田秀娟,宋晶淼,曹 璐,冷维春,刘俊宝

(吉林大学中日联谊医院妇产科,吉林长春130033)

KAI1基因是1995年Dong等[1]发现的一种新的肿瘤转移抑制基因,KAI1基因是四次跨膜超家族TM4SF(Transmembrance 4 Superfamily)成员之一,参与细胞增殖、粘附和运动调节[2],KAI1基因表达缺失和人类许多上皮细胞恶化、侵袭、转移潜能有关[3,4]。现已在多种恶性肿瘤如乳腺癌、胰腺、结直肠癌、肝癌、肺癌、食管癌等癌组织及其转移灶中均证实了伴有KAI1基因表达的下降或缺失。本研究检测KAI1在宫颈鳞癌中的表达及其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取大庆龙南医院2009年1月-2010年10月间妇科门诊宫颈锥切术后10例正常宫颈组织、40例宫颈上皮内瘤变组织。36例宫颈鳞癌组织为住院患者且病例病理资料完整的手术切除标本,所有标本术前均未放疗、化疗和激素治疗。CINI8例,CINII15例,CINIII17例,其中36例宫颈鳞癌中有淋巴结转移者21例,占58.3%。无淋巴结转移者15例,占41.7%。年龄分布25岁-65岁,平均年龄45岁。宫颈癌标本根据国际妇产科联盟(FIGO,International Federation of Gynecology and Obstetrics)标准进行临床分期,其中Ⅰ期28例,Ⅱa期8例,细胞分化程度高-中分化19例,低分化17例。所有标本均在新鲜取材后,用福尔马林固定,石蜡包埋。所有切片均经两位病理学专家盲法认定。

1.2 方法

KAI1兔抗人单克隆抗体(浓缩型)购于北京博奥森生物技术有限公司,KAI1抗体工作浓度为1:100。SP免疫组化检测试剂盒、DAB显色液均购福州迈新生物技术有限公司。按试剂盒说明书严格操作,以PBS代替一抗设立阴性空白对照。

1.3 结果判定

KAI1表达是在细胞膜和(或)浆内出现黄色或棕黄色颗粒为阳性标准,每例镜下随机观察10个高倍视野(×200),进行双盲半定量积分判断结果[5]。根据阳性细胞所占百分比进行评分:阳性细胞百分率≤10%为1分;11%≤阳性细胞百分率≤50%为2分;51%≤阳性细胞百分率≤75%为3分;阳性细胞百分率≥75%为4分。细胞染色强度分4个等级,无色为0分;弱阳性(淡黄色)为 1分;中度阳性(棕黄色)为2分;强阳性(棕褐色)为3分。通过对细胞着色强度及阳性细胞百分率结果进行分析,两者评分相加,结果≥3分为阳性,＜3分判为阴性。

1.4 统计方法

显著性检验采用 χ2检验,当T＜1或 n＜40采用精确概率法,求 P值。所有数据统计都在SPSS17.0软件上进行。

2 结果

2.1 KAI1在正常宫颈组织中、宫颈上皮内瘤变组织中、宫颈鳞癌组织中表达的比较

KAI1蛋白阳性颗粒呈棕黄色,主要在细胞浆或细胞膜中表达,(见图1-图3),在正常宫颈组织、CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ和宫颈癌鳞组织中,KAI1阳性表达率呈递减趋势。依次为100%、87.5%、73.3%、63.1%、19.4%。正常宫颈组与宫颈鳞癌组比较有统计学意义,P＜0.05(χ2=21.79,P=0.000)。CIN组与宫颈鳞癌比较有统计学意义,P＜0.05(CINI与宫颈鳞癌比较 χ2=13.97,P=0.001;CINⅡ与宫颈鳞癌比较 χ2=13.46,P=0.000;CINⅢ与宫颈鳞癌比较 χ2=13.13,P=0.000)。正常宫颈组与CIN组比较无统计学意义P＞0.05(正常宫颈组与CINI比较P=0.444;正常宫颈组与CINII比较P=0.108;正常宫颈组与CINⅢ比较P=0.77)。CIN组间比较无统计学意义P＞0.05(CINI与CINⅡ比较P=0.414;CINⅠ与CINⅢ比较P=0.349;CINⅡ与CINⅢ比较P=0.589),见表 1。

2.2 KAI1在不同临床病理特征的宫颈鳞癌中的表达比较

表1 KAI1蛋白在不同卵巢组织中的表达

图1 KAI1在正常宫颈组织中的阳性表达(SP×200)

图2 KAI1宫颈 CINII中弱阳性表达(SP×200)

图3 KAI1在宫颈鳞癌中阴性表达(SP×100)

KAI1在无淋巴结转移的宫颈鳞癌组织中的阳性表达率为40%(6/15),在有淋巴结转移的宫颈鳞癌组织中的阳性表达率则降低至4.8%(1/21),两组表达之间比较有统计学意义(P＜0.05)。KAI1在细胞高-中分化组中的阳性表达率为36.8%(7/19),在细胞低分化组无阳性表达(0/17),两组表达之间比较有统计学意义(P＜0.05)。KAI1在宫颈鳞癌中的表达与细胞分化程度和淋巴结转移有关,而与组织浸润深度、临床分期、年龄、癌灶大小无关,(P＞0.05)见表2。

