■邹强强 肖爱波 许云贺 王铁良，3 李德生，3*

（1.锦州医科大学畜牧兽医学院，辽宁 锦州 121001；2.辽宁省农业发展服务中心，辽宁 沈阳 110003；3.锦州中科基因检测服务有限公司，辽宁 锦州 121001）

随着饲料的全面“禁抗”，在整个家禽养殖业对于益生菌、益生元和酸化剂等抗生素替代品的应用日益普及[1]。为了保持健康和限制食源性病原体，这些替代品是可被接受的饲料添加剂[2]。益生菌被定义为非致病性活微生物，当摄入足够量时，可以给个体带来健康益处[3]。研究最多的益生菌种类为乳杆菌、双歧杆菌以及酵母，特别是酿酒酵母是引入饲料配方中最重要的益生菌培养物[4-5]。有研究表明，使用酿酒酵母饲喂肉鸡可以增加消化道乳酸菌的数量，使消化道环境呈酸性，限制致病菌的发育[6]。

干酪乳杆菌作为乳杆菌属的一种益生菌，由于其在工业和商业中的应用潜力，是研究最多的菌种之一[7]。叶青等[8]通过平板法和高效液相色谱法，从自然发酵酸浆中分离筛选出干酪乳杆菌YQ336。对于干酪乳杆菌和酿酒酵母1∶1混合的复合益生菌制剂添加至白羽肉鸡饲粮中对肉鸡的影响尚未见报道。因此，本试验通过在叠层笼养白羽肉鸡饲粮中添加不同水平的复合益生菌制剂，研究其对肉鸡生长性能、血液指标以及粪便中有害气体排放量和菌群数量的影响，以期为复合益生菌制剂在叠层笼养白羽肉鸡养殖生产中的应用提供科学依据和理论基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

复合益生菌制剂主要为干酪乳杆菌YQ336 和酿酒酵母，按1∶1比例混合制成，由锦州医科大学畜牧兽医学院提供。

1.2 试验动物与设计

试验选取体重相近、健康的1日龄白羽肉鸡480只（公母各半），采用完全随机试验设计，随机分为4个处理组，每组6个重复，每个重复20只，分笼饲养。各处理组分别在基础日粮中添加0、0.1%、0.2%和0.4%水平的复合益生菌制剂，试验期42 d。

1.3 饲养管理及基础饲粮

试验鸡在密闭控温鸡舍的3 层小群体肉鸡专用笼饲养，每笼有效面积为1.25 m×0.8 m，自由采食和饮水，每天观察试验鸡健康状态。试验选择饲养位置为鸡舍中区中层。试验鸡免疫程序：7 日龄分别进行新城疫疫苗和禽流感疫苗免疫，21日龄新城疫疫苗饮水免疫。试验鸡日常管理按白羽肉鸡饲养规程进行。饲粮参照NRC（1994）[9]仔鸡营养需要进行配制，基础饲粮组成及营养水平见表1。

表1 基础日粮组成及营养水平

1.4 测定指标及方法

1.4.1 生长性能指标测定

试验期内每天以重复为单位记录试验鸡采食量，分别于试验鸡1、21日龄和42日龄时早上对试验鸡进行空腹称重，计算平均日增重（ADG），平均日采食量（ADFI）和料重比（F/G），记录鸡只剩余数量，计算成活率。

ADG（g/d）=（试验末重-试验初始重）/试验天数ADFI（g/d）=（试验期内供料量-试验期内剩料量）/试验天数

F/G=ADFI/ADG

成活率（%）=活鸡数/总数×100

1.4.2 血清抗体和血液生化指标测定

在42日龄试验结束时，每个重复选取接近该重复平均体重的试验鸡进行翅静脉采血4 mL以制备血清。将采集的血液样品室温下静置30 min，1 200 r/min离心15 min 后取上层血清，置于-80 ℃冰柜中冷冻留存，用于测定血清抗体和血液生化指标。

血清中新城疫和禽流感H9 抗体检测参照GB/T 16550—2020《新城疫诊断技术》[10]、GB/T 18936—2020《高致病性禽流感诊断技术》[11]中规定的血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验技术。

血液生化指标采用全自动生化分析仪测定血清样品中总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLOB）、葡萄糖（GLU）、尿素氮（BUN）、碱性磷酸酶（ALP）和丙氨酸氨基转移酶（ALT）含量。

1.4.3 粪便中有害气体测定及方法

在42日龄试验结束时，每个重复取500 g鸡粪便样品（粪便和尿液混合物），-21 ℃冰柜中冷冻留存，用于测定粪便有害气体氨气（NH3）、硫化氢（H2S）含量。

试验时将粪便解冻后混匀，然后将500 g 粪便装于2 L 密封塑料盒中，塑料盒侧面有个小孔，用胶带密封。在室温下（25 ℃）发酵24 h，从粪便样品盒侧面小孔处2 cm 采集100 mL空气后，再次将小孔用胶带密封发酵，每个重复进行3 次NH3和H2S 排放量测量。在测量之前，需人工摇晃样品30 s，以破坏粪便样品表面的结皮，并使样品混匀。NH3和H2S 的浓度在5.00～100.00 mg/m3范围内测量[12]。

