张 婧,汪 静

陕西省宝鸡市中心医院口腔科,陕西宝鸡 721000

慢性牙周炎是指微生物在牙周长期定植、繁殖,并向牙周深部组织扩散引起的牙齿支持组织慢性炎症,该病是临床常见的慢性口腔炎症性疾病[1]。研究表明,慢性牙周炎可以引起口腔异味、牙龈肿痛、牙龈出血等症状,如未给予及时有效的治疗,炎症往牙周深部组织进展,引起牙龈退缩、牙周脓肿,甚至牙齿脱落[2]。目前临床上对于慢性牙周炎主张早期诊断并给予及时治疗,寻找慢性牙周炎病情评估的指标对于指导临床治疗具有重要的价值。龈沟液是由牙龈结缔组织分泌的一种液体,其成分可以反映牙周炎症反应情况[3]。乳铁蛋白(LF)是由中性粒细胞脱颗粒过程中产生的蛋白,具有抗菌、抗氧化、调节免疫功能等作用,其水平还可以反映炎症反应情况[4]。音猬因子(Shh)蛋白是Hedgehog信号通路的重要因子,也是Hedgehog蛋白家族的重要成员,在组织修复、细胞再生和炎症损伤中发挥重要作用[5]。髓样细胞触发受体-1(TREM-1)是BOUCHON等[6]于2001年报道的炎性因子,与炎症反应有密切关系。慢性牙周炎患者龈沟液中LF、Shh蛋白、TREM-1水平与牙周临床指标及炎性因子的关系尚不清楚。鉴于此,本研究进行了相关分析,以期为慢性牙周炎的临床诊治提供一定参考,现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择本院2021年1-12月收治的慢性牙周炎患者104例作为研究组,其中男66例、女38例,年龄32～65岁、平均(43.55±6.12)岁,病程6～9年、平均(3.04±1.57)年。纳入标准:(1)入组患者符合《牙周病学(第4版)》关于慢性牙周炎的诊断标准[7];(2)患者口腔X线片检查显示存在牙槽骨部分吸收,牙颈部无牙体病变;(3)全口余留牙≥18颗;(4)患者入组前2个月内未服用抗菌药物及使用含漱液,未接受过其他牙周治疗。排除标准:(1)合并糖尿病、心脑血管疾病、慢性肝肾疾病患者;(2)合并牙髓炎及侵袭性牙周炎患者;(3)合并免疫系统疾病患者;(4)近半年内有创伤、感染及手术史患者;(5)妊娠、哺乳期女性。另选取同期在本院进行口腔检查的健康志愿者30例作为对照组,其中男18例、女12例,年龄33～62岁、平均(43.06±4.68)岁。研究组与对照组性别、年龄比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。本研究经本院医学伦理委员批准,患者及家属对本研究知情同意。

1.2方法

1.2.1牙周临床指标检测 所有患者进行除第3磨牙外的全口牙周临床检查,每颗牙分别选取舌侧、颊侧的远中、正中和近中共计6个位点检测探诊深度(PD)、附着丧失(AL)和出血指数(BI),最后取平均值作为检测结果。PD为龈缘至牙周袋底部或龈沟底部的距离。牙龈无萎缩时,AL为PD减去釉牙骨质界到龈缘距离;当发生牙龈萎缩时,AL为PD与釉牙骨质界到龈缘距离之和。使用牙周探针对牙周袋或龈沟进行探诊,取出探针30 s后观察牙龈出血情况,记录BI。0分:牙龈健康、无出血;1分:牙龈有炎性改变,但探诊时无出血;2分:牙龈探诊后出现点状出血;3分:牙龈探诊后有明显出血,牙龈裂开;4分:牙龈探诊后剧烈出血;5分:牙龈自动出血[7]。选取舌侧边缘龈、颊侧近中龈乳头、颊侧远中龈乳头、颊侧边缘龈4个位点记录炎症反应情况。0分:牙龈健康;1分:牙龈轻度炎症;2分:牙龈中度炎症;3分:牙龈重度炎症,将4个位点得分求平均值作为牙龈指数(GI)[8]。

1.2.2龈沟液采集 探诊两组研究对象后去除牙龈软垢和菌斑,吹干牙面,用2 mm×10 mm的Whatman滤纸深插入龈沟底部,停留30 s,取出滤纸并放入EP管中。EP管中预先放入0.2 mL的磷酸盐缓冲液(PBS),震荡1 h,3 000 r/min离心10 min,离心半径12 cm,取上清液。

