王丽，钱国双，吴霖

(南阳市疾病预防控制中心 检验科，河南 南阳 473002)

单核细胞增生李斯特菌(简称单增李斯特菌)是一种人畜共患病原菌，在自然界广泛存在，主要通过污染的食品感染人类。其中老年人、孕妇、新生儿和免疫功能障碍者是易感人群，且在感染后容易出现肠胃炎、败血症、脑膜炎、孕妇流产、死胎等，病死率高达 20%～30%[1-2]，危险性极强。近年来欧美国家单增李斯特菌食物中毒事件不断发生，如2020年美国金针菇污染事件、2019年法国奶酪污染事件、2017年加拿大黄油污染事件[3]等。我国也屡有关于围生期母婴感染单增李斯特菌导致新生儿败血症等严重后果的报道[4-5]。自2000年我国将食品中的单增李斯特菌监测纳入食品污染物监测网以来，大量研究报告了我国不同城市或食品中有单增李斯特菌检出，且检出率大于10%[6-8]，说明单增李斯特菌已成为威胁我国人群健康的潜在病原菌。按照河南省食品安全风险监测要求，本研究对南阳市肉与肉制品、餐饮食品和含乳冷冻饮品中的单增李斯特菌进行检测，主动发现可能藏纳李斯特菌病的重点食品，为地方食品安全提供风险预警。

1 材料与方法

1.1 样品来源和种类为了解南阳市食品中单增李斯特菌的污染状况，及时发现食品中的安全隐患，根据河南省食品安全风险监测工作方案中微生物及其致病因子的监测要求，采用简单随机抽样方式，于2019—2021年在南阳市及所辖区县的超市、网店、农贸市场、饭店、快餐店、学校食堂、街头摊点等食品销售场所，采集三大类食品样品共270份，包括肉与肉制品93份，餐饮食品146份和含乳冷冻饮品31份。采样过程严格按微生物要求无菌操作。

1.2 仪器和试剂VITEK 2 Compact型全自动微生物分析系统由生物梅里埃公司生产，恒温培养箱购自美国SHELLAB公司，增菌液LB1、LB2及细菌生化试剂盒购自北京陆桥技术有限公司，单增李斯特菌显色平板和哥伦比亚血平板购自广东环凯微生物科技有限公司，革兰阳性菌鉴定卡购自梅里埃诊断产品(上海)有限公司，单增李斯特菌分型用血清购自天津生物芯片技术有限责任公司，药敏板购自上海星佰生物技术有限公司。所有培养基和试剂均在有效期内使用。

1.3 检验方法按照GB 4789.30—2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验》[9]的方法对样品进行检测，采用全自动微生物鉴定系统VITEK 2 Compact 鉴定菌株。参照单增李斯特菌血清分型方法(SN/T 2521—2010)[10]，根据菌体抗原和鞭毛抗原的血清学反应，通过玻片凝集试验对35株单增李斯特菌进行血清分型。 参考既往耐药监测结果，根据美国临床与实验室标准化协会文件M100—S29[11]和M45—A3[12]抗生素选择原则，确定了耐药监测的抗生素有青霉素、氨苄西林、美罗培南、复方新诺明、环丙沙星和四环素共6种。用微量肉汤稀释法对35株单增李斯特菌进行耐药性检测和分析，参照美国临床与实验室标准化协会M45—A3相关解释标准进行结果判定[12]。

1.4 质量控制检测时用标准菌株进行质量控制，并对使用的试剂进行质量验收，所检出的阳性菌株送河南省疾病预防控制中心复核。本实验室每年参加质控考核，且考核合格。

1.5 统计学方法利用SPSS 22.0统计软件对数据进行统计分析。计数资料用频数和率(%)表示，组间比较采用χ2检验。检验水准ɑ=0.05。

2 结果

2.1 总体情况2019—2021年对南阳市270份食品样品进行单增李斯特菌检测，共检出阳性菌株35株，总检出率为12.96%。2019—2021年检出率分别为13.79%(8/58)、16.98%(18/106)和8.49%(9/106)，差异无统计学意义(χ2=3.432，P=0.180)。

2.2 不同季度食品单增李斯特菌的检出情况4个季度均有阳性菌株检出，其中第一季度检出率最低，第三季度检出率最高，约为第一季度的2倍，差异无统计学意义(χ2=1.556，P=0.669)。见表1。

表1 2019—2021年间不同季度食品单增李斯特菌的检出情况[n(%)，份]

2.3 不同类别食品单增李斯特菌的检出情况不同类别食品中肉与肉制品的检出率最高，其次为餐饮食品，含乳冷冻饮品最低，差异有统计学意义(χ2=24.555，P<0.001)。肉与肉制品类别中的各细分种类均检出阳性菌株，其中生禽肉检出率最高；餐饮食品类别中，阳性菌株检出主要集中在预包装冷藏食品、外卖配送餐和流动摊贩食品，其他种类则未检出。见表2。

表2 不同类别食品单增李斯特菌的检出情况[n(%)，份]

