磨立达，罗晓璐，黄宛虹 ，刘泽端 ，苏国生

1.南宁市第四人民医院[广西艾滋病临床治疗中心(南宁)、广西医科大学附属南宁市传染病医院]检验科，广西南宁 530023；2.广西东盟经济技术开发区人民医院（南宁市第十人民医院）检验科，广西南宁 530105

人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV）/艾滋病（acquired immune-deficiency syndrome,AIDS）合并新型隐球菌性脑膜炎（cryptococcal men-ingitis,CM）病情较为严重，且临床治疗难度较大，预后较差，病死率也随之升高，成为危害机体健康的主要疾病[1]。相关报道显示，HIV 感染死因构成比例中，以合并CM 的致死率较高，约占10%～20%，成为HIV/AIDS 死亡的主要因素[2]。随着医疗水平的不断进步发展，抗真菌药物被广泛运用于临床，虽然能够有效控制HIV/AIDS 合并CM 患者的病情，但仍存在部分患者治疗失败的现象[3-4]。因此若能够对HIV/AIDS 合并CM 的发病机制进行深入探究，可为后续治疗方案的选择及预后评估提供前提保障。有研究指出，白介素-10（interleukin-10，IL-10）与HIV/AIDS 合并CM 的发生发展存在一定关联，但相关报道较少[5-6]。因此本文选择2019 年1月—2020 年9 月南宁市第四人民医院收治的40 例单纯 HIV/AIDS 感染患者作为 A 组，40 例 HIV/AIDS合并结核感染者作为B 组，另40 例HIV/AIDS 合并CM 感 染 患 者 作 为 C 组 ，40 例 CM 感 染 患 者 作 为 D组，研究 HIV/AIDS 合并 CM 患者 IL-10 与 T 淋巴细胞亚群、病毒载量及主要生化指标的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择本院收治的40 例单纯HIV/AIDS 感染患者作为A 组，40 例HIV/AIDS 合并结核感染者作为B组，另 40 例 HIV/AIDS 合并 CM 感染患者作为 C 组，40 例 CM 感 染 患 者 作 为 D 组 。C 组 中 男 33 例 、女 7例；年龄19～85 岁，平均（45.85±17.95）岁。B 组中男34 例、女 6 例；年龄 20～76 岁，平均（49.48±14.00）岁。A 组 中 男 30 例 、女 10 例 ；年 龄 20～79 岁 ，平 均（50.68±16.82）岁。D 组中男 29 例、女 11 例；年龄19～81 岁，平均（52.53±15.78）岁。4 组一般资料对比，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经医院伦理委员会审核通过。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准[7]：①患者与家属签订知情书；②符合疾病诊断标准，经过实验室检查确诊；③病历资料完整，且中途未退出。

排除标准：①合并严重感染、肝肾疾病、精神类疾病、严重心脑血管疾病者；②研究前接受抗病毒治疗者；③交流或者听力障碍者。

1.3 方法

（1）检测前标本准备。入院后，在未使用抗病毒或抗真菌药物前抽取血液及脑脊液。

①血液准备：收集空腹外周静脉血（8～10 mL），分装于两支含EDTA-K3 抗凝采血管及一支无抗凝采血管，部分抗凝血液用于血常规和T 淋巴细胞亚群分析，血浆部分于-80℃保存，供病毒载量及细胞因子检测备用，无抗凝血液离心后取血清用于生化指标检测。②脑脊液准备：在腰2 至骶1 的椎间隙穿刺抽取脑脊液（4～6 mL），分装于一支含EDTAK3 抗凝试管及一支无抗凝试管，抗凝脑脊液用于细胞学分类，无抗凝脑脊液用于生化指标检测，剩余部分于-80℃保存，供细胞因子检测备用。

