李岩伟,杨凤宝,宋立华,马桂花,朱 虹,端 青

2.宁夏回族自治区盐池县滩羊选育场;

3.宁夏回族自治区盐池县动物疾病预防控制中心

鹦鹉热衣原体基因工程亚单位疫苗免疫羊抗体产生动力曲线*

李岩伟1,杨凤宝2,宋立华1,马桂花3,朱 虹1,端 青1

目的观察鹦鹉热衣原体基因工程亚单位疫苗免疫羊后产生的动力学曲线。方法 用不同剂量鹦鹉热衣原体主要外膜蛋白基因工程亚单位疫苗免疫绵羊,免疫前及免疫后不同时间采血检测抗体情况,观察绵羊抗体的产生和变化水平。结果 免疫剂量为0.5mg/只颈部肌肉多点注射,具有良好的免疫效果。结论 鹦鹉热衣原体基因工程亚单位疫苗免疫剂量为0.5mg/只颈部肌肉多点注射,在绵羊整个妊娠期内具有保护作用。

衣原体亚单位疫苗;免疫;动力曲线

2.宁夏回族自治区盐池县滩羊选育场;

3.宁夏回族自治区盐池县动物疾病预防控制中心

鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci,Cps)是造成羊地方性流产的主要病原菌之一,首次感染Cps的受孕绵羊和山羊的流产率分别高达30%和70%,给许多国家畜牧业造成重大损失〔1〕。我国禽类和畜类Cps感染也十分严重,我们自1989年以来多次为北京地区鸡场、种鸡场、兔场和进口病羊诊断Cps感染。我国引种频繁的集约化饲养畜禽场的Cps感染率在8%～50%之间,发生过感染的畜禽场中,动物群的流产率和死胎率远高于安全场。另外,近年来从国外引进的动物种群携带并感染有Cps的已有多起报道。因此,Cps感染以及局部爆发流行已对我国畜牧业形成严重威协,爆发流行时经济损失惨重,已成为国内外人兽共患病研究的重要课题。

疫苗研究一直是预防病原感染的重要手段,基因工程亚单位疫苗由于其安全,容易大规模生产,而越来越受到人们的青睐。Cps主要外膜蛋白(MOMP)是种特异性抗原,通过基因工程表达的rCps-MOMP具有良好的免疫原性〔2〕,并对小鼠和肉鸡显示了良好的免疫保护作用〔3-4〕。

本实验将我们自主研制的rCps-MOMP制成亚单位疫苗,于配种前免疫母羊,观察疫苗的安全性和相关抗体产生及其变化规律。

1 材料方法

1.1 动物 12月龄雌性绵羊34只,品种为多赛特和小尾寒羊杂交1代,由北京市门头沟种羊场提供。

1.2 疫苗 rCps-MOMP(0.25mg/mL)与白油乳化亚单位疫苗,军事医学科学院微生物流行病研究所研制。

1.3 试剂 鹦鹉热抗体快速检测试剂(胶体金法),军事医学科学院微生物流行病研究所研制。

1.4 免疫 rCps-MOMP免疫动物实验分组及免疫剂量见表1。动物在配种前25d进行颈部肌肉多点注射免疫,高剂量组仅免疫1次,中剂量和低剂量组动物在第1次免疫80d后加强免疫1次,免疫剂量和途径同前。

表1 rCps-MOMP免疫动物实验分组及免疫剂量Table 1 Groups and doses of experimental animalsvaccinated rCps-MOMP

1.5 血清抗体检测 分别在免疫前和第一次免疫后 14d 、30 d、60 d 、90 d、120 d 、150 d 和 180 d 采血 ,分离收集血清。血清抗体滴度检测按照试剂使用说明操作。

1.6 统计方法 抗体水平采用抗体稀释度的对数表示,不同剂量组和不同免疫时间的抗体水平采用10只绵羊抗体水平的平均值,用(±s)表示。选用能处理具有一个重复测量两因素设计定量资料的方差分析处理数据,在SAS软件中操作。

2 结 果

2.1 rCps-MOMP亚单位疫苗的安全性 rCps-MOMP亚单位疫苗免疫动物后,免疫部位未见红肿和结节,饮食和精神状况良好,受孕正常,无不良反应,说明疫苗是安全的。

