王存连, 李龙飞, 张瑞华, 徐明举, 徐 彤

(河北北方学院动物科技学院, 张家口 075000)

TRPM2(transient receptor potential melastatin-2)是瞬时受体电位超家族中M亚家族成员之一[1],作为氧化应激敏感性传感器,TRPM2介导氧化应激引起的细胞内Ca2+浓度升高,参与多种细胞的生理/病理过程[2-3]。因此,TRPM2可作为氧化应激相关性疾病潜在治疗靶点。抑制内源性TRPM2的表达和功能,能有效缓解H2O2作用下氧化应激导致的血管内皮细胞损伤[4]。研究发现,H2O2可以通过TRPM2活化钙依赖性络氨酸激酶2(Pyk2)引起Ca2+内流,进而通过RAS信号途径激活Erk信号通路,证实TRPM2离子通道是活性氧类自由基进一步引起炎性反应的重要级联信号通路之一。同时,TRPM2通道介导的Ca2+内流可以调控氧化物诱导趋化因子产生的信号级联反应,反馈性增加嗜中性粒细胞对内皮细胞的黏附和ROS的产生,进而导致内皮细胞炎症和损伤加重,血管渗出性增强[5],表明TRPM2离子通道可能是氧化应激导致血管内皮细胞进一步损伤的重要途径之一。

CRISPR/Cas9技术作为第三代基因组定点编辑技术,凭借成本低、操作方便、效率高等优点在疾病治疗、基因工程、基础研究方面广泛应用[6-8]。本研究利用CRISPR/Cas9技术建立TRPM2基因敲除小鼠模型,为进一步开展TRPM2基因及其表达产物的生物功能研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物

4周龄SPF级雌性C57BL/6J小鼠30只,体重约15 g;10周龄SPF级雄性 C57BL/6J 小鼠2只,10周龄ICR结扎雄鼠和ICR母鼠各15只,体重约65 g,均购自上海南方模式生物科技股份有限公司[SCXK(沪)2017-0012],饲养于河北北方学院实验动物中心,期间自由采食饮水,昼夜各半循环照明,湿度恒定,温度控制在22 ℃～25 ℃。……