朱永祺 朱燕 刘宏斌 张晓娟

[摘   要]   目的：探討乳腺浸润性导管癌中肿瘤相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts，CAFs）的临床意义。方法：选取乳腺癌改良根治手术标本102例，采用免疫组织化学方法检测浸润性导管癌组织及癌旁组织中α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）表达，分析与临床病理参数的相关性及预后意义。结果：在乳腺浸润性导管癌组织中α-SMA阳性细胞率47.06%，而癌旁正常乳腺组织中无阳性细胞，差异有统计学意义（P=0.000）。癌组织中α-SMA表达与肿瘤直径、淋巴结转移及TNM分期显著相关（P＜0.01）。单因素Log-Rank检验显示组织学分级、淋巴结转移、TNM分期、ER表达与预后相关（P＜0.01）。多因素Cox回归分析显示组织学分级、淋巴结转移、TNM分期均具有独立预后意义（P＜0.05）。结论：浸润性导管癌组织中CAFs增多促进肿瘤的发生发展及侵袭转移，有望成为乳腺癌免疫治疗的新靶点。

[关键词]   肿瘤相关成纤维细胞；α-平滑肌肌动蛋白；乳腺浸润性导管癌；免疫组织化学染色

[中图分类号]   R737.9 [文献标志码]   A [DOI]   10.19767/j.cnki.32-1412.2023.03.005

Clinical significance of cancer-associated fibroblasts

in invasive ductal carcinoma of the breast

ZHU Yongqi1， ZHU Yan2， LIU Hongbin2， ZHANG Xiaojuan2

（1Medical College of Nantong University， Jiangsu 226001;

2Department of Pathology， Second Affiliated Hospital of Nantong University / the First Hospital of Nantong）

[Abstract]   Objective： To investigate the clinical significance of cancer-associated fibroblasts （CAFs） in invasive ductal carcinoma of the breast. Methods： 102 cases of breast cancer after modified radical mastectomy were selected， and immunohistochemical methods were used to detect the expression of α- Smooth muscle actin （α- SMA） in invasive ductal carcinoma tissues and adjacent tissues， and its correlation with clinical pathological parameters and prognostic significance were analyzed. Results： In invasive ductal carcinoma of the breast， the positive cell rate of α-SMA was 47.06%， while there were no positive cells in normal breast tissue adjacent to cancer， with a statistically significant difference （P=0.000）. In cancer tissue， the expression of α-SMA was significantly correlated with tumor diameter， lymph node metastasis， and TNM staging （P<0.01）. Single factor Log Rank test showed that histological grading， lymph node metastasis， TNM staging and ER expression were correlated with prognosis （P<0.01）. Multivariate Cox regression analysis showed that histological grading， lymph node metastasis， and TNM staging had independent prognostic significance （P<0.05）. Conclusion： The increase of CAFs in invasive ductal carcinoma can promote the occurrence， development， invasion and metastasis of the tumor， which is expected to become a new target of immunotherapy for breast cancer.

[Key words]   cancer-associated fibroblasts; α-Smooth muscle actin; invasive ductal carcinoma of the breast; immunohistochemical staining

近年来我国乳腺癌发病率呈年轻化及逐年上升趋势[1]。越来越多研究表明，调控肿瘤微环境是控制肿瘤进展、提高肿瘤疗效的有效方法[2]。肿瘤相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts，CAFs）是肿瘤微环境中最重要的异质细胞群，能产生和分泌多种活性因子参与肿瘤微环境的调控，在肿瘤增殖、侵袭转移、微血管生成等方面发挥作用[3-5]。α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）作为CAFs的特异性蛋白，在正常乳腺间质成纤维细胞中不表达，可反映乳腺癌间质CAFs的增殖活性。本文收集我院病理科2012—2016年乳腺浸润性导管癌改良根治手术标本102例，采用免疫组化方法检测癌组织中CAFs，探讨其与临床病理参数的相关性，分析影响乳腺癌预后因素。

