刘衡 姚春芬 陈英 肖怀

天南星科(Araceae)中多种植物的干燥块茎常用于中药，性苦、辛、温、具有燥湿化痰、祛风定惊、消肿散瘀之功效［1］，临床上用于痰多咳嗽、恶心呕吐等的治疗。天南星中主要含生物碱类物质，目前国内外学者已从中分离到多种生物碱［2］，包括葫芦巴碱，秋水仙碱等。近代药理研究表明葫芦巴碱对正常动物和化学诱导糖尿病动物具有降血糖活性［3］。作者采用高效液相色谱法对分布于云南的三种民间作为药用及中药配伍的天南星植物，山珠半夏、一把伞南星、虎掌南星中的葫芦巴碱含量进行了测定，并比较了不同地域间的差异。

1 材料与仪器

1.1 仪器 Agilent-1100型高效液相色谱仪;岛津TU-1901型分光光度计;SY3200-T超声波提取器等。

1.2 试剂及样品 葫芦巴碱对照品购于中国药品生物制品检定所(110883-200502);乙腈(色谱纯);甲醇(AR);娃哈哈纯净水;不同种天南星块茎5份，经大理学院药学院生药教研室马晓匡教授和周浓老师鉴定为一把伞天南星(Arisaema.erunescens(Wall.)Schott)、山珠半夏(Arisaema.yunnanense Buchet)、虎掌南星(Pinellia.pedatisecta Schott)，样品储存于药学院植物标本室。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液制备 精密称取于80℃干燥至恒重的葫芦巴碱对照品9.4 mg，用甲醇定容于50 ml量瓶中，备用。

2.2 样品溶液制备 样品粉碎，过筛后干燥至恒重，密封储存。精密称取样品约2.0 g，置具塞锥形瓶中，加甲醇25 ml，密塞浸泡10 h后，超声提取3次，每次30 min，过滤，合并滤液，蒸干，残渣用甲醇溶解，定容至10 ml，0.45 m滤膜过滤，取续滤液备用。

2.3 色谱条件 色谱柱:Luna 5 NH2100A(250 mm×4.6 mm)，流动相:乙腈 －水(72:28)，流速:0.8 ml/min，柱温:30℃，进样量:20 μl，检测波长:265 nm。

2.4 线性范围考察 分别精密吸取“2.1”的对照品溶液2.00ml稀释至10ml量瓶中定容，浓度为3.76 g/ml。连续进样6 次，进样量分别为 2.0，4.0，8.0，10.0，16.0，20.0，依上述色谱条件测定，葫芦巴碱的保留时间为7.2 min。以色谱峰面积Y，对照品浓度X(g)绘制标准曲线，得回归方程为:Y=1544.5X+0.0789，r=0.9992(n=6)。结果表明葫芦巴碱在0.00752～0.0752 g范围内呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验 取同一样品液，按“2.3”项操作，重复进样6次，记录峰面积，RSD为0.56%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验 取同一样品液，按“2.3”项操作，分别在0，0.5，1，2，4，6，8，12 h，测定峰面积，RSD=1.40%，表明样品在12 h内基本稳定。

2.7 重现性试验 精密称取同一样品6份，每份约2.0 g，按“2.2”和“2.3”项测定含量，平均含量为17.39 g/g，RSD=1.20%(n=6)，重现性良好。

2.8 加样回收试验 精密称取已知含量(17.39 g/g)的同一样品约1.0 g共6份，分别加入2.82 g/ml(取浓度为0.188 mg/ml储备液1.5 ml，定容于100 ml量瓶)的对照品溶液3.0，5.0，11.0 ml，按“2.2”和“2.3”项测定含量，根据计算量，测定量及加入量计算得平均回收率为101.0%，RSD=2.03%。

2.9 样品的测定 每个样品平行称取3份，按“2.2”项和“2.3”项测定，每份样品平行进样3次，取平均值，以外标法计算葫芦巴碱的含量，结果见表2。

表1

3 结果与讨论

3.1 波长选择 配制一定浓度的葫芦巴碱对照品溶液，用TU－1901型分光光度计扫描，测得最大吸收波长为203 nm和265 nm，选择265 nm为检测波长。

3.2 色谱柱及色谱条件选择 采用C18柱，反复摸索了不同比例的甲醇-水-三乙胺［4］，不同比例的0.05%十二烷基磺酸钠-甲醇-冰醋酸［5］等流动相，及不同柱温条件，都不能获得较好的分离效果。后改用氨基柱［6，7］，分别考察了不同比例的乙腈-水等梯度及乙腈-水梯度洗脱，发现梯度洗脱中随着梯度变化，基线波动很大，而等梯度的乙腈-水(72:28)作为流动相时样品有较好的峰形和分离度(见图1)。

3.3 结果比较 测定结果提示5份样品均含葫芦巴碱，但不同种植物间有明显差异。不同产地的同种植物含量也不相同。

［1］韦英杰，杨中林.天南星研究进展.时珍国医国药，2001，12(3):264-267

［2］于强，于洋.天南星化学成分和药理作用研究概况.中医药信息，2007，24(5):26-28

［3］史江华，李多伟，逄敏杰，等.葫芦巴研究新进展.西北药学杂志，2007，22(3):153-155.

［4］王艳华，张连成.HPLC法测定天南星中葫芦巴碱的含量.黑龙江医药，2004，17(5):329-330.

［5］中国药典2005年版.一部.2005:167.

［6］赵怀清，曲燕，王学娅，等.高效液相色谱法测定葫芦巴中葫芦巴碱的含量.中国中药杂志，2002，27(3):194-196.

［7］宋粉云，张德志，钟运香，等.HPLC法测定紫茉莉根中葫芦巴碱的含量.中国新药与临床药理，200516(3):189-191.