿瘤医院动物中心。实验动物：昆明种近交系小鼠48只(合格证号：黑动字第99101001，清洁级)，体重(20 ±2.0)g，雄性，由佳木斯大学实验动物中心提供(许可证号：SYXK黑2006-004)。毛尖蘑子实体，购于大兴安岭呼玛县韩家园林业局松涛鹿苑公司。环磷酰胺(CTX)，江苏恒瑞医药股份有限公司。电子天平(上海恒科技有限公司)，粉碎机(温岭市创力药材器械厂)，电热恒温水浴槽(余兆市远东数控仪器厂)，旋转蒸发仪RE-52A(上海亚荣生化仪器厂)，循环水式多用真空泵SHB-Ⅲ(郑州长城科技工贸有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 提取MJMP 根据文献〔2〕，采用热水浸提方法改良。

1.2.2 动物分组与用药 选取接种H22肿瘤6 d的腹水瘤小鼠1只，放在蜡盘中断髓法处死;浸入75%酒精溶液中消毒，浸透取出，放入无菌培养皿中;在超净工作台上用镊子挑起腹部皮肤，针头插入皮下抽取腹腔液5 ml，放入事先已有5 ml生理盐水的三角烧瓶中混匀;加样枪取10 μl放入 EP管中，再取990 μl生理盐水放入此EP管中，混匀;用加样枪取少量加入计数板中计数，达到7.5×106个/ml。小鼠称重，标记，随机分成6组，每组8只;用75%乙醇对小鼠右腋下进行消毒，除空白对照组外，其余各组每只右腋下皮下注射0.2 ml(含癌细胞1.5×106个)H22腹水瘤细胞悬液。第1组空白对照组，第2组生理盐水组(阴性对照组)，第3组环磷酰胺组(阳性对照组)(20 mg/kg)，第 4组 MJMP高剂量组(400 mg/kg)，第 5组MJMP中剂量组(200 mg/kg)，第 6组 MJMP低剂量组(100 mg/kg)。接种24 h后，按不同组灌胃，第 1、2组灌服0.4 ml生理盐水，第3组灌服0.4 ml环磷酰胺，第4、5、6组灌服MJMP溶液0.4 ml，6组动物均每日灌服一次，连续9 d。

1.2.3 MJMP对免疫系统重量的影响 将灌胃9 d的小鼠用断髓法处死，快速打开胸腔取出脾、胸腺，称重。按下列公式计算胸腺指数和脾指数：胸腺指数(mg/g)=1 000×胸腺质量/体质量;脾指数(mg/g)=1 000×脾质量/体质量。

1.2.4 MJMP对肿瘤生长的影响 将灌胃9 d的小鼠用断髓法处死，剥离肿瘤，称重。计算抑瘤率。抑瘤率=〔用药组肿瘤质量(g)－阴性对照组肿瘤质量(g)〕/阴性对照组肿瘤质量(g)×100%。

1.3 统计学方法 应用SPSS11.5软件进行分析，计量资料用s表示，采用方差分析(AVONA)，两两比较用Q检验。

2 结果

2.1 各组小鼠胸腺指数和脾指数的比较 与空白对照组比较，阴性对照组及各浓度MJMP用药组胸腺指数下降(P＜0.01);与阴性对照组相比，MJMP高、中剂量组胸腺指数上升(P＜0.01，P＜0.05)，MJMP用药组与空白对照组及阴性对照组脾指数比较差异不明显(P＞0.05)。见表1。

2.2 肿瘤抑制率 各浓度的MJMP对瘤体增长均有抑制效应(P＜0.01);与阴性对照组比较，阳性对照组及MJMP高、中、低剂量组瘤重明显降低(P＜0.01，P＜0.05);与阳性对照组比较，MJMP中、低剂量组瘤重增加(P＜0.01)，粗多糖高剂量组与阳性对照组比较，瘤重无差别(P＞0.05)。见表2。

表1 各组小鼠脾和胸腺重量指数的比较( s ，mg/g，n=8)

表1 各组小鼠脾和胸腺重量指数的比较( s ，mg/g，n=8)

