阮班锋, 陈刘赠, 吴 克, 张 敏

(合肥学院生物食品与环境学院, 合肥 230601)

如何在本科教育中体现创新发展的理念,培养具有创新精神和创新能力的大学生是当前教学改革的核心问题。细胞生物学是一门理论知识与实验技术并重的学科,尤其是细胞生物学实验技术,是推动生命科学、 医学、药学等相关研究领域蓬勃发展的关键核心技术之一[1-2]。细胞焦亡(Pyroptosis)是一种新发现的细胞死亡形式, 是一种高度促炎性的细胞程序性死亡[3]。目前,激活 caspase-1 和 caspase-4、5、11 所引发的细胞焦亡,被认为是宿主抵抗感染的辅助免疫防御机制。此外,在炎性肠病、动脉粥样硬化、阿尔茨海默病、痛风性关节炎等人的自身炎症性疾病过程中也发现细胞焦亡的参与[4]。NLRP3炎症小体是一种多聚蛋白复合物,活化的炎症小体介导IL-1β和IL-18的分泌,同时导致细胞焦亡[5]。研究发现NLRP3炎症小体参与机体的多种病理过程,与多种炎性疾病的发生发展密切相关。因此,通过细胞焦亡的检测筛选NLRP3炎症小体活化抑制剂在抗炎药物研发中具有重要意义[6]。

荧光染料PI(碘化丙啶)是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂,它是一种溴化乙啶的类似物,在嵌入双链DNA后显红色荧光[7]。Hoechst 33342可以直接透过细胞膜对活细胞和死细胞的DNA染色(蓝色荧光),由此可以通过荧光区分正常细胞与焦亡细胞[8]。利用高内涵计数不同条件下PI染色的焦亡细胞总数和Hoechst 33342染色的细胞总数,通过两者的比值(焦亡率)反映化合物的生物学活性[9]。

目前NLRP3炎症小体抑制剂的筛选主要是利用ELISA试剂盒检测化合物对IL-1β分泌的抑制作用,但ELISA试剂盒价格昂贵、操作复杂,并且实验重复性较差,同时本科生创新创业项目受实验场地、实验仪器和经费等限制。……