许 琳, 梁欢欢, 李红英, 韩 旭, 戴柳冰, 马 超, 朱 涛,

(1. 天津科技大学生物工程学院, 天津 300457; 2. 康希诺生物股份公司, 天津 300000)

腺相关病毒(Adeno-Associated Virus,AAV)最早于20世纪60年代在实验室腺病毒制剂中发现[1-2],随后不久在人体中发现[3]。AAV是一类无包膜、直径20～26 nm的二十面体结构,含有4.7 kb的单链DNA基因组,属于细小病毒家族[4-6]。由于其安全性好、宿主范围广(分裂和非分裂细胞)、物理性质稳定,并且感染人体后不会导致任何生理或病理变化而成为基因治疗最具应用前景的载体之一[7-8]。目前,以AAV为载体成功用于临床基因治疗的药物有3种,即Glybera(AAV1)、Luxturna(AAV2)和Zolgensma(AAV9)。不同的AAV血清型具有不同的组织趋向性,已被证明在肺、肌肉、大脑、脊髓、视网膜和肝脏等多种组织中可以进行长期有效的表达[9-10]。

基因治疗产品的质量对临床药物的安全性至关重要。使用三质粒转染人胚肾细胞(HEK293)时,病毒包装成实心载体的过程往往是低效的,导致在生产制备过程中形成缺乏载体基因组的空颗粒[11-12],病毒空颗粒被认为是最难以去除的杂质。Gao等[13]研究表明去除AAV制剂中的病毒空颗粒会提高AAV在临床应用中的治疗效果和安全性。使用氯化铯梯度超速离心法纯化的AAV载体已被用于一些临床试验中,然而这些纯化方法并不容易工艺放大[14]。最近阴离子交换层析、阳离子交换层析和凝胶过滤层析被报道用于分离病毒空颗粒,然而这些方法主要是针对AAV1-6、AAV8和AAV9[15-17]。本研究使用亲和捕获后的rAAV5样品,进行层析填料与层析柱的筛选,根据筛选结果作进一步纯化体系和方法的优化。……