黄媛媛,王秀桥,高平,黄爱莲

(湛江市食品药品检验所,广东 湛江 524022)

糖皮质激素类药物属甾体类化合物[1],不仅可以调节糖,还可以调节蛋白质及脂肪的代谢和生物合成。在医学治疗手段中,糖皮质激素是抗感染的药物之一,使用含有该激素的药物可以抑制纤维细胞的增殖生长,从而控制氧化曲普坦的形成量,可以让皮肤变得光滑、白皙[2]。

由于其能够抑制纤维细胞的增生,使用添加糖皮质激素的化妆品,不仅能够改善皮肤状况,还能够祛痘淡斑、美白养颜、去除脸部血丝等[3]。但长期使用含糖皮质激素的化妆品会产生严重的副作用甚至危害人体的身心健康。正是由于糖皮质激素的美容美白功效,一些不法商家常常将其添加到各类化妆品中以获取不正当的利益。且在一些功能性化妆品中,可能有非法添加的糖皮质激素,若不知情消费者长期使用,后果不堪设想。糖皮质激素是化妆品中的违禁物质[4],但该物质的非法添加时有发生,目前主要有GB/T 24800.2—2009以及《化妆品安全技术规范》中所涉及的激素种类的检测方法[4-5]。市场上糖皮质激素的类型较多,非法添加的情况也较为严重。因此,研究化妆品中糖皮质激素的检测方法,为政府实施卫生监督提供技术参考,以保障消费者的身体健康。

1 化妆品中非法添加糖皮质激素的危害

含激素类的化妆品对人体皮肤没有任何好处可言,若是长期使用后果更为严重,不仅损害使用者的皮肤,更会损害人体的身心健康。因此,激素类化妆品应该要杜绝使用或生产,同时要注意避免长期使用含激素类的化妆品,保证消费者的皮肤和身心健康安全。

从使用的短期效果来看,添加了糖皮质激素的化妆品可以使皮肤变得光滑,白皙细腻。但是一旦长期使用上述所说“效果惊人”的化妆品,会对消费者的皮肤、身心健康等造成破坏性的影响,如内分泌失调,导致紊乱,影响发育健康,使皮肤的毛囊萎缩、有色斑形成或者毛细血管扩张,皮肤泛红、有红血丝等,依赖性皮炎也可能会形成。有些化妆品需要持续使用才能保持效果,当停下后,副作用就会随之而来,如出现瘙痒、皮肤红肿、长丘疹,难以治愈。轻者只是肌肤问题没有任何改变,激素依赖性皮炎形成就是中度损害,更甚则伤及身体健康,后果严重,如高血压、精神失常、类固醇性糖尿病、消化性溃疡、眼部并发症等等[6-7]。

2 化妆品中糖皮质激素的检测方法

化妆品中糖皮质激素的检测方法包括分光光度法、薄层色谱法、高效液相色谱法、超高液相色谱法、液相色谱-串联质谱法、液相色谱-高分辨质谱法、毛细管电泳法和免疫分析法等。

2.1 分光光度法

目前,分光光度法应用在化妆品中甾体激素检测较为少见而较多应用于药物类检验。分光光度法是利用甾体激素化学显色反应原理,但定量分析方法均存在局限性,容易被化妆品中某些成分干扰,因此在进行激素成分的检验测定时,应做好一定的前处理工作即提取待测物质,并进行分离和纯化[8]。刘军[9]采用Liebermann-Burchard法进行显色反应测定醋酸氢化可的松、醋酸可的松两种糖皮质激素的分光光度法,检出限分别为0.02,0.36 mg,相对标准偏差(RSD)为3.23%,回收率分别为98.17%,101.80%。

2.2 薄层色谱法

操作简单便捷、省钱经济、选择性能突出、受其他物质干扰少是薄层色谱法的特点,推广较容易。其分离性能较强,可以一一分离样品中各种激素物质和干扰物质,通过做出标准Rf值,再与样品溶液跑出的斑点进行比较,来确认样品的种类和性质,继而判断出样品中该激素是否存在,限制就是定量困难[10]。但在实际日常检验中,使用该检测方法测定很少,还是现行国标法为主。