1.4.4 粪便中菌群数量测定及方法在42日龄试验结束时，每个重复取1 g鸡粪便样品，然后将其放在冰块上运送到实验室。用9 mL的1%蛋白胨肉汤稀释来自每个重复的1 g粪便样品，进行混匀。在生物安全柜中，通过麦康凯琼脂平板、MRS琼脂平板和BS琼脂平板分别测定粪便样品中大肠杆菌、乳酸菌和沙门氏菌的活菌数（在10 g/L蛋白胨溶液中）[12]。

1.5 数据统计与分析

数据采用Excel进行整理，采用SPSS Statistics 23.0程序中one-way ANOVA LSD 法进行多重比较显著性差异，并利用Contrast中的线性和二次项进行分析。结果以“平均值±标准误”表示，P＜0.05表示差异显著，P＜0.01表示差异极显著。

2 结果与分析

2.1 复合益生菌制剂对叠层笼养白羽肉鸡生长性能的影响（见表2）

表2 复合益生菌制剂对叠层笼养白羽肉鸡生长性能的影响

由表2 可知，饲粮中添加复合益生菌制剂，对1～21日龄生长性能无显著性影响（P＞0.05），对22～42日龄F/G、1～42 日龄ADFI、F/G 以及成活率无显著性影响（P＞0.05）；对22～42日龄的ADG和ADFI具有正线性效应（线性，P＜0.05），对1～42日龄的ADG具有正线性效应（P＜0.05）。并且与0 添加量相比，当复合益生菌制剂添加量为0.4%水平时22～42日龄ADG和ADFI显著增加（P＜0.05），1～42日龄ADG显著增加（P＜0.05）。

2.2 复合益生菌制剂对叠层笼养白羽肉鸡血液指标的影响（见表3、表4）

表3 复合益生菌制剂对叠层笼养白羽肉鸡血清抗体的影响（lb）

表4 复合益生菌制剂对叠层笼养白羽肉鸡血清生化指标的影响

由表3 可知，饲粮中添加复合益生菌制剂，对血清中新城疫病毒抗体效价和H9亚型禽流感病毒抗体效价具有正线性效应（P＜0.05）。并且与0 添加量相比，当复合益生菌制剂添加量为0.4%水平时血清中新城疫病毒抗体效价显著增加（P＜0.05）。饲粮添加复合益生菌制剂，对血清中H9 亚型禽流感病毒抗体效价无显著性影响（P＞0.05）。

由表4 可知，饲粮中添加复合益生菌制剂，对血清中ALB和TP含量具有正线性和正二次效应（线性，P＜0.05；二次型，P＜0.05），对GLOB 呈正线性影响（P＜0.05），对GLU 含量具有负线性影响（P＜0.05）。并且与0添加量相比，当复合益生菌制剂添加量为0.2%时血清中ALB 和TP 含量显著增加（P＜0.05）；当添加量为0.4%时血清中ALB 含量显著增加（P＜0.05），TP 含量极显著增加（P＜0.01），GLU 含量显著下降（P＜0.05）。饲粮中添加复合益生菌制剂，对血清中ALT、ALP和BUN含量无显著性影响（P＞0.05）。

2.3 复合益生菌制剂对叠层笼养白羽肉鸡粪便有害气体排放量的影响（见表5、表6）

由表5和表6可知，饲粮中添加复合益生菌制剂，对粪便中NH3和H2S排放量具有负线性和负二次曲线效应（线性，P＜0.01；二次型，P＜0.01）。并且与0 添加量相比，当复合益生菌制剂添加量为0.2%和0.4%时，极显著降低了粪便发酵6、12 h 和24 h 后NH3和H2S排放量（P＜0.01）；当添加量为0.1%时，极显著降低了粪便发酵12 h和24 h后NH3和H2S排放量（P＜0.01）。

表5 复合益生菌制剂对叠层笼养白羽肉鸡粪便中H2S排放量的影响（mg/m3）

表6 复合益生菌制剂对叠层笼养白羽肉鸡粪便中NH3的影响（mg/m3）

2.4 复合益生菌制剂对叠层笼养白羽肉鸡粪便菌群数量的影响（见表7）

由表7可知，饲粮中添加复合益生菌制剂，对粪便中大肠杆菌和沙门氏菌含量具有负线性和负二次曲线效应（线性，P＜0.01；二次型，P＜0.01），对乳酸菌含量具有正线性和正二次效应（线性，P＜0.01；二次型，P＜0.05）。并且与0添加量相比，当复合益生菌制剂添加量为0.1%时，粪便中大肠杆菌、沙门氏菌和乳酸菌含量无显著性差异（P＞0.05）；当添加量为0.2%时，粪便中大肠杆菌数显著降低（P＜0.05）、沙门氏菌数极显著降低（P＜0.01）；当添加量为0.4%时，粪便中大肠杆菌和沙门氏菌数极显著下降（P＜0.01），乳酸菌数显著增高（P＜0.05）。

