张 洋，黄 芳，韦雪飞，羊超菠

（磐安县食品药品检验检测中心，浙江金华 322300）

随着生活水平的不断提高，人们对健康长寿和高品质生活的追求进一步提升，养生保健日益受到人们的青睐，而以灵芝孢子粉为代表的保健食品，在国内悄然兴起，因富含氨基酸类、多糖类、有机酸类、三萜类及微量元素等成分而具有诸多有益的药理活性，受到人们的广泛关注[1-2]。分析灵芝孢子粉的生产流程发现，影响其质量安全因素较多。例如，生长环境、加工过程可能会引起重金属的富集；包装密封性差引起水分超标，使孢子粉霉变、微生物超标等，若被人们服用，会对其健康造成适得其反的影响。基于这一考虑，本文根据现有标准[3-4]，从水分、重金属、微生物3 方面进行检测与评估，以期为灵芝孢子粉后续研发、生产提供技术支持。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂和仪器

从市场共收集22 批次灵芝孢子粉（编号1 ～22）。

培养基，北京陆桥；硝酸（GR）；超纯水；25种元素混标（BEIJING-4）；汞标准溶液（国家标准样品）；氯化钠（AR）。

电热鼓风干燥箱，上海市森信实验仪器公司；微波消解仪MARS6，美国CEM 公司；电热板；电感耦合等离子体质谱仪ICAPRQ，赛默飞世尔；电子天平，梅特勒-托利多公司；霉菌培养箱；生化培养箱；高纯氩气及氦气。

1.2 实验方法

1.2.1 水分的测定方法

依据《食品安全国家标准 食品中水分的测定》（GB 5009.3—2016）中的直接干燥法测定。称取2.0 g试样（精确至0.000 1 g）平铺于干燥至恒重的铝制扁形称量瓶中，试样厚度不超过5 mm，置于104 ℃干燥箱中，瓶盖斜支于瓶边，干燥4 h 后，盖好取出，放入干燥器内冷却0.5 h 后称量。然后再放入104 ℃干燥箱中干燥1 h 左右，取出，放入干燥器内冷却0.5 h 后再称量。重复以上操作至前后两次质量差不超过2 mg，根据减失的重量，计算试样中的含水量（%）。

1.2.2 重金属的含量测定方法

依据《食品安全国家标准 食品中多元素的测定》（GB 5009.268—2016）中的第一法 电感耦合等离子体质谱法测定。

（1）样品预处理。①在采样和制备过程中，所有玻璃器皿及消化罐均以20%硝酸浸泡24 h 以上，用水反复清洗，最后用超纯水冲洗干净，自然晾干。②精密称取试样0.5 g（精确至0.000 1 g），将试样置于微波消解内罐中，加入5 mL 硝酸，加盖放置过夜，旋紧罐盖，按照微波消解仪标准操作步骤进行消解。冷却后取出，缓慢打开罐盖排气，用少量水冲洗内盖，将消解罐放在控温电热板上，于100 ℃加热30 min，将消解液移至25 mL 容量瓶中，用超纯水冲洗消解罐内壁3 次以上，用水定容刻度，摇匀，待测，同时做空白试验。

（2）标准品溶液的制备。①混合标准工作溶液（铅、镉、汞、砷、镍和铬）：吸取适量单元素标准贮备液或多元素混合标准贮备液，用硝酸溶液（5+95）逐级稀释配成混合标准工作溶液系列，各元素质量浓度见表1。②汞标准工作溶液：取适量汞贮备液，用汞标准稳定剂逐级稀释配成标准工作溶液系列，浓度范围见表1。③内标使用液：取适量内标多元素标准贮备液（钪、锗、铑、铟、铼和铋），用硝酸溶液（5+95）配制成50 ng/mL 的内标使用液。

表1 混合标准溶液中各元素浓度（单位：ng/mL）

1.2.3 微生物含量的测定方法

依据《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》（GB 4789.2—2016）、《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数》（GB 4789.3—2016）、《食品安全国家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数》（GB 4789.15—2016）、《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》（GB 4789.4—2016）、《食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》（GB 4789.10—2016）规定方法，分别对灵芝孢子粉中的菌落总数、大肠菌群、霉菌和酵母菌总数、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌进行计数或定性检测[5]。

2 结果与分析

2.1 水分测定结果

22批灵芝孢子粉的含水率测定结果如表2所示。

表2 22 批灵芝孢子粉的含水率

根据《浙江省中药饮片炮制规范》2015 年版规定破壁灵芝孢子粉的水分不得超过9%，结合该标准观察表2 数据，可发现从市场上购买的22 批灵芝孢子粉中，含水率最高的是第21 批次（9.97%），最低的是第18 批次（2.93%），本次购买的灵芝孢子粉中只有1 批样品水分略超过规范规定的标准，整体样品水分合格率为95.45%，水分平均值为5.48%。灵芝孢子粉中的水分可由生产过程中烘干工艺、包装密封性等因素产生较大差异，而水分含量过高有可能引起灵芝孢子粉的霉变，进而对人体健康造成影响，因此要重视灵芝孢子粉的水分监测，确保其质量稳定。