1   资料与方法

1.1   一般资料   乳腺浸润性导管癌改良根治手术标本102例，患者术前均未经过内分泌治疗、放疗及化疗。患者均为女性，年龄32～78岁，平均51岁。肿瘤直径＞2 cm 41例，≤2 cm 61例；WHO组织学分类：Ⅰ级28例，Ⅱ级42例，Ⅲ级32例；腋窝淋巴结转移40例，其中11例为微转移（淋巴结转移灶最大径≤2 mm），29例为宏转移（淋巴结转移灶最大径＞2 mm）；TNM临床分期：Ⅰ+Ⅱ期87例，Ⅲ+Ⅳ期15例。本研究经南通大学第二附属医院伦理委员会批准。

1.2   免疫组化检测   手术标本经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋及4 μm连续切片，选取癌组织及癌旁3 cm以外的正常乳腺组织蜡块。采用鼠抗人α-SMA抗体（UMAB237，北京中杉）。以已知的阳性切片作为阳性对照，阴性对照以PBS液代替一抗。α-SMA阳性定位于肿瘤间质成纤维细胞，胞浆呈棕褐色或棕黄色，计算 α-SMA蛋白阳性细胞，而α-SMA阳性的乳腺导管、周围肌上皮细胞及间质小血管不计为阳性细胞。随机选取10个高倍视野计数约200个细胞，按阳性细胞百分比计分：0～10%计1分，11%～50%计2分，51%～75%计3分，76%～100%計4分；按染色强度计分：无着色计0分，淡黄色计1分，棕黄色计2分，棕褐色计3分。将两者计分相乘为最终得分，＞3分为阳性表达[6]。

1.3   统计学处理   应用SPSS 26.0统计学软件进行数据分析。计数资料以频数或率表示，组间比较采用χ2检验。绘制Kaplan-Meier生存曲线，采用单因素Log-Rank检验和多因素Cox回归分析可能影响预后的因素。P＜0.05为差异有统计学意义。

2   结      果

2.1   乳腺浸润性导管癌组织及癌旁组织中α-SMA阳性细胞   乳腺浸润性导管癌组织中48例（47.06%）存在α-SMA阳性细胞，而癌旁正常乳腺组织中无α-SMA阳性细胞，差异有统计学意义（χ2=62.769，P=0.000）。（图1）。

2.2   α-SMA表达与临床病理参数相关性   乳腺浸润性导管癌组织中α-SMA的表达与患者年龄、组织学分级、ER表达及HER2表达无关（P＞0.05），而与肿瘤直径、腋窝淋巴结转移、TNM分期显著相关（P＜0.01），即肿瘤直径越大、有腋窝淋巴结转移、临床分期高的乳腺浸润性导管癌组织中α-SMA 阳性表达率越高。腋窝淋巴结宏转移的所有标本均可见α-SMA阳性表达。见表1。

2.3   影响乳腺癌预后因素分析   102例乳腺浸润性导管癌患者中85例获得随访，随访率83.33%，随访时间66～115个月，平均84个月，其中67例存活，18例死亡。单因素Log-Rank检验显示，乳腺癌组织学分级、淋巴结转移、TNM分期、ER表达与患者预后密切相关（P＜0.01），而患者年龄、肿瘤直径、HER2表达、α-SMA表达与预后无关（P＞0.05）。多因素Cox回归分析显示，乳腺癌组织学分级、淋巴结转移、TNM分期具有独立预后意义（P均＜0.05）。见表2。α-SMA阳性组与阴性组生存率的差异无统计学意义（P＞0.05）。见图2。

3   讨      论

乳腺癌是影响女性生命健康最常见恶性肿瘤，肿瘤局部浸润和淋巴结转移是临床疗效差的主要原因。越来越多的研究表明，乳腺癌形成是多基因介入、多步进展并受肿瘤微环境控制的复杂过程。探究乳腺癌浸润和转移的机制对指导治疗、改善患者预后具有非常重要的意义。

