■ 谢大识 曾玉华，* 张 玲 龚光辉 罗平华 胡松梅

（1.娄底职业技术学院，湖南娄底 417000；2.湖南绿一佳农业科技发展有限公司，湖南娄底 417000；3.涟源市天柱山禽业专业合作社，湖南娄底 417000）

林下养鸡是将传统家禽养殖方法和现代生产技术相结合而新兴的一种立体生态养殖模式，可实现农林牧生态种养循环，且产出的绿色健康肉蛋产品能够弥补规模化养鸡体系无法实现的个性化市场消费需求，能够满足人们对食品品质的追求，有利于提升消费品质、提高生活质量、培育绿色消费市场[1-3]。随着林下养鸡模式的发展，提高土鸡健康状况和养殖经济效益对林下养鸡模式的健康快速发展至关重要。复合微生态制剂是一类利用多种有益微生物制成的生物活菌制剂，能够改善动物肠道微生物菌群结构，且具有纯天然、无耐药性、无环境污染等优点，是当前诸多抗生素替代品中最具发展潜力的新型饲料添加剂[4-6]，目前在规模化肉鸡养殖中研究和应用较广泛[7-9]，但其在林下养鸡方面的研究与应用较少，鉴于此，本试验探讨了复合微生态制剂不同添加剂量对林下养殖土鸡生长性能、粪便微生物、血清免疫指标及生化指标的影响，为复合微生态制剂在林下鸡养殖中的推广奠定基础。

1 材料与方法

1.1 复合微生态制剂

复合微生态制剂购自湖北华大瑞尔科技有限公司，主要成分为芽孢杆菌、酵母菌、乳酸杆菌等，其活菌总数≥1.0×109CFU/g。

1.2 土鸡

240 只21 日龄天柱山孙水河黑鸡（公、母各半，平均体重为（630.28±3.19） g，由湖南天柱山禽业股份有限公司提供。

1.3 培养基、试剂盒

LBS 培养基、BL 培养基、EMB 培养基、SS 培养基，均购自上海远慕生物科技有限公司；鸡免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素6（IL-6）、γ干扰素（IFNγ）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）含量、碱性磷酸酶（ALP）、谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）活性检测试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所有限公司。

1.4 试验时间、地点及土鸡饲养管理

试验于2023年5—7月在湖南绿一佳农业科技发展有限公司进行，土鸡采用林下散养的饲养方式，自由采食和饮水。

1.5 试验设计

将240 只21 日龄天柱山孙水河黑鸡完全随机分成4组，每组60只土鸡，每组3个重复，每个重复20只土鸡。对照组土鸡饲喂基础日粮（日粮组成及营养水平见表1），试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别以拌料的形式在基础日粮中添加100、500、1 000 mg/kg 的复合微生态制剂，试验期42 d。

表1 基础日粮组成及营养水平（风干基础）

1.6 样品采集

1.6.1 粪便样品试验结束时，从每个重复中随机挑选10 只土鸡，依次采集其新鲜粪便。

1.6.2 血清样品土鸡采集完新鲜粪便后，于土鸡的翅静脉处采集血液2.0 mL，常规方法分离血清样品。

1.7 检测指标与方法

1.7.1 生长性能指标

分别记录土鸡在试验开始时的初重和试验结束时的末重，计算平均日增重。记录每个重复的饲料消耗量，计算平均日采食量及料重比。

1.7.2 粪便微生物数量

按照李玉清等[10]的方法测定粪便中乳酸杆菌、双歧杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌的菌落数量，菌落数量以每克粪便中所含菌落的对数[lg（CFU/g）]表示。

1.7.3 血清免疫指标

利用试剂盒依次测定血清样品中IgG、IgA、IgM、IL-2、IL-6、IFN-γ含量。

1.7.4 血清生化指标利用试剂盒依次测定血清样品中TP、ALB、ALP、AST、ALT活性和BUN含量。

1.8 数据统计分析

采用SPSS 17.0 软件对数据进行统计分析，结果以“平均值±标准差”表示，P＜0.05表示显著性差异。

2 结果与分析

2.1 不同添加剂量复合微生态制剂对土鸡生长性能的影响

由表2 可知，3 个试验组与对照组相比，末重、平均日增重均显著提高（P＜0.05）。试验Ⅱ、Ⅲ组与对照组相比，料重比均显著降低（P＜0.05）。试验Ⅱ、Ⅲ组与试验Ⅰ组相比较，末重、平均日增重均显著提高（P＜0.05）。

表2 不同添加剂量复合微生态制剂对土鸡生长性能的影响

2.2 不同添加剂量复合微生态制剂对土鸡粪便微生物数量的影响

由表3 可知，3 个试验组与对照组相比，乳酸杆菌数均显著提高（P＜0.05）。试验Ⅱ、Ⅲ组与对照组相比，双歧杆菌数均显著提高（P＜0.05）。试验Ⅱ、Ⅲ组与试验Ⅰ组、对照组相比，大肠杆菌数均显著降低（P＜0.05）。

表3 不同添加剂量复合微生态制剂对土鸡粪便微生物数量的影响[lg（CFU/g）]

2.3 不同添加剂量复合微生态制剂对土鸡血清免疫指标的影响

由表4 可知，3 个试验组与对照组相比，IgG、IL-2含量均显著提高（P＜0.05）。试验Ⅱ、Ⅲ组与对照组相比，IgA、IL-6 含量均显著提高（P＜0.05）。试验Ⅱ、Ⅲ组与试验Ⅰ组相比，IgG、IL-2 含量均显著提高（P＜0.05）。

