孙 蓓 ，张 蓓 ，陈双璐

（1.天津医科大学附属肿瘤医院门诊办公室，天津市肿瘤防治重点实验室，天津300060；2.天津市第一中心医院药剂科，天津300192；3.天津市儿童医院药剂科，天津300074）

肺闭宁颗粒是以天津市儿童医院老中医的经验处方为基础，经工艺改良后制成的医院制剂，由黄芩、枳壳、麻黄等中药组成，具有宣肺解热、化痰定喘之功效。麻黄在制剂中为君药，其有效成分麻黄碱有松弛平滑肌、收缩血管作用，为麻黄平喘的主要成分；另一有效成分伪麻黄碱，可用于伤风感冒、鼻黏膜消炎[1]。由于麻黄属于控制的毒麻类成分，为了有效控制该制剂的质量，提出了用高效液相色谱法测定其中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量，取得满意效果。

1 材料和方法

1.1 仪器与试药 LC-2010A型高效液相色谱仪，紫外检测器，Lcsolution工作站（日本岛津公司）；双频恒温数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；旋转蒸发仪（巩义市予华仪器有限责任公司）。盐酸麻黄碱对照品（批号171241-200506）、盐酸伪麻黄碱对照品（批号171237-200505）均由中国药品生物制品检定所提供；乙腈、磷酸、三乙胺为色谱纯；水为纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司）；肺闭宁颗粒（天津市儿童医院制剂）；其余试剂为分析纯。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件 色谱柱：Shim-pack VP-ODS(150 mm×4.6mm)；流动相：乙腈-水-磷酸-三乙胺（3∶97∶0.1∶0.2）；检测波长为 213 nm；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；进样量10μL。理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于5 000。

1.2.2 溶液的制备

1.2.2.1 对照品溶液：精密称取105℃干燥至恒重的盐酸麻黄碱对照品5.70mg、盐酸伪麻黄碱对照品4.45mg置10mL量瓶中，加甲醇超声使溶解后，稀释至刻度，摇匀。精密量取2mL置10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL含盐酸麻黄碱114μg、盐酸伪麻黄碱89μg）。

1.2.2.2 供试品溶液：取肺闭宁颗粒约3 g，精密称定，加水20mL使其混悬均匀，加浓氨水1mL，用三氯甲烷提取 4次（20，20，15，15mL），合并三氯甲烷提取液，加盐酸乙醇液（1→20）1mL，低温蒸干，残渣中精密加入盐酸乙醇液（1→20）2mL使溶解，转移至10mL量瓶中，用流动相洗涤容器并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

1.2.2.3 阴性样品溶液：按处方比例及制法，制成缺麻黄的阴性对照样品[2]，取约3 g，精密称定，按照“1.2.2.2”项下供试品溶液的制备方法制成阴性样品溶液[2]。

2 结果

2.1 专属性试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪测定。结果表明，供试品溶液与对照品溶液出现保留时间相同的色谱峰，而阴性对照品溶液在相同保留时间处无色谱峰出现，证明其他药材及辅料成分对测定结果无干扰。见图1。麻黄碱与伪麻黄碱的保留时间分别为12.259min和13.773min，分离度R≥1.5，满足含量测定要求。

2.2 线性关系考察 精密吸取对照品溶液适量，依次注入高效液相色谱仪 4.0、6.0、8.0、10.0、12.0、14.0 μL，按照“1.2.1”项色谱条件测定，以浓度（μg）为横坐标（X），以峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析，得回归方程为：盐酸麻黄碱Y=1 810 115.79X+3 664.86，r=0.999 99（n=6）；盐酸伪麻黄碱：Y=1 855 704.49X+4 290.53，r=0.999 97（n=6）。结果表明，盐酸麻黄碱在0.456～1.596μg浓度范围内、盐酸伪麻黄碱在0.356～1.246μg浓度范围内与峰面积具有良好的线性关系。

2.3 精密度试验 取“1.2.2.1”项下对照品溶液，按照“1.2.1”项下色谱条件分析，连续进样6次，每次10μL，测定盐酸麻黄碱峰与盐酸伪麻黄碱面积。结果表明盐酸麻黄碱峰面积平均值为2 063 725，RSD为0.60%；盐酸伪麻黄碱峰面积平均值为1 650 330，RSD为0.45%，精密度良好。

2.4 重复性试验 取同一批号的样品（20111101）6份，按照“1.2.2.2”项下供试品溶液制备操作，按照“1.2.1”项下色谱条件分析，每次进样量为10μL，结果样品中盐酸麻黄碱平均含量为0.365 1mg/g，RSD为1.07%；盐酸伪麻黄碱平均含量为0.230 7mg/g，RSD为1.11%。表明方法的重复性良好。