表2 KAI1在不同临床病理特征宫颈癌中的表达

3 讨论

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤,占女性癌的第二位。严重威胁着妇女的健康和生命。我国每年新发病例13.15万,约占世界宫颈癌新发病例的28.8%,宫颈癌我国发病年龄以40-50最多,60-70又一个高峰。20岁以下少见。随着近些年宫颈癌早期筛查的开展。使宫颈癌的发病率及死亡率有所降低。但仍存在很多病例,早期诊断时继已经出现侵袭和转移。浸袭和转移是恶性肿瘤的生物学特征,是影响肿瘤治疗及复发的主要因素,也是导致病人死亡的主要原因,而侵袭和转移又是一个多因素参与的极其复杂的病理过程。因此探寻宫颈癌侵袭转移的机制,早期判断宫颈癌转移在指导治疗及预后判断中有重要意义。

自从KAI1作为一个新的肿瘤转移抑制基因被发现以来,它抑制肿瘤侵袭和转移的机制就成为人们研究的重点。Schindl等[16]研究了KAI1在宫颈癌中的表达情况,结果显示CINI级KAI1高表达,CINII级CINIII级45%表达下调,而在浸润性宫颈鳞癌组织中KAI1表达29.3%强阳性,56%表达下调,14.7%不表达。认为KAI1表达下调是宫颈癌早期发生事件。Zhang等[7]采用PT-PCR技术检测宫颈癌织KAI1的表达,结果表明在宫颈鳞癌组织中KAI1表达减少,其表达与细胞分化及转移有关,提示KAI1参与了宫颈癌的发生发展,可能在一定程度上具有预测宫颈癌侵袭转移的潜能。Liu等[6]对宫颈癌KAI1表达与其分化的关系结果显示,低分化的宫颈癌更易发生转移。在王国庆[9]的研究中强调KAI1低表达与淋巴结转移显著相关。

本组研究结果显示,在正常宫颈、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宫颈鳞癌中,KAI1阳性表达率呈递减趋势。统计学检验表明KAI1在宫颈鳞癌中的表达率明显低于正常组织和CIN组,这一研究结果与Schindl等[6]、Zhang等[7]结果一致,提示宫颈癌发生的过程伴随着KAI1表达的下降。本组研究结果还显示,KAI1在正常宫颈组及CIN组的表达无统计学意义,并且与CIN分级无关。提示KAI1可能在细胞恶变早期的作用小于恶变晚期。这一结果与耿晓星等[10]研究结果一致。

关于KAI1表达和恶性肿瘤临床病理特性之间的关系,多数研究表明KAI1表达与肿瘤淋巴结转移状况、组织浸润深度、细胞分化程度、临床分期、预后之间有显著性相关,而与年龄、肿瘤大小、浸润方式之间无统计学相关[11,12]。本组研究显示,KAI1在宫颈鳞癌中的表达与细胞分化程度和淋巴结转移明显相关而与临床分期、浸润深度、癌灶大小、年龄等无关。为了研究KAI1在有无淋巴结转移的宫颈鳞癌组织中表达的差异,我们应用免疫组织化学方法检测了36例宫颈鳞癌组织中KAI1的表达。结果表明,有淋巴结转移的宫颈鳞癌组织中KAI1的表达率显著低于无淋巴结转移的宫颈鳞癌,提示宫颈鳞癌在发生淋巴结转移的过程中伴随着KAI1蛋白表达水平的下降,与这一结果与王国庆[9]束晓明[13]在宫颈癌中研究的一致。说明宫颈鳞癌中KAI1表达下调与淋巴结转移显著相关,可用来预测淋巴结的转移状况。本组研究还显示,KAI1在宫颈鳞癌的低分化组阳性表达明显低于高-中分化组,提示KAI1与细胞分化有关,随着分化程度降低,KAI1阳性表达减少或消失。这一结果与Zhang等[7]Liu等[8]研究一致。由此可见KAI1的低表达与宫颈鳞癌的发生发展有关,其低表达可能预示着该肿瘤更具有侵袭性,预后差,并可作为判断宫颈鳞癌的恶变程度指标之一。

[1]Dong JT,lamb PW,Rinker-Schaeffer CW,et al.KAI1,a metastasis gene for prostate cancer on human chromosome 11p11.2[J].Scicnce,1995,268(5212):884.

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[8]Liu FS,Chen JT,Dong JT,et al.KAI1 metastasis suppressor gene is fre2 quently down regulated in cervical carcinoma[J].Am Pathol,2001,159(5):1629.

[9]王国庆,暴 蕾,李明众,等.KAI1/CD82在宫颈鳞癌组织中的表达及其与淋巴结转移的关系[J].现代肿瘤医学,2006,14(6).

[10]耿晓星,马敬全,马 荣,等.KAI1在宫颈鳞癌中的表达及I床意义[J].实用肿瘤学杂志,2009,23(1).

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