孟莉，舒丽红，周振科，范杰

作者单位：成都市第七人民医院，a急诊科，b检验科，c放射科，四川 成都610000

糖尿病是临床中常见的一种内分泌性疾病，可对病人的日常生活造成严重影响［1］。糖尿病病程时间长，其并发症也较多，肾损伤是其中较为严重的一种，糖尿病肾病早期无明显特征，发病较为隐匿，且具有不可逆性，病人若未得到及时的治疗可能会引发慢性肾衰竭，严重威胁人们的生命健康和生活质量［2］。尿微量白蛋白与肌酐（creatinine，Cr）比值用于诊断糖尿病早期肾损伤灵敏度高，且较为稳定，但尿微量白蛋白与Cr 比值诊断肾损伤需3～6 个月内至少2次检测结果异常，时间相对较长，临床用于诊断早期肾损伤有一定局限性［3］。因此，继续寻找灵敏度、特异度高的生物标志物对糖尿病肾损伤的早期准确诊断和干预治疗尤为重要。

肾胺酶（RNLS）基因位于10q23.33上，主要由肾脏合成产生，其参与降解血液中的儿茶酚胺，在血流动力改善方面具有重要作用，除了发挥分解酶的作用，对细胞和组织也有保护作用［4］。尿调节素（UMOD）是在尿液中丰富存在的Tamm-Horsfall 蛋白，以有效的抗菌、抗炎作用而被人熟知［5］。研究表明，UMOD在慢性肾病中具有重要作用，如缓解肾脏损伤、降低血肌酐水平等［6］。可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体（suPAR）是尿激酶型纤溶酶原激活物受体（uPAR）的可溶形式，表达于免疫细胞、内皮细胞等多种细胞表面，可反映机体的炎症状况，一般稳定存在，当身体出现炎症刺激时，suPAR分离于细胞表面，在血液中表达水平升高［7］。suPAR 参与多种疾病的发展，包括脓毒症、呼吸系统疾病、肿瘤及心血管疾病等［8］。三项单一检测指标对糖尿病肾损伤疾病有一定的局限性，需要联合多项指标进行准确检测，因此，本研究以糖尿病肾损伤病人和糖尿病病人为研究对象，探究血清RNLS、UMOD、suPAR联合检测对糖尿病肾损伤早期诊断的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2020 年3 月至2021 年3 月成都市第七人民医院收治的61 例糖尿病肾损伤病人为糖尿病肾损伤组，其中男32 例，女29 例，年龄范围36～72 岁，年龄（51.58±6.47）岁。选取66 例单纯2型糖尿病病人为单纯糖尿病组，男34 例，女32 例，年龄范围35～71岁，年龄（50.62±6.15）岁。另选取同期健康体检者60 例为对照组，男31 例，女29 例，年龄范围35～72岁，年龄（51.74±6.52）岁。根据尿白蛋白排泄率（UAER）将糖尿病肾损伤组病人分为两亚组，UAER 20～200 μg∕min 纳入早期糖尿病肾病组（29 例），UAER＞200 μg∕min 纳入临床期糖尿病肾病组（32 例）。纳入标准：①糖尿病或糖尿病肾损伤病人均符合《糖尿病肾病防治专家共识（2014 年版）》中相关诊断标准［9］；②临床资料完整者；③近3 个月未服用过可能影响肾功能的肾毒性药物者；④积极配合治疗者。排除标准：①由其他急慢性肾病、心肺疾病等引起的肾病；②患有心、肝等严重器官疾病；③合并严重感染性疾病、恶性肿瘤者；④妊娠期病人；⑤急性心脑血管疾病者；⑥血糖控制欠佳者。病人或其近亲属知情同意，本研究符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》相关要求。

1.2 主要试剂和仪器酶联免疫吸附法（ELISA）试剂盒均购自上海通蔚生物科技有限公司；低温高速离心机Nano Drop 2000 购自美国Thermo Scientific公司；-80 ℃超低温冰箱购自美国Thermo公司，移液枪购自德国Eppendorf公司。

