祝娉婷，卜平，孙云，郑新梅，张振刚，张旭东，孙党红

（1.扬州大学医学院中西医结合研究所，江苏 扬州 225001；2.扬州市第一人民医院心内科，江苏 扬州 225001；3.江苏省苏北人民医院心内科，江苏 扬州 225001）

半枝莲总黄酮对ApoE基因敲除小鼠血清PLTP、IL-6、CRP表达的影响

祝娉婷1，卜平1，孙云1，郑新梅1，张振刚2，张旭东3，孙党红3

（1.扬州大学医学院中西医结合研究所，江苏 扬州 225001；2.扬州市第一人民医院心内科，江苏 扬州 225001；3.江苏省苏北人民医院心内科，江苏 扬州 225001）

目的探讨半枝莲总黄酮对载脂蛋白E基因敲除小鼠AS病变形成早期血脂水平与血清磷脂转运蛋白（PLTP）、Il-6、C反应蛋白（CRP）表达的影响。方法 载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为模型组、辛伐他汀组、银杏叶胶囊组、半枝莲总黄酮高、中、低剂量组，取正常C57BL/6小鼠为对照组，各6只。除模型组、对照组给予等容量羧甲基纤维素钠外，其他各组分别给予阳性对照药与受试药8周。处死小鼠，ELISA法检测血脂、PLTP、IL-6及CRP的表达水平。取主动脉制作切片、HE染色，观察形态学变化。结果 半枝莲总黄酮中、高剂量组TG、TC、LDL-C水平明显低于模型组，高剂量组HDL-C水平高于模型组，半枝莲总黄酮各组PLTP、IL-6、CPR的表达水平较模型组明显降低，有统计学意义。PLTP与IL-6水平呈正相关，与CRP水平呈正相关，IL-6与CRP水平呈正相关。结论 半枝莲总黄酮可通过降低载脂蛋白E基因敲除小鼠TG、TC、LDL-C水平，升高HDL-C水平，降

低PLTP、IL-6、CPR水平而发挥抗AS的作用。

半枝莲总黄酮；载脂蛋白E基因敲除小鼠；血脂；磷脂转运蛋白；白介素6；C反应蛋白

磷脂转运蛋白（phospholipid transfer protein，PLTP）是一种脂多糖结合蛋白，参与高密度脂蛋白（high density lipoprotein，HDL）的代谢和重构。PLTP高表达可以促动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）的发生发展［1］。C反应蛋白（creactive protein，CRP）对冠心病有着最强的预测价值，血清白介素6（interleukin-6，IL-6）浓度越高，其发生冠状动脉粥样硬化的风险越高［2，3］，本研究旨在观察半枝莲总黄酮（total flavonoids of scutellaria barbata，TFSB）对高脂饲养载脂蛋白E基因敲除（apolipoprotein Egene knockout，ApoE-/-）小鼠 AS病变的影响，旨在通过脂蛋白途径研究中药TFSB防治AS的作用机制，为探索AS的治疗药物开辟新靶点。

1 材料与方法

1.1 材料

11周龄ApoE-/-小鼠36只（北京市维同利华实验动物中心提供，SCXK京2006-0008），雌雄各半，体质量（22.5±3.2）g。血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、PLTP、IL-6、CPRELISA试剂盒（美国SC公司）。BX51系统显微镜（Olympus公司）；JEDA801D形态学图象分析系统（江苏捷达科技发展有限公司）。TFSB由扬州大学医学院药学实验室提供。TFSB为醇提法提取，总黄酮含量为24.12%。辛伐他汀40mg/片，5片/盒，杭州默沙东制药有限公司，批号：100260。银杏叶胶囊 20mg/片，20片/盒，上海信谊百路达药业有限公司，批号：1052003。