2.4 单增李斯特菌的血清分型结果35株单增李斯特菌分属于3个血清型(1/2b、1/2a和4e)，其中1/2b型为主要血清型，有19株，占比54.29%；其次是1/2a型，有15株，占比42.86%；4e型只有1株，在含乳冷冻饮品中检出，占2.86%。1/2b型、1/2a型在肉与肉制品和餐饮食品中均有检出。

2.5 单增李斯特菌的药敏试验结果35株单增李斯特菌对青霉素、氨苄西林、美罗培南和四环素都敏感。仅有2株对环丙沙星耐药，耐药率为5.71%，均分离自生鸡肉；有1株对复方新诺明的耐药处于中介，中介率为2.86%，分离自调理鸡翅；有3株对环丙沙星的耐药处于中介，中介率为8.57%，分别分离自鸡肉、鸭肉和调理牛肉。

3 讨论

南阳市2019—2021年食品中单增李斯特菌的阳性检出率为12.96%(35/270)，高于宝鸡市(8.49%)[13]和自贡市(7.67%)[14]，更远高于临沂市(4.62%)[15]和吉林市(4.25%)[16]，与上海市(12.61%)[8]接近，说明相较于国内其他城市，南阳市市售食品的单增李斯特菌污染风险相对较高。此外，各年度阳性检出率呈现先升后降的变化趋势，虽然2021年度的阳性检出率下降，但各年度阳性检出率无明显差异，提示卫生部门应持续重点关注本地单增李斯特菌污染风险，加大监测力度和监测范围，以获得更全面的数据，对食品安全风险做出预警。

本研究结果显示，南阳市4个季度均检出含有单增李斯特菌的食品，各季度检出率无明显差异，这与北京市东城区只有二、三季度检出的结果不同[17]。不同类别食品的单增李斯特菌检出率差异显著，说明南阳市食品中单增李斯特菌的污染与采样季节无关，与食品类别密切相关。

本研究中单增李斯特菌在南阳市的肉与肉制品、餐饮食品和含乳冷冻饮品均有检出，说明该菌的污染范围较广，易污染各类食品。其中肉与肉制品检出率最高，与多地监测结果[18-20]一致，提示肉与肉制品的单增李斯特菌污染风险较高，应成为南阳市的重点监测食品之一。从具体种类来看，生禽肉、熟肉、调理肉、冷冻鱼糜等待加工食材的检出率高于预包装冷藏食品、外卖配送餐和流动摊贩食品等速食或即食食品的检出率。其中生禽肉的检出率最高，可能与原料肉被污染或在屠宰加工、低温贮藏、运输、销售过程中的交叉污染有关。散装熟肉制品是在我国各年龄组人群中均可能发生李斯特菌病的高风险食品[21]，如果购买者食用前不加热或加热不充分，引起食物中毒的潜在风险更大。单增李斯特菌的温度适应性很强，能在0～45 ℃下生存，在冰箱的冷藏温度下仍可以生长繁殖，甚至在-20 ℃的冷冻室也能存活1 a，能够承受高盐环境和冷冻环境等，被称为冰箱杀手[22]。如果冰箱、冰柜不能定期清洗消毒，容易造成病原菌在冰箱和食品间形成污染循环，导致持续污染，这也是在冷冻鱼糜和预包装冷藏食品中检出单增李斯特菌的原因。外卖和流动摊贩等食品因其流动性强、人员复杂、卫生条件差等原因很难监管到位。如果加工设备带菌，加上从业人员对食品的无防护处理，可能就会在生产销售过程中通过加工人员或器具污染食品，而且一旦污染就很难被消除和控制。建议监管部门加强卫生监督，规范街头摊点等，改善生产场所卫生条件，提高市售食品安全性。

单增李斯特菌的血清型分为1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4ab、4b、4c、4d、4e和7型，与人或动物感染单增李斯特菌有关的血清型90%以上都是1/2a、1/2b和4b 3种[23]。本研究与广州[24]和温州[25]的结果相似，分离的35株单增李斯特菌血清型是以1/2b、1/2a为主的致病性血清型，有引起食源性疾病的风险，有待于进一步与临床标本结合研究，探讨食品分离株与临床分离株之间的关系。

同时耐药监测结果显示，35株单增李斯特菌对临床推荐用药青霉素、氨苄西林、美罗培南和四环素均未出现耐药，有利于临床治疗控制。此外，有2株菌对环丙沙星耐药，有4株菌对复方新诺明和环丙沙星的耐药处于中介，且都分离自生禽肉和调理肉中，说明南阳市生肉中抗生素滥用，可能与养殖户长期使用抗生素预防动物疾病有关，提示相关部门在严格控制抗生素使用的同时，应高度重视并持续开展耐药监测，掌握本地区菌株耐药的动态变化，及时给临床用药提供参考。

南阳市食品受单增李斯特菌污染广泛，污染风险相比其他城市较高，肉与肉制品，尤其生禽肉是高风险食品。建议扩大食品的监测种类及范围，增加原料、生产加工及销售等各个环节的专项监测，及时发现污染的源头；加强食品卫生管理，做好食品卫生与健康宣传，告知消费者安全的食品处理方法，提高广大市民的卫生防范意识和自我保护能力；进行基因测序和分子溯源，探明食源性单增李斯特菌和临床单增李斯特菌之间的关系，增强南阳市对李斯特菌病的防控能力。