1.3 方法

1.3.1 样品采集 所有病人入组次日清晨采集静脉血5 mL，对照组于健康体检时采集静脉血5 mL，在3 000 r∕min条件下离心10 min，取上清液于-80 ℃下保存备用。

1.3.2 检测方法 采用尿素酶法检测血清尿素（UREA），氧化酶法检测Cr、尿酸（uric acid，UA）；采用ELISA 检测血清RNLS、UMOD、suPAR 的水平，严格参照ELISA试剂盒试验步骤进行。

1.3.3 一般临床资料收集 记录受试者性别、年龄、身高、体质量数据，并计算身体质量指数（body mass index，BMI）；全自动生化分析仪测定所有受试者三酰甘油、总胆固醇、糖化血红蛋白、24 h尿蛋白、空腹血糖、估算肾小球滤过率（eGFR）等临床指标。

1.4 统计学方法数据分析采用统计学软件SPSS 22.0 分析。计数资料比较采用χ2检验；以±s描述计量资料（均符合正态分布），两组间比较采用独立样本t检验；多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用SNK-q检验；Pearson 相关性分析RNLS、UMOD、suPAR 与肾功能指标及临床资料的关系。受试者操作特征（ROC）曲线分析血清RNLS、UMOD、suPAR 联合检测对糖尿病病人发生肾损伤的诊断价值。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组一般临床指标比较三组性别、年龄、BMI 比较，以及单纯糖尿病组与对照组24 h 尿蛋白比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；糖尿病肾损伤组、单纯糖尿病组三酰甘油、总胆固醇、空腹血糖及糖化血红蛋白均显著高于对照组（P＜0.05），eGFR显著低于对照组（P＜0.05）；糖尿病肾损伤组三酰甘油、总胆固醇、空腹血糖、糖化血红蛋白及糖尿病病程均显著高于单纯糖尿病组（P＜0.05），eGFR显著低于单纯糖尿病组（P＜0.05）；糖尿病肾损伤组24 h 尿蛋白显著高于单纯糖尿病组和对照组（P＜0.05）。见表1。

表1 糖尿病肾损伤61例、单纯2型糖尿病66例和健康体检者60例一般临床指标对比

2.2 三组研究对象血清肾功能指标水平比较与对照组相比，单纯糖尿病组、糖尿病肾损伤组病人血清UREA、Cr、UA 水平均显著升高（P＜0.05），糖尿病肾损伤组病人血清UREA、Cr、UA 水平高于单纯糖尿病组（P＜0.05）。见表2。

表2 糖尿病肾损伤61例、单纯2型糖尿病66例和健康体检者60例研究对象血清UREA、Cr、UA水平比较∕ ± s

表2 糖尿病肾损伤61例、单纯2型糖尿病66例和健康体检者60例研究对象血清UREA、Cr、UA水平比较∕ ± s

注：UREA为尿素，Cr为肌酐，UA为尿酸。①与对照组相比，P＜0.05。②与单纯糖尿病组相比，P＜0.05。

组别对照组单纯糖尿病组糖尿病肾损伤组F值P值例数60 UA∕（μmol∕L）264.15±35.19 329.53±42.38①398.46±52.35①②141.77＜0.001 66 61 UREA∕（mmol∕L）4.61±0.43 5.48±0.79①8.13±1.64①②177.09＜0.001 Cr∕（μmol∕L）71.56±14.72 86.74±17.25①126.48±29.36①②107.44＜0.001

2.3 三组研究对象血清RNLS、UMOD、suPAR 水平比较与对照组相比，单纯糖尿病组、糖尿病肾损伤组病人血清suPAR 水平显著升高（P＜0.05），糖尿病肾损伤组高于单纯糖尿病组（P＜0.05）；与对照组相比，单纯糖尿病组、糖尿病肾损伤组病人血清RNLS、UMOD 水平显著降低（P＜0.05），糖尿病肾损伤组低于单纯糖尿病组（P＜0.05）。见表3。

