胡欣 徐华 冯娜 丁瑾 李凤琴(陕西省血液中心，陕西 西安 710000)

2020 年2 月11 日，世界卫生组织总干事谭德塞在瑞士日内瓦宣布，将新型冠状病毒感染正式命名为“corona virus disease 2019，COVID-19”[1]。 2020 年2 月22 日，国家卫生健康委发布通知，将“新型冠状病毒感染”英文名称修订为“COVID-19”。 新冠病毒感染根据临床症状和影像学检查等分为轻型、普通型、重型、危重型4 类[2]。 没有明显的呼吸道症状，没有明显的发热、咳嗽、咳痰、胸闷、气喘、呼吸困难的症状可被定义为无症状感染者。 对于这类患者仍然有一定的传染性，要采取隔离治疗的措施，防止疾病传染给其他人群。 为进一步做好新冠病毒感染重症患者医疗救治血浆储备应用，指导各地规范开展新冠病毒感染康复者恢复期血浆采集治疗工作，保障采浆工作人员和献血浆者安全，国家卫生健康委组织专家在全面总结恢复期血浆采集治疗工作经验的基础上，结合疫情形势变化及研究进展，对治疗方案进行修订[3-5]。

在2020 年新冠病毒疫情爆发至今，陕西省血液中心不间断开展新冠病毒感染康复者恢复期血浆采集工作，所采集的血浆已发往全国，用于新冠病毒感染重症、危重症患者的救治。 2021 年12 月3 日，陕西省遭受新一轮新冠病毒的侵袭，此次新冠病毒属于德尔塔变异株，传播力强，日确诊病例最高达2 188 例，其中无症状感染者、轻型占绝大多数。 本中心与陕西省第四医院，西安秦皇医院，长安区医院等康复医院及多个集中隔离点密切配合，共同开展恢复期血浆捐献者的宣传、招募与采集工作。 自2022 年1 月24 日—2 月21日，本站共采集新冠病毒感染康复者恢复期血浆183 人次，69 800 mL，其中30 人于2022 年4 月22—28 日再次捐献，同时对恢复期患者的血浆病毒抗体效价做一检测，本研究结合患者的年龄、性别等与其效价之间的关系做一初步探索。

1 对象与方法

1.1 对象 选择西安市中心血站2022 年1 月24 日—2 月21 日采集的183 份新冠病毒感染康复者恢复期血浆标本为研究对象。 捐献者均已签署《献血者知情同意及健康状况征询表》，同意血液中心按规定对血液标本进行科学相关检测及使用。 捐献者中145 名男性，38 名女性，年龄18 ～52 岁，平均年龄30 岁，95%籍贯源自陕西，见表1。

表1 采集时间及重复采集间隔

1.2 试剂及仪器 新型冠状病毒IgM 抗体检测试剂盒(批号:20220103)、IgG 抗体检测试剂盒(批号:20220102)、中和抗体检测试剂盒(批号:20220101)； iFlash 3000-C 化学发光免疫分析仪，以上试剂与仪器均为深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司产品。

1.3 方法

1.3.1 病例诊断及分型 根据国家卫生健康委员会颁布的新冠诊疗方案[4]中病例诊断标准及临床分型标准，开展病例诊断及临床分型。 183 名康复者中根据临床分型可分为:轻型94 名(51.37%)、普通型56 名(30.60%)、重型2 名(0.11%)、无症状感染者31 名(16.9%)。

1.3.2 标本来源、采集与处理 按照采浆时间顺序，选取38名女性38 名男性献血志愿者作为研究对象。 从连接单采新冠病毒感染患者恢复期血浆成品袋的导管中留取10 mL 标本并在－20℃冰冻保存备用。

1.3.3 检测方法 采用直接化学发光技术的一步竞争免疫法对IgG、IgM 和中和抗体进行体外定性检测。 抗体效价表示单位:AU/mL。

1.3.4 IgG 抗体滴度与抗体效价关系评估方法 参照文献[7]，用于临床治疗新冠病毒血清/血浆IgG 抗体定性检测呈阳性，且160 倍稀释后检测仍为阳性。 采用本文试剂盒对不同IgG 抗体浓度标本稀释后测定，结果表明原倍抗体效价＞300 AU/mL 时，160 倍稀释后检测仍为阳性，即IgG 抗体效价＞300 AU/mL 时满足血浆治疗要求。

