刘 翔，郝 琼，郭邦成，闫立群，谢明英，梁俊容，景怀琦

沙门氏菌是一种人兽共患的肠道病原菌，至今已有2 523种血清型被发现［1］，广泛分布于自然界，寄生于人和动物体内，常见于污染的食品和污水等外环境中，是人和动物常见的病原菌，可引起人类伤寒、副伤寒和食物中毒等许多疾病，直接影响工农业和畜牧业发展，使全球遭受巨大的经济损失。在我国，沙门氏菌食物中毒多年来居细菌性食物中毒的首位［2］。在宁夏地区，侯在文等［3］人曾对1982－1987年腹泻病人、食品、污水及家禽家畜中分离沙门氏菌进行过菌型分布调查，结果显示鼠伤寒沙门氏菌是当时宁夏地区的流行菌株，之后再无该地区沙门氏菌流行特征的深入报道。特对2007－2011年宁夏地区分离的沙门氏菌进行血清型研究，并用PFGE基因分型方法对流行菌株进行基因分型，揭示宁夏不同地区沙门氏菌的分布特征与流行菌株之间的同源性，为控制沙门氏菌污染、暴发食物中毒提供依据。

1 材料与方法

1．1 材料

1．1．1 菌株来源 56株沙门氏菌来源于2007－2011年宁夏食源性致病菌监测及腹泻病监测工作，菌株的分离操作按照各年度相应的监测方案进行。

1．1．2 培养基及试剂 主要分离培养基购自广东环凯生物技术有限公司；Api 20E生化鉴定条购自法国梅里埃公司；沙门氏菌属诊断血清购自宁波天润药业技术公司；SDS、Tris Base、EDTA、硼酸购自上海生工生物公司；蛋白酶K和限制性内切酶XbaⅠ购自大连宝生物工程有限公司；SeaKem Glod Agarose购自美国BD公司。

1．2 方法

1．2．1 菌株鉴定及血清学测定 所有沙门氏菌株均经过Api 20E鉴定，再依据沙门氏菌属Kauffmann－White－Le Minor抗原表用沙门氏菌属诊断血清确定血清型。

1．2．2 脉冲场凝胶电泳分型（PFGE） 参照中国细菌性传染病分子分型实验室监测网络（PulseNet China）的沙门氏菌PFGE分子分型方法，用SeaKem Glod Agarose将沙门氏菌包埋、XbaI酶切，把得到的限制性DNA片段用Chef Mapper进行脉冲场凝胶电泳分型，最后将成像结果用BioNu－merics（5．1）软件聚类分析。

2 结 果

2．1 不同地区沙门氏菌血清型分布 56株沙门氏菌分为14种血清型，以肠炎沙门氏菌为主，占所有菌株数的58．93%（33／56）；其次为德尔比沙门氏菌、沙门氏菌Ⅱ和鼠伤寒沙门氏菌，均占总菌株数的5．36%（3／56）；其余为奥利翁沙门氏菌、斯坦利沙门氏菌等10个血清型，在宁夏地区均不常见，共占总菌株数的25%（14／56）。

5城市中，银川市检出沙门氏菌最多，占所有菌株数的73．21%（41／56），依次为吴忠市、中卫市、石嘴山市和固原市。银川市沙门氏菌呈多样性，检出11种血清型；中卫市和吴忠市，各检出3种血清型；石嘴山市和固原市各检出1种血清型。除固原市之外的4市均以肠炎沙门氏菌为主，占到各自菌株数的40%以上，见表1。

表1 宁夏不同地区不同来源沙门氏菌血清型分布Tab．1 The serotype of Salmonellafrom different regions of Ningxia

2．2 不同分离来源沙门氏菌分布 食品中沙门氏菌共检出9种血清型，以肠炎沙门氏菌（64．5%）、奥里翁沙门氏菌（6．5%）、斯坦利沙门氏菌（6．5%）、猪霍乱沙门氏菌（6．5%）为主，其余5种血清型各检出1株；病人中沙门氏菌共检出6种血清型，以肠炎沙门氏菌（59．1%）、鼠伤寒沙门氏菌（13．6%）、沙门氏菌Ⅱ（13．6%）为主，其余3种血清型各检出1株；环境中仅检出德尔比沙门氏菌和鸭沙门氏菌各1株。