表3 糖尿病肾损伤61例、单纯2型糖尿病66例和健康体检者60例血清RNLS、UMOD、suPAR水平比较∕ ± s

表3 糖尿病肾损伤61例、单纯2型糖尿病66例和健康体检者60例血清RNLS、UMOD、suPAR水平比较∕ ± s

注：RNLS 为肾胺酶，UMOD 为尿调节素，suPAR 为可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体。①与对照组相比，P＜0.05。②与单纯糖尿病组相比，P＜0.05。

suPAR∕（ng∕L）34.15±8.26 66.48±17.13①133.56±42.68①②217.11＜0.001组别对照组单纯糖尿病组糖尿病肾损伤组F值P值例数60 66 61 RNLS∕（mg∕L）42.81±13.24 35.47±9.29①28.62±7.61①②28.85＜0.001 UMOD∕（g∕L）139.82±32.84 119.45±28.65①64.28±16.82①②127.74＜0.001

2.4 不同尿白蛋白量病人血清RNLS、UMOD、su-PAR 水平比较临床期糖尿病肾病组病人血清RNLS、UMOD水平较早期糖尿病肾病组显著降低（P＜0.05），suPAR水平显著升高（P＜0.05）。见表4。

表4 糖尿病肾损伤61例中不同尿白蛋白量病人的血清RNLS、UMOD、suPAR水平比较∕ ± s

表4 糖尿病肾损伤61例中不同尿白蛋白量病人的血清RNLS、UMOD、suPAR水平比较∕ ± s

注：RNLS 为肾胺酶，UMOD 为尿调节素，suPAR 为可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体。

例数29 RNLS∕（mg∕L）31.18±8.34 26.28±6.69 2.54 0.014 suPAR∕（ng∕L）113.27±36.81 151.96±48.03 3.50 0.001组别早期糖尿病肾病组临床期糖尿病肾病组t值P值32 UMOD∕（g∕L）78.65±19.49 51.26±14.41 6.28＜0.001

2.5 Pearson相关性分析RNLS、UMOD、suPAR 与肾功能指标及临床资料的关系Pearson 相关性分析显示，RNLS、UMOD 与UREA、Cr、UA、三酰甘油、总胆固醇、空腹血糖、糖化血红蛋白、糖尿病病程及24 h尿蛋白均呈负相关（P＜0.05），与eGFR呈正相关（P＜0.05）；suPAR 与UREA、Cr、UA、三酰甘油、总胆固醇、空腹血糖、糖化血红蛋白、糖尿病病程及24 h尿蛋白均呈正相关（P＜0.05），与eGFR 呈负相关（P＜0.05）。见表5。

表5 尿病肾损伤61例RNLS、UMOD、suPAR与临床资料的相关性分析

2.6 ROC 曲线分析血清RNLS、UMOD、suPAR 联合检测对糖尿病病人发生肾损伤的诊断价值ROC曲线分析结果显示，血清RNLS、UMOD、suPAR 三项联合的曲线下面积（area under curve，AUC）0.88显著高于RNLS、UMOD 单项检测的AUC（0.81、0.83）（Z=3.55、2.37，P＜0.05），与suPAR 检测的AUC 比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表6。

表6 ROC曲线分析血清RNLS、UMOD、suPAR联合检测对糖尿病病人发生肾损伤的诊断价值

3 讨论

糖尿病肾损伤是糖尿病严重的并发症之一，主要表现为肾小球硬化、基底膜增厚等［10］。其发病机制十分复杂，具体的机制尚未明晰。该疾病早期临床特征不明显，只是尿微量蛋白相关指标出现上升趋势，容易造成漏诊，一旦错过最佳治疗时机，将对病人的生命安全造成严重的威胁。因此，对糖尿病肾损伤病人进行早期诊断以及进行干预治疗，对病人的病程控制、延长生存时间有重要意义。