（2）检测方法。①血浆病毒载量(HIV-1RNA)检测：选择扩增仪及配套试剂对HIV-1RNA 进行检测。②血液T 淋巴细胞亚群分类：选择流式细胞计数仪及配套荧光标记单克隆抗体试剂盒测定外周血 CD3+、CD4+、CD8+T 淋巴细胞。③血浆及脑脊液细胞因子检测：按双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验及配套试剂盒，测定血浆及脑脊液的IL-10。④血清及脑脊液生化检测：选择全自动生化仪及配套试剂盒，对脑脊液乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）、脑脊液腺苷脱氨酶（adenosine deaminase, ADA）、脑脊液总蛋白（total protein, TP）、脑脊液葡萄糖（glucose, GIU）、脑脊液氯离子（CL-）、血清LDH、血清ADA、血清TP、血清GIU、血清CL-、血清免疫球蛋白M（immunoglobulin M,IgM）、血清免疫球蛋白G（immunoglobulin G, IgG）、血清免疫球蛋白A（immunoglobulin A, IgA）进行检测。⑤血液及脑脊液白细胞（white blood count, WBC）检测：选择全自动血球仪及配套试剂盒，测定血液WBC 及脑脊液WBC。

1.4 观察指标

比较C 组各指标与其他组的差异，同时分析血液中、脑脊液中IL-10 与其他指标的相关性。

1.5 统计方法

采用SPSS 22.0 统计学软件处理数据，计量资料符合正态分布，以()表示，组间差异比较采用t检验；计数资料以频数和百分率（%）表示，组间差异比较采用χ2检验。指标之间的相关性分析采用Pearson 秩相关分析。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 C 组各指标与其他组比较

C 组血浆及脑脊液IL-10 的含量与其他3 组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。脑脊液中，C 组LDH 含量低于 B 组和 D 组，ADA 含量高于 A 组，TP含量低于 B 组和 D 组，GIU、CL-、WBC 含量低于 A组，差异有统计学意义（P＜0.05）；血液中，C 组WBC含量低于 D 组，CD3+含量低于 A 组，CD4+含量低于A 组和 D 组，CD8+含量低于 A 组，而高于 D 组，GIU含 量 低 于 D 组 ，ADA 含 量 高 于 A 组 和 D 组 ，HIVRNA 含量高于 A 组，IgA 含量高于 A 组和 D 组，IgG低于B 组，而高于D 组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 C 组各指标与其他组比较()

表1 C 组各指标与其他组比较()

注：t1/P1值（A 组与C 组比较）；t2/P2值（B 组与C 组比较）；t3/P3值（D 组与C 组比较）

项目脑脊液IL-10（pg/mL）血浆 IL-10（pg/mL）血液WBC(×109/L)血液CD3+(×106/L)血液CD4+(×106/L)血液CD8+(×106/L)血清Cl-(mmol/L)血清GIU(mmol/lL)血清ADA(U/L)血清TP(g/L)血清LDH(U/L)脑脊液LDH(U/L)脑脊液ADA(U/L)脑脊液TP(mg/L)脑脊液GIU(mmol/L)脑脊液Cl-(mmol/l)脑脊液WBC(×106/L)血浆HIV-RNA(lgcopies/mL)血清IgA(mg/L)血清IgM(mg/L)血清IgG(mg/L)D 组（n=40）24.62±12.41 77.94±74.87 10.93±8.51 836.32±498.66 438.15±264.86 350.05±229.02 94.98±14.84 6.49±1.38 12.47±4.69 66.61±8.79 220.37±89.73 63.14±54.91 3.07±2.35 1320.22±978.11 1.76±1.18 116.53±6.91 190.05±181.82 t3/P3值0.953/0.343 0.697/0.788 3.718/0.001 1.901/0.061 8.360/0.001 2.266/0.026 1.501/0.138 3.865/0.001 4.714/0.001 1.790/0.077 1.932/0.057 3.439/0.001 1.728/0.088 4.115/0.001 1.601/0.113 1.751/0.084 2.391/0.019 6.876/0.001 1.972/0.052 4.019/0.001 A 组（n=40）20.39±12.15 86.05±84.71 6.34±2.58 1210.22±824.13 330.55±180.08 835.42±779.86 99.95±16.18 5.59±1.10 18.79±8.79 72.01±7.98 221.51±100.39 26.35±17.38 1.28±1.13 504.53±258.51 3.18±0.48 124.70±2.75 15.37±22.15 3.97±1.55 3.12±1.75 1.31±1.06 17.74±6.03 B 组（n=40）20.91±14.42 85.42±83.04 6.82±4.74 526.09±366.98 89.47±45.01 411.22±284.95 97.75±5.60 5.93±1.35 24.73±11.19 70.00±10.45 280.38±113.83 62.44±55.59 3.27±3.22 1113.35±1013.18 2.68±1.42 117.95±7.49 71.15±66.36 5.61±1.43 4.41±2.53 1.45±0.88 21.48±6.28 C 组（n=40）21.65±15.30 90.24±83.18 5.69±2.65 622.92±505.36 82.12±48.91 511.17±387.09 98.82±6.46 5.40±1.13 24.97±16.10 70.68±11.38 285.53±193.55 30.41±24.65 2.29±1.62 629.40±413.27 2.15±0.99 119.13±6.36 112.45±95.18 5.73±1.59 4.89±2.19 1.82±1.73 17.84±5.74 2.32±0.89 1.25±0.59 13.35±4.12 t1/P1值0.408/0.684 0.223/0.824 1.112/0.270 3.842/0.001 8.420/0.001 2.355/0.021 0.410/0.683 0.224/0.448 2.131/0.036 0.605/0.547 1.857/0.067 0.844/0.401 3.234/0.002 1.620/0.109 5.921/0.001 5.084/0.001 6.283/0.001 5.013/0.001 3.993/0.001 1.590/0.116 0.076/0.940 t2/P2值0.223/0.824 0.259/0.796 1.316/0.192 0.981/0.330 0.699/0.486 1.315/0.192 0.792/0.431 1.904/0.061 0.077/0.938 0.278/0.781 0.145/0.885 3.331/0.001 1.720/0.089 2.983/0.004 1.936/0.056 0.760/0.450 2.251/0.027 0.355/0.724 0.907/0.367 1.206/0.232 2.706/0.008