表4 不同添加剂量复合微生态制剂对土鸡血清免疫指标的影响

2.4 不同添加剂量复合微生态制剂对土鸡血清生化指标的影响

由表5 可知，试验Ⅱ、Ⅲ组与对照组相比，TP、ALB 含量均显著提高（P＜0.05），AST、ALT活性和BUN含量均显著降低（P＜0.05）。

表5 不同添加剂量复合微生态制剂对土鸡血清生化指标的影响

3 讨论

3.1 不同添加剂量复合微生态制剂对土鸡生长性能的影响

对于微生态制剂能够提高动物生长性能的研究较多，但不同研究学者确定的最适添加剂量存在较大差异，谢大识等[11]研究发现，复合微生态制剂提高仔猪生长性能的添加剂量为200、400、800 mg/kg。傅予彤等[12]研究发现，复合微生态制剂提高肉仔鸡生长性能的添加剂量为100、300 mg/kg。陈西风等[13]研究发现，复合微生态制剂提高肉仔鸡生长性能的添加剂量为1 000、2 000 mg/kg。连丽娜等[14]用黄羽肉鸡进行试验，结果发现复合微生态制剂提高肉仔鸡生长性能的添加剂量为5 000 mg/kg。本研究发现，复合微生态制剂提高土鸡生长性能的添加剂量为500、1 000 mg/kg，与前人的研究结果相类似[11-14]，但又有较大差异，表明复合微生态制剂在不同养殖场点的最适添加剂量不同，原因可能与养殖动物品种与日龄、饲喂时间长短、复方微生态制剂的组成与活菌数量等有关，故建议不同养殖单位在选择使用复合微生态制剂前，最好选择少量动物先进行试验，通过试验确定合理添加剂量。

3.2 不同添加剂量复合微生态制剂对土鸡粪便微生物数量的影响

复合微生态制剂及其代谢产物进入动物肠道后，能够调节有益微生物和有害微生物的数量，改善动物肠道的微生物菌群平衡。张卫东等[15]研究发现，复合微生态制剂均能够提高肉鸡盲肠中乳酸菌数量，降低大肠杆菌数量。郝小静等[16]研究发现，复合微生态制剂均能够将蛋鸡粪便中乳酸杆菌数提高6.1 倍，大肠杆菌数降低90.3%。董俊良等[17]研究发现，试验中两种不同复合微生态制剂产品均能够改善育肥猪粪便的微生物菌群结构。本研究发现，复合微生态制剂能够降低土鸡粪便中的大肠杆菌数，提高土鸡粪便中的乳酸杆菌数和双歧杆菌数，与前人的研究结果具有一致性[15-17]。由此可见，日粮中添加复合微生态制剂能够有效提高养殖动物粪便中乳酸杆菌等有益微生物的数量，降低有害微生物的数量，保持菌群平衡。

3.3 不同添加剂量复合微生态制剂对土鸡血清免疫指标的影响

IgA、IgG、IgM是动物机体最主要的体液免疫反应检测指标；细胞因子具有调节免疫反应的重要作用，其中IL-2、IL-6、IFN-γ均是细胞免疫反应的主要检测指标。吴昌征等[18]研究了复合微生态制剂对三穗鸭血清免疫指标的影响，发现添加1 000、1 500 mg/kg复合微生态制剂可将三穗鸭血清中的IgG 含量分别提高4.5%和6.7%，IgA含量分别提高5.2%和6.2%，说明复合微生态制剂可以有效提高三穗鸭的免疫能力。刘凯伟等[19]研究了复合微生态制剂对蛋鸡血清免疫指标的影响，其添加1 000、2 000 mg/kg复合微生态制剂后，蛋鸡血清中的IgA、IgG、IL-2、IFN-γ含量显著提高。白培钿等[20]研究了复合微生态制剂对仔猪血清免疫指标的影响，添加2 000 mg/kg 复合微生态制剂后，仔猪血清中的IgA、IgG、IgM 含量显著提高。本试验研究了复合微生态制剂对土鸡血清免疫指标的影响，添加500、1 000 mg/kg 复合微生态制剂后，土鸡血清中的IgG、IgA、IL-2、IL-6 含量显著提高，与前人的研究结果具有一致性[18-20]。由此可见，日粮中添加复合微生态制剂能够有效改善畜禽的血清免疫指标，增强畜禽的机体免疫力。

3.4 不同添加剂量复合微生态制剂对土鸡血清生化指标的影响

血清生化指标中的TP、ALB 含量与蛋白质的合成代谢能力成正比；AST、ALT活性与肝脏的代谢能力成反比；BUN 在血液中的含量高低与蛋白质的代谢率成反比。杨红萍等[21]在仔猪上的研究发现，添加1 000、2 000 mg/kg 复合微生态制剂可显著提高仔猪血清中的TP、ALB 含量。屈圣富等[22]研究发现，添加200、300 mg/kg 复合微生态制剂能显著提高育肥猪血清中TP 含量，降低育肥猪血清中AST 活性。叶思霖等[23]研究发现，添加1 000 mg/kg 复合微生态制剂能显著降低白羽肉鸡血清中BUN 含量。本研究发现，复合微生态制剂能够提高土鸡血清中的TP、ALB 含量，降低血清中的AST、ALT 活性和BUN 含量，显著改善土鸡的血清生化指标，与前人的研究结果具有一致性[21-23]，表明日粮中添加复合微生态制剂能够有效改善畜禽的血清生化指标，增强畜禽的健康状况。

4 结论

本试验条件下，在林下养殖土鸡基础日粮中添加500、1 000 mg/kg 复合微生态制剂均能够改善土鸡的生长性能、粪便微生物、血清免疫指标及生化指标，选择500 mg/kg作为临床应用剂量较适宜。