1.2 方法

11周龄小鼠普通饲料适应性饲养1周。随机分为阳性对照辛伐他汀组（3.3mg·kg-1·d-1）、银杏叶胶囊组 （150mg·kg-1·d-1）、TFSB设 400、200、100mg·kg-1·d-13个剂量组，每组6只。取11周龄正常C57BL/6小鼠6只为正常对照组。给予高脂饲料（配方：1%胆固醇+5%猪油+5%蛋黄十89%普通饲料）4周后分别灌胃给药。正常对照组给予等容量羧甲基纤维素钠（CMC），干预8周。禁食12h，实验时眼眶取血，分离血清。采用ELISA方法检测TG、TC、LDL-C、HDL-C、PLTP、Il-6、CRP表达。取主动脉制作石蜡切片，HE染色，光镜观察病理改变。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 TFSB对ApoE基因敲除小鼠血清脂质的影响

模型组TC、LDL-C水平明显升高，TG水平亦明显升高，HDL-C水平明显降低，与正常对照组比较，具有显著性差异（P<0.01，P<0.001），提示造模成功。TFSB可明显降低TG、TC、LDL-C、升高HDL-C水平，结果见表1。

2.2 TFSB对ApoE基因敲除小鼠PLTP、IL-6、CPR水平的影响

模型组PLTP、IL-6、CPR水平均明显高于正常对照组。TFSB明显降低PLTP、IL-6、CPR水平，结果见表2。经Linear Regression相关分析，PLTP与IL-6呈正相关（r=0.642，P<0.01），PLTP与CRP呈正相关（r=0.673，P<0.01），IL-6与 CRP呈正相关（r=0.546，P<0.01）。

2.3 TFSB对AS模型小鼠主动脉形态结构的影响

HE染色后光学显微镜下观察：正常对照组主动脉内膜结构正常，无AS病灶。模型组主动脉管壁内膜明显增厚，可见隆起如丘状样斑块。TFSB低、中剂量组和内皮细胞结构基本完好，内膜层可见泡沫细胞，较光滑，弹性膜分层欠清楚。高剂量组可见内皮层结构完好，内膜光滑，管壁3层结构分层清楚，形态结构较模型组明显改善。

3 讨论

脂质转运蛋白的表达调控在脂蛋白代谢和AS中的作用是国外研究新热点。PLTP是一种重要的脂质转运蛋白，能从脂解中的乳糜微粒、极低密度脂蛋白（VLDL）和低密度脂蛋白（LDL）残粒向HDL转移磷脂，影响AS的发生发展［4］。流行病学研究表明，PLTP活性是预测冠心病的独立影响因子，PLTP可以作为抗AS的新靶点［5］。CRP是冠状动脉病变所致的心血管事件独立的预测因子，CRP水平与冠脉、脑动脉和周围动脉粥样硬化密切相关。IL-6是促炎性反应细胞因子，其浓度升高提示冠心病患者病情加重和预后不良［6］。国内文献尚无通过抑制PLTP表达途径抗AS的相关研究，也无PLTP、CRP、IL-6的相关性研究。

半枝莲的主要有效成分黄酮类化合物能抑制脂质过氧化反应、清除自由基、调节血脂、抑制血小板凝聚、抑制毛细血管通透性增加、抑制脆性增加，抑制AS的形成和发展。目前对中药抗AS的研究较少涉及到酶、受体、蛋白转导通路等信号机制，尚未见半枝莲及其化学成分通过脂蛋白途径抗AS的相关报道。

ApoE-/-小鼠即便饲以正常饮食，10周后可见脂质条纹形成，20周后可发生明显的动脉粥样硬化。其原因为载脂蛋白E基因敲除导致肝脏对VLDL、乳糜微粒的摄取、清除障碍，而使高含胆固醇的残粒在血浆中的堆积引起高脂血症，引发动脉粥样硬化。本研究结果显示，TFSB作用于ApoE-/-8周后，能够显著降低模型小鼠的TC、TG、LDL-C水平，升高HDL-C水平；能明显降低CRP、IL-6的表达水平，提示TFSB可能通过抑制动脉粥样硬化形成过程中炎症的启动和致炎因子的激活，延缓其进程，预防和治疗动脉粥样硬化性疾病。研究结果同时显示，TFSB能降低血清PLTP水平，PLTP水平与CRP、IL-6呈正相关，表明血清PLTP水平与机体慢性炎症状态有密切关联，TFSB对PLTP信号通路转导的调节机制有待下一步深入研究。

［1］Schlitt A，Bickel C，Thumma P，et al.High plasma phospholipid transfer protein levels as a risk factor for coronary artery disease［J］.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2003，23（10）：1857-1862.