2.2 重金属铅、镉、汞、砷、镍和铬的测定结果

2.2.1 标准曲线的建立

铅、镉、汞、砷、镍和铬含量的回归方程见表3。

表3 铅、镉、汞、砷、镍和铬元素标准曲线的建立

由表3 可知，铅、镉、汞、砷、镍和铬各元素的回归方程均为一元一次方程，标准曲线相关系数均大于0.99，说明在灵芝孢子粉铅、镉、汞、砷、镍和铬检测中所选定的标准系列浓度范围内，各元素线性关系较好[6]。

2.2.2 样品的测定22 批样品重金属含量测定结果如表4 所示。

表4 22 批样品重金属含量测定（单位：mg/kg）

根据《浙江省中药饮规范片炮制》2015年版和《破壁灵芝孢子粉》（T/ZZB 0474—2018），灵芝孢子粉铅、砷、镉和汞规定为铅含量≤2.0 mg/kg，砷含量≤1.0 mg/kg，镉含量≤0.5 mg/kg，汞含量≤0.1 mg/kg，镍含量≤1.0 mg/kg，铬含量≤2.0 mg/kg。由表4 可知，铅、镉、汞和砷元素含量均为合格，但镍元素含量有5 批不合格，最高含量为5.52 mg/kg，铬元素含量有6 批不合格，最高含量为40.8 mg/kg，远超标准限定值。22 批样品中第19 批次的镍元素含量为0.923 mg/kg，亦非常接近标准限定值，镍、铬超标批次近乎相同。灵芝种植区普遍没有对土壤和水定期监测，而灵芝对于重金属以及农药残留具有较强的富集作用，再加之许多市面上灵芝孢子粉采用机械法加工，金属材料制成的撞击研磨部件，与高速运动的灵芝孢子原料发生激烈的长时间碰撞，很可能将碰撞过程中产生的微细金属粉混入灵芝孢子粉中，从而使灵芝孢子产品遭受镍和铬等重金属的严重污染[7-8]。如果镍和铬过度超标，将会对人体造成不可估量的影响。因此，改善加工工艺，加强对灵芝孢子粉的重金属监测，十分重要。

2.3 微生物限量测定

在本次22 批样品中抽取8 批次样品（含水分含量超标的第21 批次样品）进行微生物检测，结果如表5 所示。

表5 样品中微生物限量测定

根据《食品安全国家标准 保健食品》（GB 16740—2014）和《破壁灵芝孢子粉》（T/ZZB 0474—2018）规定，菌落总数≤10 000 CFU/g，大肠菌群≤0.92 MPN/g，霉菌和酵母菌总数≤50 CFU/g，金黄色葡萄球菌和沙门氏菌≤0/25 g。由表5 可知，8 批样品的菌落总数、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌限量测定均合格，但存在部分样品中大肠菌群、霉菌和酵母菌总数超标的情况，合格率分别都为50%。

查阅资料，周莲娟等[9]分析了市售灵芝产品的卫生状况，结果发现有部分样品存在霉菌、酵母菌和大肠菌群超标的情况。2018 年，国家市场监管总局公布抽检的灵芝孢子粉颗粒，其菌落总数不符合食品安全国家标准规定。分析原因，灵芝孢子粉作为农副产品，自然也是微生物容易繁殖的栖息地。由于灵芝孢子粉多以套纸筒方式收集，且采用机械法中的碾压法或挤压法破壁。因此，灵芝孢子粉在包装之前的灭菌是否彻底也会影响其微生物是否超标。另外，除了需注意生产过程中的收集、破壁、包装等加工环节，还要重视的是市场部分灵芝孢子粉包装简陋，主要表现为大容量的塑料散装瓶装，无法一次性食用完。而消费者在日后食用中频繁开启，保存不当，也极易造成微生物含量的超标。因此，企业应规范生产过程，优化预包装，消费者应注意保存得当，市场应加强灵芝孢子粉微生物监测。

3 结论

在灵芝孢子粉水分、重金属、微生物的检验检测中，发现灵芝孢子粉的水分合格率为95.45%；重金属元素铅、镉、汞和砷元素含量均为合格，部分样品镍和铬超标；微生物检测中，部分样品大肠菌群、霉菌和酵母菌总数超标。考虑到灵芝孢子粉一般直接食用，应引起足够重视。企业要加强优化工艺流程，规范生产过程，传统加工方法虽操作简便，破壁率高，但易引起部分重金属含量及微生物的超标，因此企业应创新破壁技术，加强生产流程中的灭菌工艺，包括包装环节，采取有效的包装手段，选择合适的储存条件，避免微生物或真菌繁殖。而市场监管部门应加强监管手段，增加对灵芝孢子粉产品的风险监测以及监督抽检的频次，技术部门应加强科研成果转化，助力灵芝孢子粉产品品质提升。