梁超，关俊宏

（1.辽宁医学院附属第一医院危重症医学科，辽宁 锦州 121000；2.中国医科大学附属盛京医院神经外科，沈阳 110004）

PCNA在脑内海绵状血管瘤中的表达及意义

梁超1，关俊宏2

（1.辽宁医学院附属第一医院危重症医学科，辽宁 锦州 121000；2.中国医科大学附属盛京医院神经外科，沈阳 110004）

目的探讨脑内海绵状血管瘤（CCM）的发生、发展与内皮细胞增殖的关系。方法 以35例CCM石蜡标本为研究对象，以体表海绵状血管瘤、正常脑血管和脑内动静脉畸形为对照，采用免疫组化法检测其增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果 CCM 组内皮细胞增殖指数（12.01±1.01）显著低于体表海绵状血管瘤组（29.31±2.55）（t=6.24，P<0.01），与正常脑血管组（10.85±1.79）相比，差异无统计学意义（t=1.15，P>0.05），与脑内动静脉畸形（cAVM）组（16.38±2.04）相比，差异无统计学意义（t=1.78，P>0.05）。结论脑内海绵状血管瘤的发生、发展与内皮细胞的增殖无关，并非内皮细胞异常增生所致的真性肿瘤，应归类于中枢神经系统血管畸形。

细胞增殖；内皮细胞；PCNA

在临床长期随访中发现，部分脑内海绵状血管瘤（cerebral cavernous malformation，CCM）病灶存在动态增大趋势和切除后复发的现象，且随着患者年龄的增长，病灶数目可不断增加［1］。这种临床现象与脑血管畸形的内皮细胞无增殖性的理论相矛盾，中枢神经海绵状血管瘤是否具有增殖性有待进一步验证。增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）是一种仅在增殖细胞中合成与表达的多肽，可有效地反映细胞的增殖功能及肿瘤的增殖活性。本研究拟通过检测脑内海绵状血管瘤、正常脑血管、脑内动静脉畸形（cerebral arteiovenous malformation，cAVM）及体表海绵状血管瘤标本内PCNA的表达，探讨CCM的发生、发展与内皮细胞增殖之间的关系。

1 材料与方法

1.1 材料

（1）CCM组（n=35）：来源于中国医科大学附属盛京医院神经外科2002年至2009年手术切除并经病理证实的标本，包括额叶12例，枕叶8例，颞叶5例，基底节2例，小脑半球8例。其中男19例，女16例。年龄1～67岁，平均年龄37岁。病程自6h～20年不等。有癫痫发作者12例，出血17例，无症状6例（为脑外伤后头部摄片时偶然发现）；（2）正常脑组织血管组（n=9）：来源于癫痫患者行颞叶切除及开放性颅脑外伤手术切除；（3）脑内动静脉畸形（cAVM）组（n=10）及体表海绵状血管瘤组（n=10）：来源于中国医科大学附属盛京医院病理科的石蜡标本。

1.2 实验方法

采用免疫组化S-P法检测PCNA的表达。标本经10%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，制石蜡切片。常规二甲苯脱蜡、梯度乙醇水化。切片置柠檬酸缓冲溶液（pH6.0）内，微波加热（92℃～98℃）15min以修复抗原，其余步骤均按S-P免疫试剂盒说明书进行（PCNA抗体及S-P免疫试剂盒为博士德公司产品），用PBS代替一抗做阴性对照。结果判定：细胞核呈棕黄或棕褐色染色者为阳性细胞，细胞染色阳性率≥25%为阳性标本，切片无阳性细胞或细胞染色阳性率＜25%为阴性。阳性细胞按染色强度和范围分为：（1）弱阳性（+）：阳性细胞呈淡黄色或阳性细胞率介于 25%～50%；（2）中度阳性（++）：阳性细胞呈棕黄色或阳性细胞率介于50%～75%；（3）强阳性（+++）：阳性细胞呈深棕黄色或阳性细胞率＞75%。在高倍（×400）显微镜下，随机选取5个视野，计算阳性细胞总数及内皮细胞总数。血管内皮细胞增殖指数（proliferation index，PI）=PCNA阳性细胞总数/内皮细胞总数×100%。

2 结果

免疫组化检测结果显示，PCNA阳性染色表现为细胞核呈棕黄色，阳性细胞呈散在或片状分布。正常脑组织血管中PCNA表达呈阴性（-），脑内CCM 中呈弱阳性（+），cAVM 中呈阳性（++），而体表海绵状血管瘤组织中PCNA的表达则呈强阳性（+++）。见图 1。

CCM组内皮细胞增殖指数（12.01±1.01）显著低于体表海绵状血管瘤组（29.31±2.55，t=6.24，P<0.01），与正常脑血管组（10.85±1.79）相比，差异无统计学意义（t=1.15，P>0.05），与脑内动静脉畸形（cAVM）组（16.38±2.04）比较，差异也无统计学意义（t=1.78，P>0.05）。

