邓安富， 陈友波， 李 辉*， 姚 婷， 黄雨瑶

(1. 高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室，贵州贵阳550025； 2. 贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室，贵州贵阳550025； 3. 贵州大学动物科学学院，贵州贵阳550025)

石斛具有增强T淋巴细胞杀死肿瘤细胞的能力，抑制肿瘤细胞的增殖、入侵和迁移，对于癌症的治疗应用前景广阔[1]。宓文佳等[2]研究表明，石斛提取物可降低糖尿病小鼠的空腹血糖，并能有效改善小鼠的毛色、体温、活动量、生活质量和口服糖耐量。施子棣等[3]研究发现，石斛多糖可以增加小鼠胸腺和脾脏等免疫器官的重量，通过增加T细胞与B细胞增殖，从而增加抗体含量，增强细胞免疫和体液免疫。为减少滥用抗生素造成的危害，我国自2020年1月1日起全面禁止在饲料中添加抗生素。本研究以赤水金钗石斛粉作为饲料添加剂，研究不同比例的添加量对赤水乌骨鸡血液免疫指标的影响，为开发利用绿色、无公害的中药类饲料添加剂提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料和分组(1)试验用石斛为贵州赤水金钗石斛，购自遵义赤水市金钗石斛产业开发有限公司。(2)随机选取赤水竹乡鸡养殖有限公司饲养的生长状况基本一致的60日龄赤水乌骨鸡360只，采用完全随机试验设计分为4个组，每组90只，每组设6个重复，每个重复15只，分装于5个鸡笼，每笼3只，3层笼养。对照组饲喂基础饲粮；试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别在基础日粮中采用逐级混匀的方式添加0.07%、0.14%、0.21%质量比例的赤水金钗石斛粉(见表1)。预饲期15 d，正饲期90 d。

表1 试验分组

1.2 主要试剂和仪器非抗凝普通采血管、离心机、电子天平、无菌离心管、各免疫指标检测试剂盒(购自南京建成生物工程研究所)、PowerWaveXS型全波长酶标仪(Bio-tek Instruments.Inc.USA)。

1.3 试验日粮及营养成分根据美国NRC《鸡营养需要(1994版)》及中国《鸡饲养标准(NY/T 33—2004)》配制玉米-豆粕型基础日粮，日粮组成及营养水平见表2。

表2 基础日粮组成及营养水平(干物质基础)

1.4 饲养管理采用3层全阶梯式笼养，乳头自动饮水器，自然光照结合人工补充光照16 h，自然通风，定期清理粪污，保持舍内清洁卫生。疫病防控按照种鸡场防疫规定进行，定期检查试验鸡的健康状况并记录死亡数。

1.5 样品采集和检测

1.5.1 样品采集试验结束后随机选取48只鸡(每个重复2只，每个处理组12只)，用非抗凝普通采血管翅下静脉采血5 mL，静置30 min后离心机3 000 r/min 离心15 min，分离出血清，将血清分装到无菌离心管中，密封放入-20 ℃冰箱里保存。

1.5.2 样品测定(1)采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清中的免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素12(IL-12)含量；采用比色法测定血清中的总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)含量。以上指标均按照试剂盒及酶标仪操作步骤进行测定。(2)空腹称量150龄健康试验鸡活体重，屠宰后分离胸腺、脾脏、法氏囊，剔除表面脂肪，滤纸吸干血水，电子天平称重，统计其绝对重量并计算免疫器官指数。免疫器官指数(mg/g)=免疫器官鲜重(mg)÷活体重(g)

1.6 数据统计应用SPSS 22.0统计软件对试验数据进行统计分析，结果以“平均数±标准差”表示。各组试验数据进行单因素方差分析，采用Duncan法进行组间多重比较。

2 结果与分析

2.1 鸡血清免疫指标测定结果由表3可见：与对照组相比，饲料中添加0.07%石斛粉(试验Ⅰ组)可显著提高鸡血清中IFN-γ、ALB、IL-12的含量(P<0.05)；添加0.14%石斛粉(试验Ⅱ组)可显著提高鸡血清中ALB的含量(P<0.05)；添加0.21%石斛粉 (试验Ⅲ组)可提高鸡血清中IgM、ALB、IL-12的含量，其中ALB含量显著升高(P<0.05)。在各免疫指标中，ALB的含量随着石斛粉添加量的增加呈现升高趋势。

表3 各组鸡血清免疫指标测定结果

2.2 鸡免疫器官指数测定结果由表4可见：在赤水乌骨鸡饲料中添加不同比例的石斛粉对脾脏指数、胸腺指数、法氏囊指数均无显著影响(P>0.05)。

表4 各组鸡免疫器官指数测定结果 mg/g

3 结论

饲料中添加0.07%、0.14%、0.21%质量比例的石斛粉可在一定程度上提高赤水乌骨鸡血清中免疫球蛋白M、干扰素γ、白细胞介素12的含量，显著提高血清中白蛋白的含量，对免疫器官无不良影响。

4 讨论

4.1免疫球蛋白可与石斛多糖结合发挥消灭外来病毒的生理作用，增强机体免疫力[4]。石斛的主要成分是多糖、黄酮、氨基酸等，具有抗氧化、降血糖、提高免疫力等功效。测定血清中的抗体效价是评价机体产生免疫力及免疫力强弱的主要方法[5]。血清中免疫球蛋白能与外来抗原发生特异性反应从而保护机体不受伤害，其含量的高低可在一定程度上反映机体抗病力的强弱，是评价机体免疫能力强弱常用的检测指标之一[6]。已有相关研究表明，枸杞多糖、枣多糖、杜仲多糖、人参提取物、黑灵芝多糖等中药提取物可提高动物的免疫机能[7～11]。本研究以中药金钗石斛作为研究对象，结果表明在饲料中添加一定量的金钗石斛粉可在一定程度上提高赤水乌骨鸡血清中免疫球蛋白M、干扰素γ、白细胞介素12的含量，显著提高血清中白蛋白的含量，增强赤水乌骨鸡的免疫能力。

4.2脾脏、胸腺、法氏囊是禽类发挥免疫功能的主要免疫器官，其器官指数可在一定程度上反映禽类的免疫功能，是评价禽类免疫功能的重要指标[12]。相关研究发现，在基础饲粮中添加人参叶多糖饲喂肉仔鸡，可不同程度地提高肉仔鸡的胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数[13]。本研究结果表明，在赤水乌骨鸡日粮中添加不同比例石斛粉对赤水乌骨鸡的脾脏指数、胸腺指数、法氏囊指数均无显著影响，这与张焕新等[14]对小鼠的研究结果相似。