赵立晶 张鸿翔 王国安

骨肉瘤是最常见的原发性恶性骨肿瘤，在青春期和老年期发病率较高。骨肉瘤极易发生转移，且以肺转移最常见[1]。近三十年来，骨肉瘤的治疗进入了平台期，尤其是转移性骨肉瘤和复发性骨肉瘤，致残率和死亡率极高[2-3]。探究骨肉瘤发病的分子机制和治疗靶点是骨肉瘤研究的重要方向。

miRNA是一种由18 ～ 24个核苷酸组成的小型单链非编码RNA，其通过与特定mRNA的靶向结合来调控基因的表达[4]。miRNA 水平的改变与包括肿瘤在内的常见人类疾病的发展有关，能够参与所有关键的肿瘤相关过程，包括DNA 损伤修复、细胞死亡、细胞增殖，以及上皮-间质转化、肿瘤侵袭和转移形成等[5-6]。同样，miRNA的异常变化也参与骨肉瘤的发生和发展，本研究通过生信分析，从经典GEO 数据库中筛选骨肉瘤中异常表达的miRNA。探究miR-654-3p对GMFB基因的靶向调控作用，以及对骨肉瘤细胞增殖的影响，并绘制基于GMFB表达来预测骨肉瘤患者预后情况的列线图，从而为探究骨肉瘤更多的发病机制、探索更可靠的生存预后预测方法提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 主要材料、试剂与仪器

主要材料、试剂：人正常成骨细胞系hFOB1.19，人骨肉瘤细胞系143B、MG-63、SAOS2 和HOS[美国模式培养物集存库（ATCC）]；DMEM 培养基、胎牛血清（FBS，美 国Gibco 公 司）； miR-654-3p mimics、 mimics NC、pcDNA-GMFB、双荧光素酶报告质粒（上海吉玛基因公司）。PrimeScripTM RT试剂盒、SYBR Green Premix试剂盒（日本TaKaRa公司）；4%多聚甲醛、CCK8 试剂盒、RIPA裂解液、制胶试剂盒、上样缓冲液、ECL化学发光试剂盒（上海碧云天公司）；抗GMFB抗体、山羊抗兔IgG二抗（英国Abcam公司）。主要仪器：二氧化碳培养箱、超净工作台、NanoDrop 分光光度计（美国Thermo Scientific 公司）；……