2.2 rCps-MOMP亚单位疫苗免疫羊抗体产生的动力学曲线 免疫前实验组绵羊Cps抗体检测均为阴性,对照组绵羊每次采血检测Cps抗体均为阴性。各剂量免疫组动物不同时间抗体平均水平作图1～3。从图1可以看出,高剂量组动物抗体在免疫后27～28d达到最高水平,平均效价为1∶8 000,之后慢慢降低,60d后进入平台期,仍维持在较高的抗体水平(1∶2 000以上),个别绵羊270d还能检测到1∶100的抗体;中剂量组动物抗体在免疫后14d达到最大值1∶400,之后迅速降低,80d加强免疫后,其抗体最高水平仍低于14d最大值,在分娩前抗体水平已降至1∶10以下;低剂量组动物抗体在免疫后14d抗体水平达到最大值1∶80,明显低于其他两组,加强免疫后抗体水平仍没有提高,且降低迅速,分娩前30d大部分动物抗体检测阴性。以上结果经统计学分析,各免疫剂量组之间的动物抗体平均水平差异显著(P＜0.005),高剂量组动物的抗体水平达到了良好的免疫效果。

3 讨 论

预防Cps感染最好的办法是免疫接种,最初的Cps疫苗是从接种的鸡胚中提取并灭活的Cps菌体疫苗,这种疫苗虽然也能起到一定的保护作用,但存在许多弊端,如不易大规模生产、成本高不易推广、存在变态反应原等。近年来发现Cps-MOMP具有良好的免疫保护性,以其为基础研制基因工程亚单位疫苗的实验已在一些国家开展〔5〕。

本实验用不同剂量rCps-MOMP亚单位疫苗于配种前25d免疫母羊,观察不同时间抗体产生水平。实验结果表明,免疫剂量为0.5mg/只颈部肌肉多点注射,动物抗体滴度于免疫后27～28d达到最高水平,平均效价为1∶8 000,之后慢慢降低,60d后进入平台期,仍维持在较高的抗体水平直至分娩,显示了良好的免疫效果。

〔1〕Rodolakis A.Les infections àChlamy dia psittaci:acquisitions récentes et applications au diagnostic et à l' é pidémiologie des chlamydioses aviaires,canines et felines〔J〕.Prat Mé d Chir Anim Comp,1993,28(3):321-330.

〔2〕刘向伟,张浩杰,王效义,等.重组鹦鹉热衣原体主要外膜蛋白的抗原性研究〔J〕.生命科学研究,2002,3(6):267-269.

〔3〕朱虹,张浩杰,何君,等.鹦鹉热衣原体重组主要外膜蛋白诱导小鼠免疫应答的观察〔J〕.微生物学免疫学进展,2003,31(3):35-36.

〔4〕郝永新,何诚,赵德明,等.鹦鹉热衣原体重组主要外膜蛋白诱导肉鸡免疫应答观察〔J〕.中国人兽共患病杂志,2004,20(12):1065-1067.

〔5〕Longbottom D,Living stone M.Vaccination against chlamydial infections of man and animals〔J〕.Vet J,2006,171:263 – 275.

Kinetics curve of antibody responses in ewes immunized with subunit vaccine of genetically engineeredChlamydia psittaci

LI Yan-wei,YANG Feng-bao,SONG Li-hua,MA Gui-hua,ZH U Hong,DUAN Qing
(State Key Laboratory of Pathogen and Biosecurity,Institute of Microbiology and Epidemiology,Academy of Military Medical Science,Beijing100071,China)

This study analyzed antibody responses in ewes vaccinated with three different doses of major outer-membrane protein subunit vaccine from genetically engineeredChlamydia psittaci.Sera of ewes were detected before vaccination and at different times post-vaccination.Experimental results indicated that multilocus intramuscular injection in the neck region with dose of 0.5 mg per ewe could stimulate good immune response.

chlamydial subunit vaccine;immune;kinetic curve

R374

A

1002-2694(2010)09-0835-02

*艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治(2008ZX10004-003)

端青,Email:duanq@nic.bmi.ac.cn

1.军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室,北京 100071;

2010-03-28;

2010-06-18