RNLS 作为一种单胺氧化酶在人类肾脏中表达较多，其在肾脏及心血管疾病中发挥保护作用且研究较为广泛［11-13］。默瑞兴等［14］研究发现，RNLS 在健康对照组、慢性心力衰竭组、2 型心肾综合征组病人血清中的表达水平依次降低，且RNLS对2型心肾综合征的早期诊断和预后有一定的价值。赵婷等［15］通过对体外培养的小鼠足细胞研究发现，肾胺酶对高糖诱导的足细胞损伤具有减缓作用。Yin 等［16］研究表明，b∕db 小鼠肾脏中的RNLS 较健康对照或db∕m 小鼠相比下调，过表达的RNLS 可以显著改善db∕db 小鼠的肾损伤。在本研究中，RNLS 在健康对照组、单纯糖尿病组、糖尿病肾损伤组病人血清中的水平依次降低，与默瑞兴等［14］研究类似，且临床期糖尿病肾病组病人血清RNLS 水平较早期糖尿病肾病组显著降低，提示RNLS 可能参与糖尿病肾损伤的发生发展。ROC 曲线分析结果显示，血清RNLS的AUC 为0.81、灵敏度为82.00%、特异度为72.70%，提示血清RNLS 对糖尿病病人发生肾损伤有一定的诊断价值。

UMOD是肾小管髓袢升支和远端肾小管的细胞合成的蛋白质，是健康人体尿液中排泄最为丰富的蛋白［17］。有研究指出UMOD 水平与肾小管运输物质、eGFR 以及肾脏长度和体积呈正相关，UMOD 是反映肾小管功能的重要因子［18］。艾文婷等［19］研究发现，血清UMOD 随着原发性高血压病病人早期肾损伤的严重程度增加而降低，且表明UMOD 与主要肾功能指标存在一定的相关性。赵丽娟［20］发现，妊娠期高血压病人发生急性肾损伤病人较未发生急性肾损伤病人血清UMOD 表达水平明显下降。结合本研究，与对照组相比，单纯糖尿病组、糖尿病肾损伤组病人血清UMOD 水平显著降低，糖尿病肾损伤组低于单纯糖尿病组，与艾文婷等［19］、赵丽娟［20］研究相似，且临床期糖尿病肾病组病人血清UMOD水平较早期糖尿病肾病组显著降低，提示UMOD 参与调控肾损伤的发生发展。进一步ROC 曲线分析结果显示，血清UMOD 诊断糖尿病病人发生肾损伤的曲线下面积为0.83，截断值为85.94 g∕L，提示当糖尿病病人血清UMOD 水平低于85.94 g∕L 时易发生肾损伤。

suPAR 参与多种机体生理过程，不受日常饮食和昼夜等因素影响［21］。王媛媛等［22］研究发现，各病理类型的肾病综合征病人血清suPAR 水平显著高于正常对照组，提示suPAR 可能是肾病发生发展中的一个危险因素。张静静等［23］研究表明，原发性肾病综合征病儿血清中suPAR 水平显著升高，且在急性肾损伤与部分病理类型中更为明显。Zhou 等［24］发现，糖尿病肾病病人的uPAR 水平较对照组显著升高，随着疾病的加重，血清suPAR 浓度也逐渐上升，且与eGFR 呈负相关。在本研究中，suPAR 在健康对照组、单纯糖尿病组、糖尿病肾损伤组病人血清中的水平依次升高，且临床期糖尿病肾病组病人血清suPAR 水平较早期糖尿病肾病组升高，提示suPAR可能在糖尿病肾损伤中具有调控作用。相关性分析显示，RNLS、UMOD、suPAR 与肾功能指标（UREA、Cr、UA）及临床资料（三酰甘油、空腹血糖等）呈正相关或负相关，进一步提示RNLS、UMOD、suPAR 参与糖尿病肾损伤的病情进展。ROC 曲线分析结果显示，血清RNLS、UMOD、suPAR 三项联合的AUC（0.88）显著高于RNLS、UMOD 单项检测，提示三者联合对糖尿病肾损伤的准确诊断和治疗有重要诊断价值。

综上所述，糖尿病肾损伤病人血清RNLS、UMOD、suPAR 水平呈异常表达，且三项联合检测对糖尿病病人发生肾损伤的诊断价值较高，可作为糖尿病病人并发肾损伤的指标。本院进一步研究将扩大样本量，并研究多项指标联合检测价值，为临床诊断提供可靠依据。