2.3 高效液相色谱法

高效液相色谱法是现在分离检测分析中常用的技术方法,因其工作效率较高、分离效果好以及较为简单快速而被关注和使用。该法的优点是操作便捷简单、测试分析时间较短,采用该方法对于检测泼尼松龙等九种糖皮质激素在化妆品当中的含量十分有效。高卫东等[11]建立了高效液相色谱法测定化妆品中地塞米松、醋酸地塞米松、醋酸泼尼松和氢化可的松等糖皮质激素及雌激素、雄性激素和孕激素等共11种激素的分析方法。其以甲醇为提取溶剂,采用超声提取方法来处理不同形态的化妆品样品,以LUBEX Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)分离,乙腈和水为流动相。该法的平均回收率为97.68%～108.95%,RSD为0.27%～3.2%,该法简便准确、重现性好,可很好地应用于上述化妆品中11种激素的检测。

泼尼松、氢化可的松、地塞米松、醋酸可的松、曲安奈德和丙酸氟替卡松等是糖皮质激素的常见种类,李娟等[12]建立了固相萃取-高效液相色谱法测定化妆品中上述6种糖皮质激素的方法,样品提取后,经Oasis HLB固相萃取柱净化,甲醇-乙腈和水作为流动相,采用Nucleodur C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),使6种糖皮质激素得到有效分离。平均加标回收率为81.8%～96.1%,RSD为3.3%～6.4%,检出限为0.78～1.12 μg/L。

2.4 超高液相色谱法

周江等[13]建立了超高效液相色谱法同时测定祛痘、美白化妆品中4种糖皮质激素倍他米松双丙酸酯、曲安奈德醋酸酯、氯倍他索丙酸酯、氢化可的松含量的方法。提取被测物质后,Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)分离。采用该方法测定的回收率为85.3%～102.8%,RSD为2.1%～5.0%(n=6)。该方法采用的前处理较为简单便捷,检测速度快,分离效果好,且灵敏度高。

2.5 液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)

温家欣等[14]提出了Captiva EMR固相萃取结合LC-MS/MS同时测定41种糖皮质激素含量的方法。采用含1%甲酸的乙腈溶液提取目标化合物,再将提取成分过Captiva EMR固相萃取柱净化。分离采用Thermo Accoure PFP色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.6 μm),乙腈溶液(含0.1%乙酸)-0.1%乙酸溶液为流动相;正离子(ESI+)扫描,选择多反应监测(MRM)模式检测,外标法定量。该法的样品提取处理比较简洁、方便、快速,萃取柱净化效果明显,灵敏度高,能更好地为化妆品高通量检测提供技术支持。

杨光勇等[15]为测定化妆品中45种糖皮质激素(GCs)含量,建立采用QuEChERS进行前处理,再通过超高效合相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)测定的方法。分离柱为Torus 2-PIC色谱柱(100 mm×3.0 mm,1.7 μm);后经正离子扫描、多反应监测模式下进行测定,外标法定量。该方法下测定的45种GCs的检出限为0.05～0.10 μg/kg,定量限为0.15～0.30 μg/kg;回收率为74.4%～110.7%,RSD为2.9%～11%。该法的操作方便简单、专属性好、灵敏度高、绿色环保,比传统方法极具优势,可以测定化妆品中的多种糖皮质激素。

杨飘飘等[16]建立了采用超高效液相色谱-串联质谱法检测化妆品中氯倍他索乙酸酯的方法,五种常见的化妆品基质适用于这种新方法:面霜、凝胶、黏土、面膜和乳液。样品经乙腈涡旋分散、超声提取,然后用UPLC-MS/MS检测,Waters CORTECS C18色谱柱(150 mm×2.1 mm,2.7 μm)分离被测物质,选择正离子扫描(ESI)方式,模式使用多反应监测(MRM)。定量则用矩阵匹配标准曲线进行。检出限为0.03 μg/g,定量限为0.09 μg/g,回收率范围为83.2%～103.2%,相对标准偏差(RSD)范围为1.4%～5.6%,该方法简单、灵敏、可靠,适用于高通量定性和定量筛选以及不同基质类型的化妆品分析。

