汪继胜，方 佳，王 云，郑祝权，翟冬旭，张伟龙 (.广东医科大学附属东莞第一医院呼吸与危重症医学科，广东 东莞 570；.广东医科大学附属东莞第一医院消化内科，广东 东莞 570；.广东医科大学附属东莞第一医院检验科，广东 东莞 570)

肺结核患者多会出现低热、盗汗、乏力、咳嗽咳痰等症状，对患者身体健康、生命安全具有极其不利的影响[1]。对于此症临床诊断多根据胸影像学、患者临床表现、实验室检查等进行诊断，但此症患者临床症状并不典型，且影像学表现无明显特异性；由于化疗、免疫功能障碍等影响，结核杆菌某些生物学特性还会发生一定的变异，增加了常规涂片检查的难度[2]。此外，痰菌含量少、肺部病灶的局限性等因素，也会导致痰涂片检查阴性。支气管镜检查可对肺部病变部位进行最直观的观察，从而可直接取材，有助于提高标本诊断阳性率[3]。但关于采取何种标本取材方式的检测价值更高临床报道较少且探讨并不深入，本研究对不同支气管镜介导标本的结核分枝杆菌基因(TB-DNA)检测痰涂片阴性肺结核价值分析如下。

1 资料与方法

1.1一般资料：以随机样本抽样法于我院2019年1月～2021年1月收治的痰涂片阴性肺结核患者中抽取60例，其中男39例，女21例；年龄18～60岁，平均(34.00±4.12)岁；病程1～10个月，平均(5.50±2.12)个月。本研究符合《赫尔辛基宣言》，且经过本院医学伦理委员会审核同意。纳入标准：患者具有低热、盗汗、乏力、咳嗽咳痰等症状；进行胸部CT等检查，诊断为疑似肺结核；可耐受肺泡灌洗术、刷检；痰涂片结核杆菌检测结果为阴性；患者知情且签署同意书。排除标准：免疫抑制者；严重肺动脉高压；近两周采用抗凝药物；支气管肺活动性出血者；语言、智力功能障碍无法清晰表达者；临床资料不完整；依从性不佳者。

1.2方法

1.2.1支气管镜检查：依据文献[4]中相关操作规范，采用电子支气管镜(生产厂家：日本OLYMPUS公司，型号：240及290型)，行支气管镜检查。应用2%利多卡因麻醉，之后采用电子支气管镜详细检查患者各段支气管。

1.2.2支气管肺泡灌洗收集痰液标本：详细分析患者胸部CT检查图像，进一步明确主要病变区将其作为灌洗区域，之后将支气管镜末端插入支气管开口部位，应用100 ml 0.9%的氯化钠注射液(灌洗液)，将其温度控制于37℃左右，应用注射器将其分3～4次由工作孔道注入，每次持续注入20～30 ml后，行负压吸引吸收灌洗液，吸收率需超过40%。

1.2.3毛刷刷检收集痰液标本：依据胸部CT检测结果，应用保护性套管黏膜刷(生产厂家：常州晨涛医疗器械有限公司)对其主要病变区域进行刷检，采用钳孔将黏膜刷插入患者病变部位，稍加压力并旋转，持续擦3次，将黏膜刷取出，待检。

1.2.4荧光定量PCR检测TB-DNA：应用无菌灌洗瓶(生产厂家：兴平市伟斯瑞仪器设备有限公司)将5 ml的灌洗液回收，应用Eppendorf试管(生产厂家：深圳瑞华希科技有限公司)回收5 ml的黏膜毛刷标本，分别向灌洗瓶、试管内加入4%的NaOH溶液，充分振荡5 min，放置于室温环境下持续30 min，之后以2 000 r/min的转速进行离心处理，持续10 min弃去上清液，于所得沉淀物样本中加入DNA提取液5 μl，将其充分振荡、摇匀，进行沸水浴10 min，之后以10 000 r/min的转速进行离心处理，持续5 min选取上层清液进行DNA扩增。按照结核核酸检测试剂盒(生产厂家)说明书操作步骤进行检测。

1.3观察指标：对比两种介导标本的检测结果及不良事件发生率。不良事件发生率=气胸发生率+气促发生率+黏膜出血发生率。

1.4统计学分析：采用统计学软件SPSS22.0对本文数据进行分析，计数资料采用χ2检验；计量资料对比采用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1两种介导标本的检测结果对比：肺泡灌洗液提取标本阳性41例，阳性率68.33%；黏膜毛刷刷检提取标本阳性55例，阳性率91.67%，两种提取标本方法检测阳性率对比，差异有统计学意义(χ2=34.698，P<0.05)。

2.2两种介导标本检测安全性对比：两种介导标本方法不良事件发生率对比差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 两种介导标本检测安全性对比[n(%),n=60]

3 讨论

肺结核是临床常见的慢性传染病，该病不具备临床症状特异性，严重者会侵及患者多个脏器，最为常见的为肺部结核感染，对患者身体健康造成极大威胁[5]。因此，早期准确、快捷的诊断，对于结核病患者预后具有十分重要的作用。相关报道显示，痰涂片抗酸染色，于肺结核疾病临床诊断中具有显著的临床价值，且操作较为简便、快捷，特异性较高。但该检查方法阳性检出率相对较低，易产生误诊、漏诊情况，影响后续治疗[6]。肺结核患者入院后进行痰涂片检查，多数患者检测结果均呈阴性，可能是由于细菌负荷程度低、痰液/涂片质量低、引流支气管不畅等多种因素的影响，且该症患者具有极高的隐匿性，增加了临床诊断的难度，该病对患者身体造成极大危害，严重者危及生命安全[7-8]。近些年来，支气管镜检查技术不断在临床推广，且对肺结核患者的临床诊断越来越受重视，但关于采取何种标本取材方法诊断价值更显著，相关报道较少[9-10]。本研究发现，两种介导标本方法不良事件发生率对比无明显差异，提示两种标本采集方法均具有较高的安全性。但肺泡灌洗液提取标本阳性41例、阳性率68.33%，黏膜毛刷刷检提取标本阳性55例、阳性率91.67%，数据提示，与肺泡灌洗液提取方式相比，黏膜毛刷刷检提取标本的阳性率更高，价值更显著。黏膜毛刷刷检为一种新型的技术，于支气管镜下采用黏膜毛刷刷检标本可使医师更直观观察患者肺部病变区域，从而可应用保护性套管黏膜刷对其主要病变区域进行准确的刷检，操作简单、快捷，之后将5 ml的黏膜毛刷标本放置于Eppendorf试管中，进行定量PCR检测，可有效避免外界因素对其标本带来不良影响，从而可保证较高的检测阳性率。

综上所述，与肺泡灌洗液提取标本相比，毛刷刷检收集标本TB-DNA诊断痰涂片阴性肺结核效能更显著，可继续推广。