赵和钦豪，夏蒙，周杰，喻鑫玲，李广平，邓奕，罗振华，李胜明，王慧岚

湖南省血吸虫病防治所，WHO湖区血吸虫病防治合作中心，血吸虫病免疫与传播控制湖南省重点实验室，国家临床重点专科，湖南 岳阳 414000

湖南省曾是全国血吸虫病重度流行区之一，随着血吸虫病消除进程的推进，居民血吸虫感染率和感染度逐渐降低，目前已达历史最低水平[1-2]。为适应新时期、新形势血吸虫病防控工作需求，血吸虫病监测方案和行业标准也不断更新和出台，对质控体系建设和实验室检测技能的要求也越来越高[3-4]。及时、准确地发现和诊断血吸虫病，已成为精准防控血吸虫病的关键因素[5-7]。

我国从2009年开始建立“国家级-省级-县级”三级血吸虫病诊断网络平台。湖南省通过积极开展“血防技术人员专业技能竞赛”“省级血吸虫病诊断网络实验室准入资质授牌”等监测能力建设措施[8]，稳步推进血防“四大工程”[9]，网络实验室实验条件、人员素质和检测能力等方面有了显著提升。2021年湖南省血吸虫病国家级监测点数量由41 个增加到97 个，覆盖了全部41 个血吸虫病流行县的57 个基层血防机构，其设置的网络实验室均具备县级监测职能与资质，承担监测点血吸虫病诊断项目的检测工作，至此，湖南省已初步建成血吸虫病监测诊断网络实验室体系，并有效运行[10]。根据《全国血吸虫病监测方案（2020 年版）》和《湖南省2021 年血吸虫病防治工作计划》的要求，湖南省于2021 年9 月启动了血吸虫病监测点实验室检测能力评估工作，旨在为完善全省血吸虫病监测体系提供参考。

1 内容与方法

1.1 调查点的确定 根据全省血吸虫病疫情监测等级和地区分布比例[2-3]，在湖南省41个血吸虫病流行县的57 个监测点实验室中分层抽取12 个诊断网络实验室为调查对象，其中Ⅰ类监测县诊断网络实验室必检，Ⅱ、Ⅲ类监测县各抽取20%。考核单位及对应的监测等级分别为：常德市安乡县黄山头血防站（Ⅱ类）、澧县澧阳血防站（Ⅰ类）、临澧县新安镇血防院（Ⅱ类）、桃源县盘塘镇中心卫生院（Ⅱ类）；益阳市南县武圣宫镇血防站（Ⅱ类）、大通湖区北洲子镇卫生院（Ⅱ类）；岳阳市汨罗市白塘镇磊石血防站（Ⅱ类）、岳阳县麻塘镇血防站（Ⅱ类）、临湘市黄盖湖镇血防站（Ⅱ类）、南湖新区管委会血防站（Ⅲ类）；长沙市岳麓区公共卫生中心（Ⅱ类）；株洲市石峰区公共卫生中心（Ⅲ类）。

1.2 质控品制备 质控品包含血清、粪样加藤厚涂片和虫卵悬液三类。血清阳性和阴性质控品分别来源于湖南省血吸虫病防治所附属湘岳医院血吸虫病重点专科保存的慢性血吸虫病患者和正常人群的血清，每份质控样品50 μL。虫卵悬液来源于人工感染血吸虫7 周的家兔肝，虫卵收集后保存于1.2% NaCl 溶液中作阳性质控品，部分虫卵悬液煮沸灭活5 min 后用作阴性质控品，每份2 mL。粪样加藤厚涂片阳性质控品采用正常人新鲜粪便加入兔肝中收集的虫卵，搅拌混匀制作而成，虫卵计数为3~18 个/片；阴性质控品不加虫卵。三类质控品均由血吸虫病免疫与传播控制湖南省重点实验室2名专业技术人员制作，再由2 名实验室检验技术人员对上述质控品进行3次重复检测，并标定结果。

1.3 检测能力评价

1.3.1 间接红细胞凝集试验（IHA） 待测样本由5份血清组成，包含1 个强阳性、1 个弱阳性和3 个阴性血清样本。血清样本按1∶5、1∶10、1∶20、1∶40 四个稀释度进行检测，判断阴性、阳性，并记录效价。检测用V 孔玻璃板与IHA 检测试剂由湖南省血吸虫病防治所统一提供。试剂盒由安徽安吉医药科技有限公司生产（批号：20200303）。

1.3.2 改良加藤厚涂片法 待测样本包含5张加藤厚涂片，有阴性和阳性，每张阳性片血吸虫虫卵数量在30 个以内，无其他蠕虫虫卵；镜检结果要求定性并定量（虫卵计数）。

1.3.3 尼龙绢集卵孵化法 待测样本包含1个阳性质控品和2个阴性质控品。样本4 ℃保存，并于72 h内完成检测，结果只定性，不定量。

1.4 评价指标与统计分析

1.4.1 评价指标 将县级实验室检测结果与湖南省血吸虫病免疫与传播控制重点实验室标定结果进行比对。定性鉴定结果相同为符合，反之为不符合，其评价指标包括阳性符合率、阴性符合率、总符合率[11]。计算公式：①阳性符合率=A/（A+C）×100%；②阴性符合率=D/（B+D）×100%；③总符合率=（A+D）/（A+B+C+D）×100%，其中A 为真阳性数，B 为假阳性数，C 为假阴性数，D 为真阴性数。定量

鉴定（效价和虫卵计数）结果用合格率计算，IHA 法抗体效价检测与标定结果一致，改良加藤厚涂片法血吸虫卵镜检计数与标定结果的误差在30%以内，判为合格，合格率=合格样本量/总样本量×100%。

