张世武，吴凯，张钰坤，蔡霞，王佐，周进，许礼发

1.淮南东方医院集团总院，a 检验科，b 内镜中心，c 消化内科，淮南 232038；2.安徽理工大学第一附属医院，a 检验科，b 消化内科；3.安徽理工大学医学院免疫教研室

幽门螺杆菌(H.pylori)是胃部感染最常见的病原体[1]。目前，我国的H.pylori感染率为40%～60%[2]。据报道，有效治疗胃部H.pylori感染的主要方案是1种含质子泵抑制剂、铋剂和2种抗菌药物的四联疗法，其中抗菌药物的治疗是控制H.pylori感染的主要手段，我国近20年来抗菌药物的广泛使用和治疗的不规范导致H.pylori的耐药率逐年上升，在我国的不同地区也呈现明显的地域差异。因此，对某一地区的H.pylori的常用抗菌药物敏感性检测与分析，并依据药敏试验结果指导合理用药，具有重要的临床价值。

1 资料与方法

1.1 标本来源 选取安徽理工大学第一附属医院和淮南东方医院集团总院2020年10月1日至2021年5月31日因胃部不适门诊进行胃镜检查的患者102例，年龄22～90岁，其中男性63例、女性39例。纳入标准：有胃部不适，如腹胀、嗳气、反酸等；无消化道急腹症；胃组织及胃黏膜完整；近1个月内未使用对H.pylori有治疗作用的抗菌药物及铋剂等；14C呼气试验阳性患者；患者愿意采集胃黏膜组织标本进行H.pylori培养及药敏试验。本研究的标本采集已经通过淮南东方医院集团总院医学伦理委员会审批(批号：202010032)，并取得所有患者的知情同意。

1.2 主要试剂 专用的H.pylori分离培养基，主要成分为布氏肉汤、马血清、万古霉素、多黏菌素、三甲氧苄氨嘧啶(TMP)、两性霉素B(珠海益民生物)；专用H.pylori药敏实验溶液，主要成分为布氏肉汤和马血清[3],配套的药敏微孔板(珠海益民生物)，5%羊血+MH琼脂培养基(河南安图生物)；质控菌株：幽门螺杆菌ATCC43504为阳性质控菌株，变异链球菌ATCC700294、表皮葡萄球菌ATCC12228为阴性质控菌株(上海北诺生物科技有限公司)。

1.3 试验方法

1.3.1 H.pylori检测方法 (1)非侵入性方法：使用14C呼气试验检查：患者空腹2 h，将1粒14C标记的尿素胶囊用10～15 mL的凉开水服下，静坐15 min后，打开集气卡包装，对着吹气口吹气，力度适中，一口气尽量长，可以换气，严禁倒吸气。当二氧化碳(CO2)集气卡指示孔中的指示剂由橙红色转变成黄色的时候，应停止吹起，如果在3 min之后仍然没有变色，同样停止吹起，把集气卡插入配套仪器进行测试，检测CO2吸收剂14C含量即可判断感染H.pylori。(2)侵入性方法(快速脲酶试验)：在内镜下用无菌活检钳取距幽门3～5 cm胃黏膜组织2～3块，快速置入H.pylori分离培养液中，盖紧；即刻放入35～37 ℃恒温箱培养48～72 h。在培养期间，逐日观察培养液及浊度变化。培养48 h后，用无菌接菌环取2～3环进行革兰染色、镜检，显微镜下可见革兰阴性句号状、螺旋状，脲酶阳性、触酶阳性，同时分离培养液浑浊变红、浊度达到2 MCF，即鉴定是H.pylori。

1.3.2 H.pylori药敏试验 当H.pylori培养的浓度达到2 MCF后，取出H.pylori药敏微孔板，取2 MCF H.pylori培养物10 μL加至药敏培养液中混匀，再移液100 μL至微孔板中的每个药敏孔。每孔加无菌矿物油2滴或贴不干胶膜，保持其微需氧，35～37 ℃恒温培养48～72 h，药敏的结果判断依据试剂盒的结果解释。采集的标本培养48 h后培养液有明显的紫红色颗粒，表明有H.pylori生长，当阳性培养物生长至高峰时进行药敏试验。

1.3.3 H.pylori感染诊断标准 将以下两项标准均符合的患者确定为感染：(1)14C呼气试验检查阳性；(2)快速脲酶试验阳性。

1.4 统计学方法 采用SPSS 22.0统计学软件分析数据，计数资料用例数表示，耐药率和敏感率用百分比表示，组间比较用χ2检验。P<0.05为差异统计学意义。

2 结果

2.1 H.pylori培养的阳性率 本研究共统计合格实验标本102例，H.pylori阳性标本65例，阳性率是63.7%，见表1。

表1 H.pylori阳性患者的性别、年龄及疾病类型

2.2 幽门螺杆菌对常规药物敏感性 本研究培养的幽门螺杆菌共测试14种抗菌药物的敏感性，见表2。

表2 幽门螺杆菌对常规药物的敏感性情况

3 讨论

全世界一半以上人口胃黏膜携带H.pylori，50%以上无症状为潜在感染，相当一部分发展中国家甚至达到80%[4]。截止2016年底，我国H.pylori的感染率是55.62%[5]，并且感染率有逐年增加的趋势[6]。本研究中，H.pylori感染率为63.7%，比全国总感染率高出约8%，可能与当地饮食习惯、卫生状况、经济发展水平等因素有关[7]，本地区的人喜好生冷食物，爱吃动物内脏，确诊感染幽门螺杆菌，多数人无法坚持规范彻底的治疗，这都给幽门螺杆菌的传播与感染提供便利。

依据最新中华医学会相关要求和全国第五次幽门螺杆菌感染处理共识报告推荐含铋剂的四联疗法即PPI+铋剂+2种抗菌药物。随着抗菌药物的大范围使用，越来越多的幽门螺杆菌对抗菌药物产生耐药，并通过耐药基因传递，感染耐药性幽门螺杆菌比例开始提高。本研究通过监测数据得知H.pylori对二代头孢菌素耐药率较高，达到49.23%，克拉霉素和甲硝唑分别为44.61%和47.69%，以克拉霉素为基础的治疗方案在全国各地治疗幽门螺杆菌感染应用多年，造成幽门螺杆菌对克拉霉素的耐药性越来越高，已经成为H.pylori感染不能完全治愈的重要影响原因。甲硝唑和替硝唑常引起消化道不良反应，其耐药率均超过40%，不建议作为抗H.pylori药物首选。左氧氟沙星和阿奇霉素的药物敏感性也比以前大幅下降，临床常用的阿莫西林耐药率达到27.69%，这直接导致近三分之一的患者疗效不佳。本研究结果表明，阿莫西林/克拉维酸、庆大霉素、多西霉素、呋喃唑酮对幽门螺杆菌有很好的敏感性。依据经验用药可以作为首选，但随着H.pylori对抗菌药物的敏感性逐年变化，经验用药治疗H.pylori方案需根据当地的药物敏感试验结果适时调整，优化抗生素组合，制定个体化治疗方案，才能明显提高幽门螺杆菌的治愈率，这也是减少临床H.pylori耐药性产生的有效措施[8]。