1.2.3龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1及炎性因子的检测 应用酶联免疫吸附试验测定龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-7水平。将上清液分装,取原倍的标准品150 μL进行稀释,取96孔板,分别设置标准孔、空白孔、待测样品孔。首先进行酶标包被,加入标准品50 μL,然后加入40 μL样品稀释液和10 μL待测样品,轻轻摇晃混匀样品,封板后置于37 ℃恒温条件下孵育30 min。拆掉封膜后将液体弃用,拍干,除空白孔外每个孔加入酶标液50 μL,显色剂A、B各50 μL,震荡混匀,在37 ℃恒温条件下避光显色15 min。加入终止液50 μL,15 min后在450 nm波长下观察吸光度值,并计算待测样品中相关指标的水平。LF、Shh蛋白检测试剂盒购自上海百蕊生物科技有限公司,TREM-1检测试剂盒购自上海初态生物科技有限公司,TNF-α、IL-6、IL-7检测试剂盒购自北京伊诺凯科技有限公司。所有操作严格按照试剂盒说明书进行。

1.3慢性牙周炎病情严重程度的评估[7]轻度:GI<1,PD<4 mm,AL为1～2 mm,牙齿松动不明显;中度:GI为1～2,PD为4～6 mm,AL为>2～4 mm,牙齿轻度松动,多根牙出现轻度分叉病变;重度:GI>2,PD>6 mm,AL>4 mm,牙齿多处松动,牙根分叉明显。

2 结 果

2.1两组龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1水平比较 研究组龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1水平显著高于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 两组龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1水平比较

2.2不同病情严重程度慢性牙周炎患者龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1水平比较 根据病情严重程度将患者分为轻度组38例、中度组44例、重度组22例。重度组患者龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1水平显著高于中度组、轻度组(P<0.05);中度组患者龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1水平显著高于轻度组(P<0.05)。见表2。

表2 不同病情严重程度慢性牙周炎患者龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1水平比较

2.3不同病情严重程度慢性牙周炎患者牙周临床指标比较 重度组患者PD、AL、BI、GI显著高于中度组、轻度组(P<0.05);中度组患者PD、AL、BI、GI显著高于轻度组(P<0.05)。见表3。

表3 不同病情严重程度慢性牙周炎患者牙周临床指标比较

2.4不同病情严重程度慢性牙周炎患者龈沟液炎性因子水平比较 重度组患者龈沟液TNF-α、IL-6、IL-17水平显著高于中度组、轻度组(P<0.05);中度组患者龈沟液TNF-α、IL-6、IL-17水平显著高于轻度组(P<0.05)。见表4。

表4 不同病情严重程度慢性牙周炎患者龈沟液炎性因子水平比较

2.5慢性牙周炎患者龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1与牙周临床指标和炎性因子的相关性 Pearson相关分析显示,慢性牙周炎患者龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1水平与PD、AL、BI、GI及龈沟液TNF-α、IL-6、IL-17水平均呈正相关(P<0.05)。见表5。

表5 慢性牙周炎患者龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1与牙周临床指标和炎性因子的相关性

3 讨 论

慢性牙周炎的主要病因是牙齿和牙龈交界处的龈沟内、牙面内的病原微生物大量繁殖,引起牙周慢性炎症,并形成牙周袋和牙菌斑,炎症反复迁延不愈,最终造成牙槽骨吸收、牙齿松动[9]。慢性牙周炎造成的牙周支持组织损伤是不可逆的,因此,临床上对于慢性牙周炎应早期诊断,及时治疗。龈沟液是由牙龈结缔组织分泌的一种液体,当牙周发生炎症时,组织细胞可以分泌和表达大量的炎性因子,通过检测龈沟液中炎性因子水平可以反映炎症反应情况[10]。因此,寻找慢性牙周炎龈沟液特异性分子对于疾病诊治具有重要的意义。