2.5 稳定性试验 取同一批号（20111101）的样品适量，按照“1.2.2.2”项下供试品溶液制备操作，按照“1.2.1”项色谱条件分析，分别在 0、2、4、6、8 h进样10μL，测得盐酸麻黄碱峰面积值的RSD为0.71%，盐酸伪麻黄碱面积值的RSD为0.83%。

2.6 加样回收试验 取同一批号（20111101）已知含量的样品适量，研成粉末，取1.5 g，共6份，精密称定，分别精密加入盐酸麻黄碱对照品溶液（0.565 mg·mL-1）1mL、盐酸伪麻黄碱对照品溶液（0.412mg·mL-1）1mL，按照“1.2.2.2”项下供试品溶液制备操作，制得供测定回收率用供试品溶液，按照“1.2.1”项下色谱条件分析，进样10μL，计算回收率，结果平均回收率分别为：盐酸麻黄碱99.49%，RSD为1.73%；盐酸伪麻黄碱98.56%，RSD为1.12%（表1、2）。

表1 盐酸麻黄碱加样回收率试验Tab1 Ephedrinehydrochloride recovery rate test

表2 盐酸伪麻黄碱加样回收率试验Tab2 Pseudoephedrinehydrochloride recovery rate test

2.7 样品含量测定 取4批肺闭宁颗粒样品，按照“1.2.2.2”项下供试品溶液制备操作，按照“1.2.1”项色谱条件分析，进样10μL，计算样品中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量。结果见表3。

表3 肺闭宁颗粒中盐酸麻黄碱（…）与盐酸伪麻黄碱（…）的含量Tab3 Ephedrinehydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride content of Feibining granules

3 讨论

3.1 样品提取方法的选择 文献报道可采用超声法提取中药制剂中盐酸麻黄碱，然而试验证明，此法虽简单易行，但肺闭宁颗粒成分复杂，简单的超声提取后，样品溶液在液相色谱中不能达到很好的基线分离[3-5]。本试验利用麻黄碱与伪麻黄碱都能溶于水，加碱后的游离物能被三氯甲烷、乙醚等有机溶剂萃取，加酸后成盐复溶于水这一性质，将肺闭宁颗粒的水溶液碱化后分别用乙醚、三氯甲烷萃取，从比较的结果看，用三氯甲烷萃取易分层，且三氯甲烷液在下层，处理较为方便；用乙醚萃取，易乳化，不易分层，造成有效成分提取不完全，故选用三氯甲烷为提取溶剂。提取溶剂的用量及提取次数经比较后，结果认为，提取4次，加入量为20、20、15、15mL的样品中麻黄碱与伪麻黄碱的含量最高。如何将三氯甲烷回收也是本试验的关键，如果温度过高，由于麻黄碱与伪麻黄碱的沸点较低，会挥发损失，因此试验中选用减压旋转蒸发，温度控制在45～55℃之间比较合适。

3.2 色谱条件的选择 由对照品溶液扫描得知，麻黄碱在210 nm、伪麻黄碱在213 nm处有最大吸收，故选择213 nm为检测波长，此波长处检验灵敏度高，基线波动小。

对于流动相的选择，由于麻黄碱与伪麻黄碱是同分异构体，甲醇-水、乙腈-水等流动相无法将两种成分有效分离，本文还试验了乙腈-0.2%磷酸溶液（5∶95）[6]做流动相，两种成分的分离也不是很好，且色谱峰有拖尾现象，而以乙腈-水-磷酸-三乙胺（3∶97∶0.1∶0.2）为流动相时，由于加入了三乙胺，避免了色谱峰拖尾的现象，同时麻黄碱与伪麻黄碱的分离度大于1.5，且主峰与杂质峰分离效果较好，避免了杂质对测定的影响。

[1]李宁，柴清河，董保国.小青龙胶囊的制备工艺研究[J].医药产业资讯，2006，3（2）:73

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[S].2010版.北京：化学工业出版社，2010：附录

[3]陈越，伍斌，李炯，等.HPLC测定麝香追风膏中盐酸麻黄碱的含量[J].中成药，2008，30（2）:304

[4]周春菊，唐勇.高效液相色谱法测定桂灵胶囊中盐酸麻黄碱的含量[J].中南药学，2008，6（2）:205

[5]靳凤云，贺祝英，赵杨，等.HPLC测定华盖散传统汤剂与颗粒汤剂中盐酸麻黄碱、苦杏仁苷、甘草酸、甘草苷的含量[J].中成药，2008，30（1）：80

[6]王瑞明，张玲，倪艳，等.HPLC测定苏杏胶囊中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量[J].中成药，2005，27（6）：651