与空白对照组比较：1)P＜0.01;与阴性对照组比较：2)P＜0.05，3)P＜0.01

0.008 1±0.003 1 0.002 6±0.000 9阴性对照组 0.005 8±0.001 3 0.001 0±0.000 51)MJMP高剂量组 0.006 5±0.004 8 0.001 6±0.000 91)3)MJMP中剂量组 0.006 6±0.002 3 0.001 4±0.000 91)2)MJMP低剂量组 0.006 3±0.001 2 0.001 2±0.000 31)组别 脾指数 胸腺指数空白对照组

表2 各组小鼠肿瘤抑制率( s ，n=8)

表2 各组小鼠肿瘤抑制率( s ，n=8)

与阴性对照组比较：1)P＜0.05，2)P＜0.01;与阳性对照组比较：3)P＜0.01

组别 平均瘤重(g)肿瘤抑制率(%)14.104 2 0.684 9±0.316 2阳性对照组 0.279 1±0.100 52) 59.249 5 MJMP高剂量组 0.272 6±0.129 62) 60.198 6 MJMP中剂量组 0.424 6±0.184 31)3) 38.005 5 MJMP低剂量组 0.588 3±0.21741)3)阴性对照组

3 讨论

真菌多糖作为一种非特异性免疫促进剂，正在被人们所关注，毛尖蘑是产在黑龙江省大、小兴安岭一带的野生珍稀食药用真菌，其子实体所含营养成分高，部分营养成分含量是普通蘑菇的几倍甚至几十倍，是黑龙江省的宝贵资源。但因为毛尖蘑的产量低，目前针对毛尖蘑的研究主要集中在栽培和营养成分分析方面。关于MJMP提取及其多糖对肿瘤细胞凋亡、机体免疫力的影响等方面的研究未见报道。

多糖的免疫调节作用也是抗肿瘤作用机制之一，与大多数药品不同的是多糖是免疫增强剂〔3〕，不但能激活T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、细胞毒性淋巴细胞(CTL)、淋巴因子激活杀伤性细胞(LAK)等免疫细胞的活性，激活网状内皮系统吞噬、清除老化细胞和异物以及病原体的作用，调节机体抗体和补体的产生，提高机体抗肿瘤免疫力〔4〕。

本文结果显示MJMP能够增强H22荷瘤小鼠的机体免疫力，其增强能力与MJMP的浓度呈正相关;而小鼠的脾脏对5～20 mg/ml的MJMP不敏感，此结论还有待在今后的实验中进一步研究证明。高、中、低浓度的MJMP对瘤体增长有抑制效应，即MJMP能够抑制肿瘤的生长，且抑制能力与MJMP在5～20 mg/ml的浓度范围内呈正相关，在本实验中MJMP的浓度为20 mg/ml时，对肿瘤的抑制效果最好。多糖的抗肿瘤机制包括两个方面：①多糖具有细胞毒活性，可以直接杀死癌细胞，如茯苓多糖，刺五加多糖等〔5〕。②作为生物免疫反应调节剂，通过增强宿主免疫功能而直到抑制肿瘤的作用。本实验中MJMP在抑制肿瘤生长的同时，还对小鼠的胸腺有刺激增生的作用，可初步推断MJMP可能是通过提高小鼠机体的免疫力发挥其抗肿瘤的功效，其作用机制还有待于进一步的研究。

1 黄 江.毛尖蘑菌株深层发酵工艺的研究〔J〕.中国林副特产，2003;6(2)：27.

2 范晓艳.毛尖蘑粗多糖提取方法的研究〔J〕.黑龙江医药科学，2010;33(4)：20-1.

3 杨大雷，张星星.巴西菇多糖对肝癌细胞株凋亡的影响及其机制〔J〕. 广东医学院学报，2002;20(6)：418-19.

4 李明春，梁东升，许自明.灵芝多糖对小鼠巨噬细胞cAMP含量的影响〔J〕. 中国中药杂志，2000;25(1)：41-3.

5 佟 丽，吴 波，黄添友，等.植物多糖抗肿瘤作用与机理研究：Ⅲ茯苓多糖(PPS)和刺五加多糖(ASPS)对S180细胞膜脂肪酸组成的影响〔J〕.天然产物研究与开发，1995;7(1)：5-9.