本研究对慢性牙周炎患者及健康志愿者龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1水平进行了比较。LF是一种铁离子结合糖蛋白,最初在牛乳汁中分离获得[11]。研究表明,LF广泛存在于哺乳动物体内,其中人初乳中LF含量为20%以上,在唾液、胃液等分泌物中LF含量也较高[12]。研究表明,在中性粒细胞脱颗粒过程中可以产生LF,LF具有抗炎症反应的作用[13]。Shh蛋白是一种分泌型蛋白,是Hedgehog蛋白家族的重要成员[14]。研究表明,Shh蛋白在细胞内通过一系列的催化修饰和裂解与胆固醇共价结合,并与软脂酰辅酶A发生反应,完成蛋白修饰,分泌到细胞外发挥作用[15]。研究表明,Shh蛋白可以通过启动Hedgehog信号通路发挥促炎作用[16]。TREM-1主要表达于单核巨噬细胞表面和中性粒细胞表面,它可以与Toll样受体(TLR)2和TLR4结合并被激活,从而启动炎症反应[17]。BOSTANCI等[18]报道指出,牙周组织中存在TREM-1异常表达,其水平与慢性牙周炎的发生有关。本研究结果显示,慢性牙周炎患者龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1水平异常升高,且随病情严重程度的增加慢性牙周炎患者龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1水平逐渐升高,表明LF、Shh蛋白、TREM-1可能与慢性牙周炎的发生、发展有关。分析原因可能与以下几方面有关:(1)慢性牙周炎是牙齿支持组织的慢性炎症,炎症细胞的浸润在疾病发生、发展中起重要作用,而在中性粒细胞浸润过程中会启动中性粒细胞脱颗粒,并分泌大量的LF,导致龈沟液中LF水平升高[19];(2)在慢性牙周炎发病过程中Shh蛋白水平升高,并启动Hedgehog信号通路,发挥促炎作用[20];(3)在慢性牙周炎发病过程中也会导致单核巨噬细胞和中性粒细胞激活,而TREM-1主要表达于单核巨噬细胞表面和中性粒细胞表面,其水平升高可能与牙周组织单核巨噬细胞、中性粒细胞聚集,启动炎症反应有关[21]。另外随着病情的加重,牙周的炎症反应更加剧烈,炎症细胞浸润程度增加,因此,龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1水平越高。

本研究结果显示,随着疾病严重程度的增加,慢性牙周炎患者PD、AL、BI、GI逐渐升高。PD、AL、BI、GI是反映慢性牙周炎严重程度的重要临床指标。随着慢性牙周炎的病情加重,炎症可以向牙周深部组织逐渐进展,引起牙龈萎缩、牙周脓肿、牙周袋形成,导致PD、AL、BI、GI升高。本研究结果表明,随着疾病严重程度的增加,慢性牙周炎患者龈沟液TNF-α、IL-6、IL-17水平逐渐升高。TNF-α可以作用于机体血管内皮细胞,导致血管内皮损伤,引起组织缺血和炎症反应[22]。TNF-α还可以直接参与炎症反应,促进机体产生胶原酶,导致组织坏死和吸收[22]。IL-6是主要由T淋巴细胞、单核巨噬细胞、血管内皮细胞产生的炎性因子,具有促进中性粒细胞聚集和活化的作用[23]。IL-17是辅助性T细胞17(Th17)分泌的特异性因子,它能够激活T淋巴细胞,发挥促炎作用[24]。在慢性牙周炎的发生和发展中,TNF-α可能引起牙周组织缺血和损伤,并促进牙周炎症反应[25],而IL-6、IL-17可能与机体免疫细胞激活,炎症反应激活有关[26]。

本研究结果还显示,慢性牙周炎患者龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1水平与PD、AL、BI、GI及龈沟液TNF-α、IL-6、IL-17水平呈正相关,表明龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1水平可以反映慢性牙周炎病情及炎症反应情况。临床上由于慢性牙周炎的早期诊断对于治疗非常重要,而目前临床上对于慢性牙周炎的诊断仍主要依据PD、AL、BI、GI等临床指标,但检测可能带来一定的创伤。相对于全口牙周临床检查,龈沟液采集则更为方便,也方便动态观察。本研究结果也提示检测龈沟液中LF、Shh蛋白、TREM-1对慢性牙周炎的诊断有一定的指导价值。

综上所述,慢性牙周炎患者龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1水平异常升高,其水平与牙周临床指标和炎性因子呈正相关,LF、Shh蛋白、TREM-1水平可以反映疾病严重程度,检测龈沟液LF、Shh蛋白、TREM-1可以辅助评估慢性牙周炎的病情。