［2］Hartford M，Wiklund O，Mattsson L，et al.CRP，interieukin-6，secretory Phospholipase A2group IIA，and intercellular adhesion molecule-1during the early Phase of acute coronary syndromes and long-term follow-up［J］.Int JCardiol，2006：108（l）：55-62.

［3］Hartford M，Wiklund O，Mattsson L，et al.CRP，interieukin-6，secretory Phospholipase A2group IIA，and intercellular adhesion molecule-1in the Prediction of late outcome events after acute coronary syndromes［J］.JIntern Med，2007，262（5）：526-536.

［4］秦树存，叶平.磷脂转运蛋白的生物学特性及其与脂蛋白代谢相关疾病的关系［J］.中华老年心脑血管病杂志，2008，10（8）：633-635.

［5］Schlitt A，Liu J，Yan D，et al.Anti-inflammatory effects of phospholipid transfer protein deficiency in mice［J］.Biochim Biophys Acta，2005，1733（2）：187-191.

［6］Han SH，Quan MJ，Koh KK.Beneficial vascular and metabolic effects of peroxisome proliferator-activated receptor-alpha activators［J］.Hypertension，2005，46（5）：1086.

（编辑 裘孝琦，英文编辑 赵传胜）

Effect of TFSBon the Expression of PLTP，IL-6，CPRinApoEGene Knockout Mice

ZHUPing-ting1，BOPing1，SUNYun1，ZHENXin-mei1，ZHANGZhen-gang2，ZHANGXu-dong3，SUNDang-hong3
（1.Research Institute of Chinese and Western Integrative Medicine，Medical College of Yangzhou University，Yangzhou 225001，China；2.Department of Cardiology，The First People’s Hospital，Yangzhou 225001，China；3.Department of Cardiology，Northern Jiangsu People’s Hospital，Yangzhou 225001，China）

ObjectiveTo observe the effect of TFSBon the levels of serum lipids and expression of PLTP，IL-6，CRPin ApoEgene knockout mice in the early period of atherosclerosis.MethodsThirty-sixApoEgene-deleted mice were randomly divided into six groups：model group，Simvastatin group，Ginkgo capsule group，and groups with high，middle，low-dose of TFSB（fed with high-lipid forage）.Six mice of C57BL/6were chosed as the control group.Excepting the control and model group （fed with equal CMC），each group was treated with positive control drugs and tested drugs for 8weeks respectively.Serum levels of TG，TC，LDL-C，HDL-C，PLTP，IL-6，CRPwere assayed by ELISAafter the mice were killed.Hematoxylin-eosin staining were used to observe the morphological changes of atherosclerosis.ResultsCompared with model group，levels of PLTP，IL-6，CRPin TFSBgroups were obviously lower while higher level of HDL-Cwas found in group with high dose of TFSBand lower levels of TG，TC，LDL-Cwere found in groups with middle and high dose of TFSB.There is a positive correlativity of PLTPand IL-6，PLTPand CRP，IL-6and CRP.ConclusionTFSBcan lower the serum levels of TG，TC，LDL-C，PLTP，IL-6，CRP，and raise the serum level of HDL-CinApoEgene knockout mice to prevent AS.

TFSB；ApoEgene knockout mice；lipid；PLTP；IL-6；CRP

R543.5

A

0258-4646（2011）05-0394-03

doiCNKI：21-1227/R.20110523.1816.026

http://www.cnki.net/kcms/detail/21.1227.R.20110523.1816.026.html

教育部博士点基金项目（20093250120007）；江苏省普通高校研究生科研创新项目（CX09B_320Z）

祝娉婷（1984-），女，助教，博士研究生.

卜平，E-mail：boping@yzu.edu.cn

2011-02-21

网络出版时间：2011-05-1815:25