肿瘤相关成纤维细胞分泌多种活性蛋白因子来促进癌细胞活化、增殖、侵袭和转移，促进血管生成及肿瘤基质的再塑[7-8]。同时，CAFs还抑制机体免疫系统，其机制主要是通过分泌多种细胞因子激活免疫抑制性细胞，继而下调免疫杀伤性细胞的功能。（1）转化生长因子β（TGF-β）：CAFs通过分泌TGF-β引起白介素6（IL-6）和白介素10（IL-10）等下游因子的表达，促进肿瘤相关巨噬细胞（tumor associated macrophages，TAMs）、髓源性抑制细胞（myeloid derived suppressor cells，MDSCs）以及调节性T细胞（Treg）的增加，从而抑制具有抗肿瘤作用的细胞毒T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocytes，CTLs）的反应和NK细胞活性。TGF-β还可抑制NK细胞合成γ-干扰素（IFN-γ），并阻碍CD4+Th细胞向具有抗肿瘤活性的方向分化。（2）IL-6和IL-10：是重要的免疫负性调控因子，它们和单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）一起吸引巨噬细胞到肿瘤微环境中并诱导其分化成抑制性M2型巨噬细胞，导致机体免疫功能受抑，促进癌细胞存活。（3）环氧化酶-2及其产物前列腺素E2（PGE2）：PGE2诱导Treg细胞FOXP3蛋白表达，并抑制T细胞活化。说明CAFs具有多种促癌机制，靶向CAFs可能是潜在的治疗乳腺癌的有效方法。

本组研究结果显示，在乳腺浸润性导管癌组织中α-SMA阳性细胞率显著高于癌旁正常乳腺，差异有统计学意义（P=0.000），与张哲珺等[9]研究一致。α-SMA表达与肿瘤直径、淋巴结转移及TNM分期显著相关（P＜0.01），与文献报道一致[10-11]。单因素Log-Rank检验显示，乳腺浸润性导管癌组织学分级、淋巴结转移、TNM分期、ER表达与预后显著相关（P＜0.01），而患者年龄、肿瘤直径、HER2表达、α-SMA表达与预后无关（P＞0.05）。多因素Cox回归分析显示，乳腺浸润性导管癌组织学分级、淋巴结转移及TNM分期具有独立的预后意义（P均＜0.05）。

CAFs表达升高促进肿瘤的发生发展及侵袭转移，有望成为乳腺癌免疫治疗的新靶点。

[参考文献]

[1] 朱燕，杨其昌，刘宏斌，等. 驱动蛋白Kif2a在乳腺癌组织芯片中的表达及临床意义［J］. 实用医学杂志，2016，32（16）：2663-2666.

[2] WU T，DAI Y. Tumor microenvironment and therapeutic response［J］. Cancer Lett，2017，387：61-68.

[3] SHIMURA T，SASATANI M，KAWAI H，et al. Radiation-induced myofibroblasts promote tumor growth via mitochondrial ROS-activated TGFβ signaling［J］. Mol Cancer Res，2018，16（11）：1676-1686.

[4] MATHOT P，GRANDIN M，DEVAILLY G，et al. DNA methylation signal has a major role in the response of human breast cancer cells to the microenvironment［J］. Oncogenesis，2017，6（10）：e390.

[5] SUH J，KIM D H，SURH Y J. Resveratrol suppresses migration，invasion and stemness of human breast cancer cells by interfering with tumor-stromal cross-talk［J］. Arch Biochem Biophys，2018，643：62-71.

[6] 許良中，杨文涛. 免疫组织化学反应结果的判断标准［J］. 中国癌症杂志，1996，6（4）：229-231.

[7] STANISAVLJEVIC J，LOUBAT-CASANOVAS J，HERRERA M，et al. Snail1-expressing fibroblasts in the tumor microenvironment display mechanical properties that support metastasis［J］. Cancer Res，2015，75（2）：284-295.

[8] JAIN R K，MARTIN J D，STYLIANOPOULOS T. The role of mechanical forces in tumor growth and therapy［J］. Annu Rev Biomed Eng，2014，16：321-346.

[9] 张哲珺，陆元志，钟雪云. 乳腺癌中Tenascin C、α-SMA和PDGFRα的表达及意义［J］. 临床与实验病理学杂志，2019，35（9）：1013-1017.

[10] LUO H，TU G，LIU Z，et al. Cancer-associated fibroblasts： a multifaceted driver of breast cancer progression［J］. Cancer Lett，2015，361（2）：155-163.

[11] ERSHAID N，SHARON Y，DORON H，et al. NLRP3 inflammasome in fibroblasts links tissue damage with inflammation in breast cancer progression and metastasis［J］. Nat Commun，2019，10（1）：4375.

[收稿日期] 2022-10-06

（本文编辑   王晓蕴）