肠炎沙门氏菌在食品和病人中检出，且构成比较高；德尔比沙门氏菌在病人和环境中检出；鸭沙门氏菌在食品和环境中检出；鼠伤寒沙门氏菌、沙门氏菌Ⅱ、罗森沙门氏菌和伤寒沙门氏菌仅在病人中检出；奥利翁沙门氏菌、斯坦利沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、阿贡纳沙门氏菌、巴雷利沙门氏菌、山夫登堡沙门氏菌仅在食品中检出，见表1。

2．3 主要沙门氏菌流行菌株基因特征 在56株沙门氏菌中肠炎沙门氏菌占到了58．93%（33／56），共分为11个PFGE带型，各菌株基因同源性在60%～100%，依次命名为SALX01001到SALX01011，其中优势带型SALX01004有21株，占63．64%（21／33）；其次 SALX01008、SALX01009型各有2株，分 别 各 占6．06% （2／33）；其 余 SALX01001、SALX01002、SALX01003、SALX01005、SALX01006、SALX01007、SALX01010、SALX01011型各1株，分别各 占 3．03% （1／33）。 带 型 SALX01001 到SALX01009聚类相似性在90%以上，涵盖了该实验菌株数的93．94%（31／33），按照 Tenover等［4］提出的菌株同源性判别标准，认为属于同一克隆系。带型SALX01010和SALX01011各有1株，与上一克隆系亲缘关系较远，仅占实验菌株数的6．06%（2／33），见图1。

图1 33株肠炎沙门氏菌PFGE带型聚类图Fig．1 Clustering map for PFGE patterns onf33strains of Salmonella

3 讨 论

分析表明，宁夏地区病人和食品中的流行沙门氏菌血清型已由侯在文等［3］1990年报道的鼠伤寒沙门氏菌转变为肠炎沙门氏菌。而张毅等［5］研究2010上海市食源性沙门菌的血清型主要为鼠伤寒沙门氏菌，这表明沙门氏菌的血清型分布有明显的年代变迁和区域差异。银川市沙门氏菌检出最多，具有多样性；固原市检出最少，无多样性，是宁夏地区唯一肠炎沙门氏菌没有流行的地区。这可能与银川市是宁夏首府城市，人口密集，对外交流合作较多，而固原市地处偏远，经济较为落后，且交通欠发达有一定的关系。

鼠伤寒沙门氏菌、沙门氏菌Ⅱ、罗森沙门氏菌和伤寒沙门氏菌仅在病人中检出；奥利翁沙门氏菌、斯坦利沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、阿贡纳沙门氏菌、巴雷利沙门氏菌、山夫登堡沙门氏菌仅在食品中检出，说明不同时间、不同地区、不同来源的沙门氏菌血清型的构成有较大差异。

PFGE分型分辨力高、重复性好，为确定菌株之间的亲缘关系提供了可靠的技术手段，被认为是细菌基因分型的“黄金标准”［1］。对病人和食品中分离的33株肠炎沙门氏菌进行PFGE分型，得到同源性在60%～100%的11个带型，其PFGE优势带型SALX01004有21株，同源性为100%，分别来自我区4个市不同年份的病人和食品，推断病人和食品中长期存在共同的沙门氏菌污染来源，而我区不同地区多次发生的肠炎沙门氏菌引起的食物中毒也侧面印证了这一点。提醒大家在日常生活中要养成良好的卫生习惯，食物要洗净、煮熟煮透再食用，同时也提醒有关政府部门加强对食品从源头到餐桌的过程监管，从源头上防止病人粪便对食品的污染。

［1］杨保伟，张秀丽，曲东，等．2007—2008年陕西部分零售畜禽肉沙门氏菌血清型和基因型［J］．微生物学报，2010，50（5）：654－660．

［2］朱超，许学斌．沙门氏菌属血清型诊断［M］．上海：同济大学出版社，2009：1－2．

［3］侯在文，董塞明．宁夏地区沙门氏菌菌型分布及药敏试验［J］．宁夏医学杂志，1990，12（4）：236－238．

［4］Tenover FC，Arbeit RD，Goering RV，et al．Interpreting chromosomal DNA restriction patterns produced by pulsed－field gel electrophoresis：criteria for bacterial strain typing［J］．J Clin Microbiol，1995，33（9）：2233－2239．

［5］张毅，陈欣钦．2010年上海市食源性沙门菌菌型分布和药敏分析以及快速检测方法的建立［J］．现代生物医学进展，2011，（20）：3938－3941．