戈惠丽 邓一脉 陆锦雅 江苏省常熟市医学检验所 215500

溃疡性结肠炎是一种慢性非特异性肠道炎症性疾病,常表现为黏液脓血便、腹痛、间断性腹泻等[1]。目前病因不明确,主要与肠道微生态、免疫相关。免疫球蛋白是一类免疫活性分子,T淋巴细胞是重要免疫细胞,其中辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)是新近发现的T淋巴细胞亚群,Th17/Treg失衡严重影响免疫功能,与溃疡性结肠炎的发生、发展密切相关[2]。并且临床研究报道[3-4],肠道黏膜免疫系统失衡极易导致炎症发生,进而使得肠道菌群紊乱,导致消化道损伤,从而反馈产生免疫损伤效应机制,故研究溃疡性结肠炎患者肠道菌群分布与免疫力的相关性具有重要的意义[5]。鉴于此,本文为了研究溃疡性结肠炎患者血清免疫球蛋白水平、Th17/Treg平衡与肠道菌群分布的相关性,选取2020年12月—2022年12月收治的42例活动期溃疡性结肠炎患者、42例缓解期溃疡性结肠炎患者、42例体检健康者进行研究。报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2020年12月—2022年12月收治的42例活动期溃疡性结肠炎患者为试验A组,42例缓解期溃疡性结肠炎患者为试验B组,42例体检健康者为对照组。试验A组男20例、女22例;年龄41～50(45.57±4.22)岁;病程1～8(4.29±1.02)年;病变累及部位:左半结肠20例、直肠6例、乙状结肠16例。试验B组男21例,女21例;年龄41～51(45.60±4.25)岁;病程1～7(4.18±1.01)年;病变累及部位:左半结肠21例、直肠6例、乙状结肠15例。对照组男22例,女20例;年龄41～51(45.58±4.23)岁。三组一般资料无统计学差异(P>0.05)。纳入标准:(1)依据《炎症性肠病诊断与治疗的共识意见(2018年,北京)》确诊者[6];(2)知情本次研究者。排除标准:(1)无法与医护人员正常沟通者;(2)肠梗阻患者;(3)心、肝、肾功能损害者;(4)近4周服用过抗生素、免疫抑制剂、激素者。本次研究获得医学伦理委员会的认证。

1.2 方法 (1)血清免疫球蛋白水平:抽取三组空腹静脉血各5ml,加入ETDA抗凝剂,以(3 000±200)r/min离心5min,取血清,采用南京诺尔曼生物技术有限公司生产的NORMAN型散射比浊分析仪通过速率散射比浊法测定免疫球蛋白(Ig)A、IgG、IgM水平。(2)外周血Th17、Treg细胞百分比:取空腹静脉血后梯度离心得单核细胞,加入CD3-藻红蛋白Cy5、CD8a-异硫氰酸荧光素、白介素-17藻红蛋白,孵育30min。然后加入固定剂100μl,孵育30min,加入破膜剂100μl,孵育15min,用磷酸缓冲盐溶液洗涤后,以(1 000±200)r/min的速度离心5min,收集细胞,加入100μl破膜剂、白介素-17抗体,孵育20min,再用磷酸缓冲盐溶液洗涤,用流式细胞仪测定Th17占比。取空腹静脉血后,加入CD25-Cy5、CD127-藻红蛋白-Cy5、CD4-异硫氰酸荧光素,孵育20min,加入溶血素1ml,混匀后加入磷酸缓冲盐溶液2ml,以(1 000±200)r/min的速度离心5min,弃上清,用流式细胞仪测定Treg细胞占比。并计算Th17/Treg。(3)肠道内菌群数目:分别取三组1g自然排出粪便,反转录试剂盒转录合成cDNA,加入细菌DNA引物,实时定量聚合酶链反应扩增,根据扩增曲线计算细菌数目。

2 结果

2.1 三组血清免疫球蛋白水平比较 相比对照组,试验A组和试验B组IgA、IgG、IgM水平明显更低,且试验A组显著低于试验B组(P<0.05)。见表1。

表1 三组血清免疫球蛋白水平比较

2.2 三组外周血Th17、Treg细胞百分比比较 相比对照组,试验A组和试验B组Th17水平及Th17/Treg明显更高,且试验A组显著高于试验B组;相比对照组,试验A组和试验B组Treg水平明显更低,且试验A组显著低于试验B组(P<0.05)。见表2。

表2 三组外周血Th17、Treg细胞百分比比较

2.3 三组肠道内菌群数目比较 相比对照组,试验A组和试验B组肠球菌、肠杆菌数目明显更高,且试验A组显著高于试验B组;相比对照组,试验A组和试验B组拟杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌数目明显更低,且试验A组显著低于试验B组(P<0.05)。见表3。