表7 复合益生菌制剂对叠层笼养白羽肉鸡粪便菌群数量的影响（lg CFU/g）

3 讨论

3.1 复合益生菌制剂对叠层笼养白羽肉鸡生长性能的影响

ADG、ADFI 和F/G 作为衡量生长性能的重要指标，直接影响着规模化养殖场的经济效益。本试验研究发现，由干酪乳杆菌YQ336和酿酒酵母制成的复合益生菌制剂有效提高了叠层笼养白羽肉鸡22～42日龄ADG、ADFI 和1～42 日龄ADG。张若男[13]在肉鸡饲粮中添加干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌菌粉，研究结果表明，三种益生菌混合比例为2∶1∶1时，可以提高生长后期的养分消化吸收。Mangisah 等[14]报道，将干酪乳杆菌和大蒜粉添加至肉鸡饲粮中可以提高肉鸡营养物质消化率。张彩凤[15]研究结果表明，在肉仔鸡饲粮中添加乳酸菌和酵母菌复合菌剂可以提高生长性能，降低盲肠大肠杆菌数量。本试验结果与上述研究结果相一致，并且本试验发现随着复合益生菌制剂添加量的增加体重随之增加，基于本试验结果，对于当复合益生菌制剂添加量大于0.4%时，体重参数是否还会继续增加尚不可知，有待进一步研究。

3.2 复合益生菌制剂对叠层笼养白羽肉鸡血液指标的影响

抗体指由抗原刺激产生的具有保护作用的免疫球蛋白，通过对疫苗免疫后的抗体效价检测来反映疫苗的免疫效果[16]。总蛋白及其组分水平的评估为解释脱水、感染、免疫疾病和炎症反应的发生提供了必要的信息，血清蛋白与体重、蛋白质合成呈正相关[17]。本试验研究发现，由干酪乳杆菌YQ336和酿酒酵母制成的复合益生菌制剂显著提高了42日龄白羽肉鸡血清中新城疫抗体效价、血清中ALB和TP含量，当添加量为0.4%水平时血清中GLU含量显著降低，血清中GLOB含量有所提高但不显著。邵洪伟[18]研究发现，在肉鸡饲粮中添加乳酸菌可显著提高42日龄血清中新城疫抗体效价。周凌博等[19]报道，在基础日粮中添加1.5%乳酸菌制剂可以提高肉鸡血清中新城疫抗体效价。有学者研究结果表明，乳酸菌和酵母菌复合菌剂可以显著提高肉鸡血清中TP含量[15]。刘淑娇等[20]研究发现，由乳酸菌、枯草芽孢杆菌和酵母菌配制的复合益生菌制剂可以显著提高肉鸡42日龄TP水平，降低血糖水平。本试验也得到了与上述研究者相类似的结果。

3.3 复合益生菌制剂对叠层笼养白羽肉鸡粪便中有害气体排放量和菌群数量的影响

NH3、H2S、甲烷（CH4）和二氧化碳（CO2）被认为是家禽体内最危险的气体[21]。本试验研究发现，由干酪乳杆菌YQ336和酿酒酵母制成的复合益生菌制剂极显著降低了粪便中NH3和H2S排放量，并且极显著降低了粪便中大肠杆菌和沙门氏菌数量，显著提高了乳酸菌数量。蒙琦等[22]报道，在饲料中添加一定比例复合微生物能够有效降低肉鸡鸡舍NH3和H2S浓度。Smialek等[23]报道，乳酸菌和酵母基益生菌能有效降低感染肠炎沙门氏菌肉鸡消化道内沙门氏菌含量。王秋珍等[24]研究发现，饲喂干酪乳杆菌可以减轻雏鸡空肠黏膜的损害，提高肠道免疫功能。蒋磊等[25]研究结果表明，不同量的乳酸菌制剂均可以提高肉鸡盲肠乳酸杆菌和双歧杆菌数量，降低大肠杆菌和沙门氏菌数量。Sampath等[26]报道，在肉鸡饲粮中添加酿酒酵母可以降低有害气体排放，大肠杆菌和沙门氏菌数量呈线性下降趋势，乳酸菌数量显著增加。肠道微生物生态系统中有益微生物的增加最终会减少有害微生物群，从而为宿主带来健康的肠道状态。大肠杆菌与假单胞菌、柠檬酸杆菌、气单胞菌和沙门氏菌一起被鉴定为最有希望产生H2S的细菌[27]。Ferket[28]认为NH3的排放量与养分利用、肠道微生物生态系统有关。综上所述，当肠道中大肠杆菌和沙门氏菌数量减少时，可能会导致粪便中大肠杆菌和沙门氏菌数量随之减少，从而降低粪便中NH3和H2S排放量。本试验研究结果正好验证这一观点。

4 结论

在叠层笼养白羽肉鸡饲粮中添加由干酪乳杆菌YQ336 和酿酒酵母制成的复合益生菌制剂可以有效提高白羽肉鸡生长性能，提高疫苗免疫后新城疫抗体水平，降低粪便中有害气体排放量，降低粪便中大肠杆菌和沙门氏菌数量，提高乳酸菌数量。并且在本试验条件下推荐使用量为0.4%。