2.2 血液中IL-10 与其他指标相关性分析

血液中，对于 C、B、A、D 组，IL-10 与 WBC、CD3+、CD4+、CD8+、Cl-、GIU、ADA、TP、LDH、HIVRNA、IgA、IgM、IgG 均无相关性（P＞0.05）。见表2。

表2 血液中IL-10 与其他指标的相关性分析

2.3 脑脊液中IL-10 与其他指标相关性分析

脑脊液中，C 组 IL-10 与 WBC、ADA、TP 呈正相关（P＜0.05）；B 组 IL-10 与 LDH、ADA 呈正相关（P＜0.05）。见表3。

表3 脑脊液中IL-10 与其他指标的相关性分析

3 讨论

AIDS 通常是由HIV 感染引起，使患者免疫系统出现不同程度的功能缺陷，成为危害性较高的传染性疾病。而CM 的发生是由新型隐球菌感染患者脑膜或脑实质造成，其早期症状并不典型，极易被忽视，随着疾病持续发展后，头痛不断加重，甚至增加精神异常、躁动不安、意识障碍等现象[8-9]。一旦与HIV/AIDS 合并后，加重病情，直接危及患者生命安全。因此临床迫切需要对HIV/AIDS 合并CM 的发生机制进行探究，选择更为科学可靠的检测指标以及理论依据，为早发现、早诊断、早治疗提供有利依据。

IL-10 基因前体中包含178 个氨基酸残基，一旦产生后可清除18 个氨基酸信号肽，因此成熟后的IL-10 中包含 160 个氨基酸残基[10]。另外 IL-10 是从单核细胞以及Th2 细胞中产生，主要出现在免疫反应相对晚期，尤其是细胞激活以及抗炎细胞因子产生后。且IL-10 具备一定免疫刺激以及免疫抑制功效，可对细胞生长及分化进行调控，可发挥出抗炎、免疫抑制的作用。