1.4.2 结果评分 总分10 分，9 分及以上为优秀，8分及以上为良好，6 分及以上为合格，6 分以下为不合格。量化分值为：间接红细胞凝集试验考核总分3 分，定性错误每个扣0.6 分，效价每误差一个滴度扣0.1 分/样本；改良加藤厚涂片法考核总分4 分，定性错误每个扣0.8分，虫卵计数每偏离标定结果1倍扣除0.1 分/样本；尼龙绢集卵孵化法考核总分3 分，定性错误每个扣1分。

1.4.3 统计分析 采用Excel 2013 建立数据库，并进行统计分析。

2 结 果

2.1 间接红细胞凝集试验 12个实验室中11个实验室定性检测结果完全正确，仅桃源县盘塘镇中心卫生院漏检（将2 个阳性质控品错判为阴性）。IHA检测阳性符合率为91.67%（22/24），阴性符合率为100.00%（36/36），总符合率为96.67%（58/60）。

6 个实验室效价检测与标定结果完全符合，其余6 个实验室效价检测出现错误，其中安乡县黄山头血防站、澧县澧阳血防站和岳麓区公共卫生中心血清滴度标记偏高；临澧县新安镇血防院血清滴度标记偏低；桃源县盘塘镇中心卫生院和大通湖区北洲子镇卫生院的检测结果未填写效价（按不符合计算）。间接红细胞凝集试验阳性质控品效价检测总合格率为54.17%（13/24）。见表1。

2.2 改良加藤厚涂片法 12 个检测实验室中有8个实验室定性检测结果完全正确，4 个实验室出现错误，其中临湘市黄盖湖镇血防站和南湖新区管委会血防站各有1 张阳性加藤片误判为阴性（假阴性），大通湖区北洲子镇卫生院、南湖新区管委会血防站和石峰区公共卫生中心共有8张阴性加藤片误判为阳性（假阳性）。改良加藤厚涂片法鉴定血吸虫卵阳性符合率为90.00%（18/20），阴性符合率为80.00%（32/40），总符合率为83.33%（50/60）。

12 个实验室共检测20 张阳性加藤片，其中6 张阳性加藤片血吸虫卵计数在允许误差范围内，改良加藤厚涂片法血吸虫卵计数合格率为30.00%。见表1。

2.3 尼龙绢集卵孵化法 12 个实验室中有9 个实验室定性检测结果完全正确，其余3个实验室各有1个质控品检测错误，其中大通湖区北洲子镇卫生院和石峰区公共卫生中心将阳性质控品误判为阴性（假阴性），汨罗市白塘镇磊石血防站将阴性质控品误判为阳性（假阳性）。尼龙绢集卵孵化法阳性符合率为83.33%（10/12），阴性符合率为95.63%（23/24），总符合率为91.67%（33/36）。见表1。

2.4 结果量化得分 根据质控考核结果量化标准评分，12 个被抽样实验室中有7 个实验室得分在9以上，考核结果为“优秀”，优秀率58.33%；2 个实验室考核结果为“良好”；3 个实验室考核结果为“合格”。见表1。

表1 湖南省血吸虫病监测点实验室质控考核结果

3 讨 论

2013 年以来，监测点网络实验室室间比对与质控考核已成为湖南省血吸虫病诊断网络平台运行和质量控制的常规工作。通过常态化开展监测点网络实验室质控考核能及时发现问题，提升湖南省监测点实验室监测能力。2021 年度的评估考核采用血清、加藤厚涂片和虫卵悬液三类质控品，检验了湖南省5 个流行市、12个流行县的12个监测点的实验室检测水平。各实验室全部在1 周内完成检测，结果反馈率100%。间接红细胞凝集试验、改良加藤片厚涂片法和尼龙绢集卵孵化法的检测结果总符合率分别为96.67%、83.33%和91.67%，达到了质控要求，表明基层血吸虫病监测点实验室具备开展免疫学、病原学诊断血吸虫病的能力。

本次抽样考核发现，湖南省血吸虫病监测点实验室检测能力基本满足监测工作需要，但对于定量、精准化的检测项目，实验室检测水平有待提高，如间接红细胞凝集试验的阳性质控品效价检测合格率仅54.17%，加藤片虫卵计数合格率仅30.00%。此外，部分实验室还存在报告格式不规范、阳性质控品忘填效价、质控品保存和运输不当导致的假阴性等问题。通过结果量化得分比较发现，得分与所在地区疫情水平有一定的关系。7 个检测能力评估为优秀的实验室中，6 个来自常德、岳阳、益阳三个“老疫区”，疫情监测等级全部为Ⅰ类（传播控制县）和Ⅱ类（传播阻断的有螺县）；而疫情监测等级为Ⅲ类（传播阻断或消除的无螺县）的石峰区和南湖新区得分分别位于第10 名和12 名。血吸虫病低流行区的监测点实验室诊断能力相对较低，这可能与日常监测工作中较少接触阳性样本有关。

目前，全国血吸虫病迈入消除攻坚阶段。为适应新时期、新形势下血吸虫病防控工作的需求，在大力发展新技术、推广核酸检测技术的同时，仍不能忽视血清学和病原学等传统诊断技术的能力提升[12]。建议各级实验室继续维持和提高病原学和血清学检测能力，对于已达到传播阻断的无螺地区和达到消除标准的地区，可通过开展培训和组织地区间学习交流等方式，提高血吸虫病诊断水平。此外，应重视和加强实验室质量控制，以维持和巩固敏感有效的监测体系。