3 讨论

目前对CCM的增长方式仍存在争议。有研究认为，CCM可能是先天畸形，其增长是血窦扩张［2］。有文献报道，CCM可在切除和放射治疗多年后复发，因而认为CCM可能是真正的新生物，其增长是新血管瘤组织形成［3］。另有学者发现，CCM内皮细胞增殖活性明显高于正常脑血管内皮细胞，认为CCM可能是真性肿瘤［4］。

PCNA是一种仅在增殖细胞中表达与合成的多肽，其表达和合成与细胞的增殖周期有关，在静止期细胞内含量很低，自G1晚期逐渐增加，S期达到高峰［5］，因此，PCNA被认为可有效地反映细胞客观的增殖功能，并在很大程度上可能代表病灶具有肿瘤的增殖活性［6］。为此，我们采用免疫组化技术对35例CCM病变标本及正常脑血管、脑内动静脉畸形及体表海绵状血管瘤标本进行了PCNA表达的检测，以探讨PCNA在CCM病变中的表达及临床意义。

体表海绵状血管瘤是血管内皮细胞异常增生而形成的血管增生性疾病，是一种良性肿瘤，存在内皮细胞的增殖；脑内AVM是血管畸形，血管内皮细胞无增殖性，这些已经被研究者所公认。本研究结果发现，PCNA在CCM组内皮细胞中的表达水平显著低于体表海绵状血管瘤组（P<0.01），较正常脑血管内皮细胞高，但差异无统计学意义（P>0.05），与脑内AVM相比，差异也无统计学意义（P>0.05）。以上结果均提示，脑内海绵状血管瘤的发生、发展可能与内皮细胞增殖无关，因此，脑内海绵状血管瘤并非内皮细胞异常增生所致的真性肿瘤，CCM与cAVM均应归类于中枢神经系统血管畸形，这也是CCM未见癌变的生物学基础。本研究中少数CCM内可见PCNA呈弱阳性表达，我们考虑这是由于某种因素（如血流变化、缺血缺氧等）的刺激激发了PCNA的释放，使实验结果呈弱阳性。

［1］Labague P，Brunereau L，Laberg S，et al.Prospective follow-up of 33asymptomatic patients with familial cerebral cavernous malformation［J］.Neurology，2001，57（2）：1825-1828.

［2］周良辅.现代神经外科学［M］.上海：复旦大学出版社，2001：880-889.

［3］Pozzati E，Acciarri N，Toghetti F，et al.Growth，subsequent bleeding，and de novo appearance of cerebral cavernous angiomas ［J］.J Neurosurg，1996，38（5）：662-670.

［4］Clatterbuck RE，Moriarity JL，Elmaci L.Dynamic nature of cavernous malformations：a prospective magnetic resonance imaging study with volumetric analysis［J］.J Neurosurg，2000，93（5）：981-986.

［5］Prelich G，Tan CK，Kostura M，et al.Functional identity of proliferating cell nuclear antigen and a DNA polymerasedelta auxiliary protein［J］.Nature，1987，326（4）：517-518.

［6］Beck H，Acker T，Puschel AW，et al.Cell type-specific expression of neuropilins in an MCA-occlusion model in mice suggests a potential role in post-ischemic brain remodeling［J］.J Neuropathol Exp Neurol，2002，61（4）：339-350.

（编辑王又冬，英文编辑刘宝林）

Expression and Its Significance of PCNA in Cerebral Cavernous Malformation

LIANG Chao1，GUAN Jun-hong2
（1.Intensive Care Unit，The First Affiliated Hospital，Liaoning Medical College，Jinzhou 121000，China；2.Department of Neurosurgery，Shengjing Hospital，China Medical University，Shenyang 110004，China）

ObjectiveTo explore the relationship between the proliferation of endothelia cells in cerebral cavernous malformation（CCM）and the occurrence and development of CCM.MethodsThirty five CCM specimens of resection or biopsy were studied.Another 9specimens of small blood vessel in normal brain，10specimens of AVM and 10specimens of strawberry hemangioma were used as control.The expression of proliferating cell nuclear antigen（PCNA）was assessed with monoclonal antibody of PCNA by immunohistochemical ABC method.ResultsProliferation index （PI）of endothelia cells in CCM was 12.01±1.01，which wasn’t significantly different from that of endothelia cells of small blood vessels in normal brain（ 10.85±1.79）（t=1.15，P>0.05），and not significantly different from PI of endothelia cells of cAVM（16.38±2.04），either（t=1.78，P>0.05）.However，PI of endothelia cells in CCM and that of tumor cells in strawberry hemangioma（29.31±2.55）was significanly different（t=6.24，P<0.01）.ConclusionAbnormal proliferation of endothelia cells was not related to the occurrence and development of CCM，which should be classified into nonmalignant vascular malformation in central nervous system.

cell proliferation；endothelia cell；PCNA

R651.1

A

0258-4646（2011）05-0452-03

doiCNKI：21-1227/R.20110523.1814.015

http：//www.cnki.net/kcms/detail/21.1227.R.20110523.1814.015.html

梁超（1974-），男，医师，硕士.E-mail：gaoyin1978@163.com

2010-10-14

网络出版时间：2011-05-1815：25