在吴亮等[11]的研究中，其对艾滋病伴新型隐球菌脑膜炎患者开展实验室检查，结果发现患者脑脊液 Cl-水平为（116.55±7.65）mmol/L，相较于单纯艾滋病患者水平明显下降。而在本研究中，脑脊液中，C 组 LDH 低于 B 组和 D 组，ADA 高于 A 组，TP 低于 B 组和 D 组，GIU、WBC 低于 A 组(P＜0.05)，其中 C组的 CL-水平为（119.13±6.36）mmol/L，明显低于 A组 的（124.70±2.75）mmol/L(P＜0.05)；血 液 中，C 组WBC 低于 D 组，CD3+低于 A 组，CD4+低于 A 组和 D组，CD8+低于 A 组，而高于 D 组，GIU 低于 D 组，ADA高于 A 组和 D 组，HIV-RNA 高于 A 组，IgA 高于 A 组和 D 组，IgG 低于 B 组，而高于 D 组(P＜0.05)。经分析发现，IL-10 作为成熟/未成熟 T 细胞、胸腺中 T 细胞发育的辅助生长因子，从单核细胞上看，其可对抗原特异性CD4+T 细胞增殖、Th1 型细胞因子进行抑制。而内源性IL-10 可影响mRNA 表达，并阻碍其自身产物的表达，进而防止抗原递呈能力。ADA 作为与机体细胞免疫活性相关的核酸代谢酶，可对腺嘌呤核苷进行催化，使其成为黄嘌呤核苷。一旦发生CM 后，患者机体的细胞免疫受到刺激，导致淋巴细胞增加，细胞中ADA 进入脑脊液内，因此其在CM患者脑脊液中呈现升高趋势，可成为诊断CM 的主要指标[12]。TP 是由球蛋白与白蛋白构成，其水平可展现肝合成功能及肾病变引发的蛋白质丢失现象，成为了解机体营养状况的主要指标[13]。而脑膜炎患者通常伴有中枢神经病变，正常情况下，TP 在脑脊液内含量较少，但在中枢神经病变时，导致分子量较低或者含量较大的白蛋白进入血脑屏障，从而提升TP 的表达水平[14]。LDH 作为葡萄糖无氧酵解、糖异生的关键酶，广泛存在于机体各类组织细胞上，正常情况难以穿过血脑屏障，因此在脑脊液中浓度较低，仅占血清的10%左右[15]。相关研究表示，IL-10 水平不断升高后，极易破坏患者血脑屏障，导致大量WBC 经过受损的血脑屏障进入脑脊液，进而促进脑脊液中WBC 水平升高[16]。IL-10 可避免细胞毒性T 淋巴细胞产生IFN-γ，对CD40 抗体进行刺激，促进B 细胞迅速生长、分化，并改善体液免疫高反应状态，分泌较多IgM、IgG、IgA，因此IL-10 与 IgM、IgG、IgA 呈正相关[17]。研究显示，HIV 感染中通常侵犯机体CD4+T 细胞，从而导致其数量明显减低，并造成免疫系统失去抵抗能力，最终引发各类细菌以及病毒的感染，甚至增加肿瘤发生的风险。

另外HIV/AIDS 与糖尿病存在一定关系，可能是因为患者接受高效抗病毒治疗期间，部分药物可能导致血糖水平升高，如蛋白酶抑制剂，非糖尿病患者服用后可导致血糖升高，甚至出现2 型糖尿病相似的症状，因此HIV/AIDS 患者的空腹血糖较高，糖耐量减低，胰岛负荷加重。而脑脊液的含糖量较血糖降低，完全依靠血糖浓度以及脉络膜的渗透性以及糖的分解速度等，因此血糖水平变化，可直接导致脑脊液中含糖量明显减少[18]。而结核感染与GIU 也存在一定关系，主要是因为高血糖状态或者组织内葡萄糖浓度较高，可加重蛋白质、糖以及脂肪代谢的紊乱程度，最终引发的营养不良环境极易促进结核杆菌生长，而高胆固醇也可刺激结核菌生长[19]。若长时间GIU 水平升高，不仅降低患者的补体与抗体，同时可降低细胞免疫功能，使细胞趋化性、吞噬能力、杀菌能力改变，进一步增加结核感染的风险，因此结核感染患者的GIU 水平出现异常[20]。另外CM 患者脑脊液中大量白细胞消耗糖，从而提升致病菌对糖的分解以及细菌毒素致炎性代谢产物，抑制细胞膜葡萄糖的转运能力，最终使脑脊液内糖含量降低[21]。研究发现IL-10 在尿毒症、肾小球肾炎、系统性狼疮肾炎、类风湿性关节炎上存在重要意义，而HIV/AIDS 作为获得性免疫缺陷综合征，IL-10 浓度可能与HIV/AIDS 进展存在一定相关性，其可防止单核细胞活性、巨噬细胞活性、T 淋巴细胞增殖、NK 细胞活性，并阻碍HIV 在机体中进行复制，因此IL-10 可成为HIV/AIDS 合并CM 诊断评估中的重要标志物，为后续治疗方案的选择及预后判断提供参考依据[22]。

综上所述，IL-10 在 HIV/AIDS 合并 CM 的发生与发展中存在重要作用，其与患者其他检测指标具有密切相关性，可成为患者诊断、疗效及预后评估的主要指标，值得推广。