益气生骨颗粒剂的质量标准研究

2012-06-07朱太咏

世界中医药 2012年1期

关键词：甲苷正丁醇薄层

谢艳朱太咏秦娜

（河南省正骨研究院，河南省洛阳市启明南路82号，471002）

中药研究

益气生骨颗粒剂的质量标准研究

谢艳朱太咏秦娜

（河南省正骨研究院，河南省洛阳市启明南路82号，471002）

益气生骨颗粒剂；薄层色谱鉴别

益气生骨颗粒剂是我院的一项新药开发制剂。本方由黄芪、党参、木香、红花、赤芍等中药组成，具有益气生骨，去瘀生新，通脉止痛的作用，用于严重跌打损伤、创伤性骨折。为了有效地控制其产品质量，本课题采用薄层色谱法对方中黄芪、木香、红花及赤芍进行了定性鉴别，对黄芪甲苷的含量进行了测定，现报道如下。

1 仪器与试剂

1.1 仪器日本岛津CS-9301型薄层扫描仪。

1.2 对照品及对照药材黄芪甲苷、芍药苷均购自中国药品生物制品检定所，木香、红花对照药材由我院药剂科提供。

1.3 试剂与样品化学试剂均为分析纯，益气生骨颗

粒剂及各味药的阴性对照样品均由我院制剂科提供。

2 定性鉴别

2.1 木香的鉴别取9g颗粒剂，用30mL水溶解，用乙醚萃取两次（30mL，20mL），取乙醚层，加入4% NaOH溶液40mL洗涤，乙醚液加入无水硫酸钠2g，振摇，滤过，残渣用乙醚10mL分两次洗涤，滤液与洗涤液合并，挥干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。取木香药材1g，加水提取1h，同法制成对照药材溶液。取木香阴性药液，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述木香药材对照溶液1μL，供试品和阴性对照溶液各6μL分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60-90℃）-乙酸乙酯（9∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。喷以5%香草醛硫酸液显色，电吹风吹至显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无此斑点。

2.2 红花的鉴别取颗粒9g，用水饱和的正丁醇提取3次，每次15mL，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇5mL溶解，加入已处理好的中性氧化铝柱上（100 -200目，2g，内径1.5cm），以甲醇10mL洗脱，收集洗脱液，挥干，残渣加1mL甲醇溶解为供试品溶液。另取红花对照药材1g，加水煎煮1h，上清液同法制成对照药材溶液。取红花阴性制剂同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述三种溶液各6μL分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲苯-甲醇（75∶25∶5）为展开剂，单向展开两次，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇液，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照无此斑点。

2.3 赤芍的鉴别称取9g颗粒，加氯仿20mL，超声处理20min，弃去滤液，药渣加70%乙醇30mL，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加水30mL使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次（30mL，30mL，30mL），合并正丁醇液，蒸至少量。上中性氧化铝柱（100-200目，内径10～15mm，4g）用乙醇-乙酸乙酯（1∶1）30mL预洗，继以甲醇40mL洗脱，收集洗脱液，蒸干。残渣加甲醇1mL使溶解为供试品。取芍药苷标准品制成1mg/mL的标准品溶液。另取赤芍阴性制剂同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述标准品溶液2μL，供试品和阴性对照溶液各8μL分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，电吹风吹至斑点显色，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无此斑点。

3 黄芪甲苷的含量测定

3.1 对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品精密称定2.25mg，置2mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀，即得1.125mg/mL的标准品溶液。

3.2 供试品溶液的制备取本品12g，研细。置具塞锥形瓶中，精密加入水60mL溶解，称重，超声提取30min，放冷，称重，加水补足减失重量，离心，将上清液转出。精密吸取滤液45mL，用乙醚提取3次，每次20mL，弃去乙醚液，再用水饱和的正丁醇提取4次，每次20mL，合并正丁醇液，用1%NaOH洗涤2次，每次30mL，再用饱和正丁醇的水洗至中性，正丁醇液水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至2mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

3.3 阴性对照液的制备取阴性对照颗粒，同法做成阴性制备液。

3.4 色谱条件层析板为硅胶G板。展开剂：氯仿-甲醇-水（65∶35∶10）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展距10cm。显色剂为10%硫酸乙醇溶液。

3.5 扫描参数采用单波长反射锯齿形扫描法，测定波长λs=520nm。光束狭缝：0.4×0.4mm，线性参数SX=3。

3.6 线性关系的考察精密吸取浓度为每1mL含1.125mg的黄芪甲苷对照品溶液1，2，3，4，5，6μL，分别点于同一薄层板上，展开，显色，按上述色谱条件测定，以浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，得回归方程Y=648.26X+108.1，r=0.995（n=6），表明黄芪甲苷在1.125～6.75μg浓度范围内具有良好的线性关系。

3.7 精密度试验仪器精密度实验：对薄层板上同一斑点连续扫描8次，平均峰面积积分值为2781.1，RSD =1.9%。同板精密度实验：取同一浓度的黄芪甲苷标准品溶液6份各4μL，分别点于同一薄层板上，展开，取出，晾干，显色后依法操作，薄层扫描测定吸光度峰面积积分值，平均峰面积积分值为3337.9，RSD= 2.06%。异板精密度实验：取同一黄芪甲苷标准品溶液，上样3μL，分别点于5块薄层板上，依法测定，平均峰面积积分值为2035.7，RSD=1.98%。

3.8 稳定性试验取供试品溶液点样，依法操作，对同一斑点每隔20min扫描1次，记录峰面积积分值，结果表明在2h内基本稳定，RSD=1.65%。

3.9 重现性试验取同一批号的样品5份，按上述测定条件重复测定5次，平均含量为0.66mg/袋，RSD= 2.6%。

3.10 回收率试验采用加样回收法，精密称取已知含量的益气生骨颗粒，样品6份，分别精密添加黄芪甲苷对照品溶液（1.125mg/mL）100μL，按上述方法测定，计算回收率，结果平均回收率为99.38%，RSD= 2.3%。结果见表1。

3.11 样品测定精密吸取供试品溶液6μL，对照品溶液2μL和4μL，分别交叉点于同一硅胶薄层板上，依法展开和测定。共测定样品5批，结果见表2。