1.4 统计学分析 使用SPSS 软件进行数据统计分析。 对计量资料进行采用Kolmogrov-Smirnov 和Shapiro-Wilk 正态性检验，3 种指标IgG、IgM 和中和抗体均不符合正态性分布。可采用中位数及四分位数表示M(P25、P75)进行描述，分类变量2 组间差异比较采用非参数秩和检验(Mann-Witney U)，相关标本组间差异采用非参数检验的Wilcoxon 秩和检验。 IgG、IgM 和中和抗体与性别年龄相关性分析采用Spearman 秩相关分析法。 以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同性别康复者血浆3 种抗体效价比较 按照采浆时间顺序，选取38 名女性、38 名男性献血志愿者作为研究对象。 正态性检验表明，IgG、IgM 和中和抗体不符合正态分布，采用非参数秩和检验(Mann-Witney U)进行组间比较。 结果显示不同性别康复者血浆IgG、IgM 和中和抗体效价比较无差异(P＞0.05)，见表2。

表2 不同性别康复者血浆IgG、IgM 与中和抗体效价比较

2.2 年龄、感染间隔与3 种抗体效价的相关性 采用非参数检验的Spearman 相关系数检验年龄、感染间隔(感染时间距离采集时间的天数)与3 种抗体效价的相关性。 其中感染间隔是指感染时间距离采样时间的天数。 年龄与感染间隔均和3 种抗体效价之间无显著相关性。 中和抗体与IgG 具有弱的正相关(P＜0.05)，见表3、表4。

表3 年龄与IgG、IgM 及中和抗体之间的相关性

表4 感染间隔与IgG、IgM 及中和抗体之间的相关性

2.3 重复捐献者3 种抗体捐献前后差异 采用非参数检验的Wilcoxon 秩和检验。 3 种抗体效价水平再次捐献均低于首次捐献(P＜0.05)。 单从IgG 效价看，再次捐献抗体效价中位数仍＞300 AU/mL，满足临床治疗要求，见表5。

表5 重复捐献前后3 种抗体效价比较

3 讨论

本研究结果显示不同性别、年龄的新冠病毒感染康复者恢复期3 种抗体效价水平无差异(P＞0.05)，且IgG 抗体中位数＞300 AU/mL。 因而在选择新冠病毒感染康复者恢复期血浆捐献者时可不对其性别、年龄进行限制，捐献的血浆均可用于急、危重症患者的临床救治。 康复者恢复期血浆3 种抗体水平与感染间隔不相关。 按照感染时间段，在183 名捐献者中，2021 年12 月7 日—12 月30 日期间感染93 人，占50.82%，在2022 年1 月1—5 日感染36 人(19.67%)，2022年1 月6 日以后有9 人(4.92%)。 本次患者感染时间集中在2021 年12 月下旬，采集时间在2022 年1 月24 日—2022 年2月21 日。 在183 份标本中感染时间距离采集时间最长的是63 d，最短的是25 d。 183 份血浆效价水平均满足临床应用要求，表明在距离感染时间最长63 d 的范围内，3 种抗体水平相对稳定，充分利用该时间段进行血浆采集工作对于保证血浆抗体水平具有重要意义。 再次捐献者与首次捐献者抗体效价有差异性(P＜0.05)，抗体水平明显下降约占30%左右，但IgG 水平仍满足临床应用要求。 本中心再次采集的时间是在2022 年4 月25 日，重复捐献者2 次采集时间间隔最短为62 d，最长为91 d，根据时间周期康复者体内的病毒抗体效价随时间推移在逐渐减少，但衰减的速度慢，周期长，表明在3 个月内重复捐献血浆都具有临床价值。 所以当出现急重症患者增多的情况下，可动员更多符合条件的志愿者进行血浆捐献。

恢复期血浆疗法用于传染病的治疗已经有100 多年的历史。 近20 年来，这一经典疗法又被用于严重急性呼吸综合征(SARS)、H1N1、H5N1、H7N9 禽流感、中东呼吸综合征(MERS)等新发突发传染病，取得了一定的疗效。 当缺乏有效的特异性抗病原体药物时，尤其是新发传染病暴发流行时，恢复期血浆疗法可能是抢救危重症患者的唯一选择。 国家卫生健康委员会发布的新型冠状病毒感染诊疗方案明确提出康复者血浆治疗适用于病情进展较快、重型和危重型患者[7]。 同时，新冠病毒感染康复者血浆中已检测出高效价病毒中和抗体，实验证明能有效杀死新冠病毒，目前临床用康复者血浆治疗的中型和危重型患者，效果显著。 因采集时间有限，且临床分型中轻型患者占多数，可能会对结果产生一些影响，未来将在采集时间间隔与3 种病毒抗体相关性做一研究，也可为最佳采集时间提供数据支持，为急、重症新冠病毒感染患者的治疗寻找新突破。 另外因标本的局限性，不能对不同变异株的情况进行比较分析，后续也会对此进一步开展相关研究。

利益冲突:所有作者均声明不存在利益冲突。