2.6 液相色谱-高分辨质谱法

徐振东等[17]建立了化妆品中41种糖皮质激素的分析方法,采用了基于在线净化液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱技术。提取被测样品中的物质,通过Cyclone P在线净化柱净化,C18柱分离,以Full Scan/dd MS2模式进行检测。该法的加标回收率为71.3%～108.5%,RSD为2.7%～7.9%。该法样品的前处理过程简洁快捷,上手快速,实验结果检测效率高,检测速度快,对测定和快速筛查化妆品中的糖皮质激素适用。

杨飘飘等[18]依据GB/T 24800.2—2009,在化妆品糖皮质激素的测定过程中,发现了一种与标准中倍他米松醋酸酯具有相同子离子的疑似糖皮质激素。在没有标准品的情况下,使用高分辨质谱(UHPLC-LTQ/Orbitrap MS)确定了该物质的精确相对分子质量及分子式,并结合该物质与类似化合物进行的一系列解析验证,结果证实了待验证物质确实是预先猜测的结果。提取物质后,HLB固相萃取柱净化,色谱柱为Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.7 μm),经正离子扫描后;采用多反应监测模式分离可疑物,再通过(UHPLC-LTQ/Orbitrap MS)确证可疑物质。该法发现了新型的糖皮质激素——氯倍他索乙酸酯,该物质是标准当中并未提及检测的激素物质。因此,现有的检验方法未能全面覆盖检测组分,导致检测组分不全,促使检测机构和单位快速建立筛查方法,该法可实现对未知化合物的快速筛查定性。

2.7 毛细管电泳法

孙雪婷等[19]建立了在线富集检测化妆品中6种糖皮质激素的分析方法,主要采用反向微乳毛细管电色谱电动进样联用场放大堆积。这6 种激素的富集倍数为100～186倍。使用该方法的检出限为20～60 μg/L,添加50 μg/L的标准加入量时,回收率85.9%～103.8%,RSD均小于5.8%。该法样品用量少、操作过程简单、经济快速,具有良好的灵敏度和分离度。

为测定化妆品中倍他米松、泼尼松龙、氢化可的松和泼尼松这4种糖皮质激素,郭成方等[20]建立了微乳毛细管电动色谱(MEEKC)在线富集-大体积进样(LVSI)与非匀强电场扫集(REFS)联用的方法。富集倍数在最优条件下为853～933倍,检出限为4～8 μg/L。回收率为93.7%～103.8%,RSD≤4.4%。该方法重现性好,前处理简单方便,灵敏度在一定程度上有所提高,可用于化妆品中糖皮质激素的痕量分离测定。

2.8 免疫分析法

ELISA的反应机理,即抗体抗原的特异性免疫反应。该法的优点是与之前的单个免疫分析相比,检测通量得到极大的提高,同时样本量的需求有所减低,一定程度上节约了时间和操作成本,这可作为一种快速检测技术在实验室当中进行广泛应用。目前应用在化妆品中糖皮质激素的研究较少。谭攀等[21]研究建立了应用酶联免疫分析法测定地索奈德的方法。通过该法原理,检测的灵敏度有所提高。对化妆品、保健食品的回收率为82%～105%。同样其他糖皮质激素药物免疫检测灵敏度可用该法提升,能有效快速筛查食品和化妆品中的地索奈德。

3 总结与展望

化妆品作为人民生活中不可缺失的一部分,其安全问题也极度受到关注,为确保消费者的使用安全,消除安全隐患,检测其违禁添加的物质极为重要,也是市场监督中最重要的一环。目前,化妆品中糖皮质激素含量的检测方法有很多,但各方法都有其优点和缺点,选择检测方法时应关注样品类型、检测需求及其效益性。因此,对于化妆品中可能存在的非法添加物糖皮质激素的含量及其种类,检测方法和手段应当结合样品的相关性质、实验室条件、仪器、成本及工作需求来挑选,做到更好地监督、监管化妆品的使用安全、维护消费者身心利益。