表3 三组肠道内菌群数目比较

2.4 三组溃疡性结肠炎患者血清免疫球蛋白水平、Th17/Treg平衡与肠道菌群分布相关性研究 经Pearson相关分析发现,溃疡性结肠炎患者肠球菌、肠杆菌数目与IgA、IgG、IgM、Treg水平呈负相关,与Th17水平及Th17/Treg呈正相关;拟杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌数目与IgA、IgG、IgM、Treg水平呈正相关,与Th17水平及Th17/Treg呈负相关(P<0.05)。见表4。

表4 溃疡性结肠炎患者血清免疫球蛋白水平、Th17/Treg平衡与肠道菌群分布相关性研究

3 讨论

溃疡性结肠炎是一种以溃疡为主,侵犯直肠和结肠的炎性疾病[7]。目前临床上普遍认为免疫失衡是溃疡性结肠炎发病的重要因素,而免疫球蛋白是具有抗体活性或化学结构上与抗体相似的球蛋白,是一类重要的免疫效应分子;Th17、Treg是CD4+T淋巴细胞中的两个亚群,在多种免疫性疾病中起到重要作用,并且临床研究报道[8],溃疡性结肠炎是自身免疫紊乱导致黏膜损伤、糜烂、溃疡而发病。同时肠道内菌群与多种消化道疾病发生、发展密切相关,研究溃疡性结肠炎患者血清免疫球蛋白水平、Th17/Treg平衡与肠道菌群分布的相关性具有重要的临床意义[9]。

本次研究发现,相比对照组,试验A组和试验B组IgA、IgG、IgM水平明显更低,且试验A组显著低于试验B组,说明溃疡性结肠炎患者免疫力下降。并且当机体处于稳态时,T细胞趋向于Treg细胞分化,维持免疫耐受;当机体处于炎症状态时,T细胞趋向于Th17细胞分化,出现自身免疫疾病[10-11]。故本次研究发现,相比对照组,试验A组和试验B组Th17水平及Th17/Treg明显更高,且试验A组显著高于试验B组;相比对照组,试验A组和试验B组Treg水平明显更低,且试验A组显著低于试验B组。分析原因为:溃疡性结肠炎患者肠壁内存在明显过度免疫反应,使得肠道菌群抗原过度应答,损伤消化道,激活免疫系统,使T淋巴细胞倾向Th17分化,使得患者Th17水平及Th17/Treg明显提高,最终产生免疫损伤效应机制,从而使其免疫出现紊乱。

另外本次研究发现,相比对照组,试验A组和试验B组肠球菌、肠杆菌数目明显更高,且试验A组显著高于试验B组;相比对照组,试验A组和试验B组拟杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌数目明显更低,且试验A组显著低于试验B组,说明溃疡性结肠炎患者出现肠道菌群紊乱。分析原因为:肠杆菌、肠球菌属于机会致病菌,拟杆菌、双歧杆菌、乳酸杆菌属于人体共生细菌,能够调节免疫功能和对抗机会致病菌侵入人体肠黏膜,而溃疡性结肠炎患者胃肠道正常内环境发生紊乱,引发消化道黏膜屏障功能失调,使得微生态系统失调,故导致肠球菌、肠杆菌数目增加,拟杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌数目降低。

同时经Pearson相关分析发现,溃疡性结肠炎患者肠球菌、肠杆菌数目与IgA、IgG、IgM、Treg水平呈负相关,与Th17水平及Th17/Treg呈正相关;拟杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌数目与IgA、IgG、IgM、Treg水平呈正相关,与Th17水平及Th17/Treg呈负相关。分析原因为:机体免疫力下降会导致机体肠球菌、肠杆菌大量繁殖,破坏肠道黏膜屏障,进而降低拟杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌数目;并且当肠道菌群失调,会通过直接影响能量代谢、分化方向、细胞因子,使得机体免疫反应异常,导致机会致病菌繁殖,并侵袭肠道黏膜,破坏屏障,引起机体肠黏膜反应。这与叶佳等[12]研究的肠道菌群紊乱可通过各种机制影响Th17/Treg免疫平衡,参与溃疡性结肠炎发生和发展相一致。

综上分析,溃疡性结肠炎患者血清免疫球蛋白水平、Th17/Treg平衡受肠道菌群分布影响严重,且三者参与溃疡性结肠炎发生和发展。但是本次研究仅选取样本病例较少,且探索不够深入,望广大医学研究者扩大样本量,以进一步证实本次研究的临床优势。