段会娟，王希，陈岚

河南科技大学第一附属医院病理科，河南 洛阳 471000

晚期肺癌患者预后较差，5 年生存率仅为15%，但对于早期肺癌患者，其治愈率和5 年生存率均可达到80%[1-2]。非小细胞肺癌占全部肺癌的80%，多数患者就诊时已错过最佳治疗时间，5 年生存率较低[3]。早期肺癌患者可通过手术清除肿瘤细胞，在适合手术切除时，应首选手术治疗。随着临床对非小细胞肺癌研究的不断深入，有研究发现，有效的分子靶向治疗药物能够提高患者的生存率。缺氧诱导因子（hypoxia-inducible factor，HIF）是人体普遍存在的一类转录因子，其中HIF-2α能够增强肿瘤细胞的增殖能力，提高其侵袭性和转移性，还能够在肺中参与诱导肿瘤新生血管生成，同时促进凋亡基因产生，诱导细胞自噬[4-5]。HIF-2α因参与肿瘤的发展而成为肺癌精准治疗的研究热点。基质金属蛋白酶7（matrix metalloproteinase 7，MMP7）参与肿瘤的浸润和转移过程，在多种恶性肿瘤中均呈高表达。本研究旨在探讨非小细胞肺癌组织中HIF-2α、MMP7 的表达及临床意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2020 年1 月至2021 年1 月河南科技大学第一附属医院收治的非小细胞肺癌患者的病历资料。纳入标准：①经病理检查确诊为非小细胞肺癌；②临床资料完整；③未发现其他部位转移。排除标准：①合并严重感染；②合并心肝肾功能异常；③合并严重躯体性疾病；④存在活动性细菌或真菌感染。依据纳入和排除标准，本研究共纳入90 例患者。其中，男50 例，女40 例；年龄35～75岁，平均（45.22±5.12）岁；体重指数16～26 kg/m2，平均（22.35±2.25）kg/m2；肿 瘤 直 径2～6 cm，平 均（4.25±0.22）cm。收集90 例患者的非小细胞肺癌组织和癌旁组织。本研究经医院伦理委员会审批通过，所有患者均知情同意并签署知情同意书。

1.2 免疫组化染色方法

1.2.1 HIF-2α检测 ①脱蜡水化。将组织蜡块连续切片，使用烤箱烤2 h，将干燥后的切片置于二甲苯中浸泡20 min，采用96%、70%、40%梯度乙醇水化。②抗原修复。滴加3%过氧化物酶，室温孵育10 min，设置微波温度为98 ℃，进行加热，将切片置于耐高温切片架中，于沸腾的柠檬酸缓冲液中加热并浸泡30 min，次日采用磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）冲洗3 min，共3 次。③取出切片，甩干。滴加150 μl山羊血清封闭液，1 h后洗去，滴加HIF-2α单克隆抗体工作液，置于4 ℃冰箱中过夜，滴加生物素标记的二抗，PBS冲洗3 min，盐酸乙醇分化，滴加显色剂二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB），苏木素复染5 min，中性树胶封片。

1.2.2 MMP7 检测 全部标本经10%甲醛溶液固定，连续切片，常规石蜡包埋，二甲苯脱蜡5 min，无水乙醇浸泡1 min，PBS 冲洗4 次，滴加MMP7 单克隆抗体，恒温孵育1 h，PBS 冲洗4 次，加入DAB 显色剂显色，依次使用醋、盐酸冲洗，中性树胶封片。

1.3 免疫组化染色结果判定

由两位经验丰富的病理科医师对切片位点的染色结果进行判定，在高倍镜下（×400）观察各个位点的50 个细胞，记录染色强度和阳性细胞比例。染色强度评分：棕褐色为3 分，棕黄色为2 分，淡黄色为1 分，无色为0 分。阳性细胞比例评分：阳性细胞比例＞75%为3 分，25%～75%为2 分，＜25%为1分，无阳性细胞为0分。染色强度评分与阳性细胞比例评分相乘，＞2分为阳性，≤2分为阴性。

1.4 观察指标

比较非小细胞肺癌组织和癌旁组织中HIF-2α和MMP7 阳性表达率，比较不同临床特征非小细胞肺癌患者非小细胞肺癌组织中HIF-2α和MMP7阳性表达率，分析HIF-2α与MMP7 表达的相关性。

1.5 统计学方法

采用SPSS 22.0 软件对数据进行统计分析，计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验；计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；HIF-2α、MMP7 的相关性采用Spearman 等级相关性分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 非小细胞肺癌组织和癌旁组织中HIF-2α和MMP7 阳性表达率的比较

HIF-2α和MMP7 均主要表达于细胞质。非小细胞肺癌组织中HIF-2α阳性表达率为55.56%（50/90），高于癌旁组织的12.22%（11/90），差异有统计学意义（χ2=37.716，P＜0.05）；非小细胞肺癌组织中MMP7 阳性表达率为57.78%（52/90），高于癌旁组织的8.89%（8/90），差异有统计学意义（χ2=54.955，P＜0.05）。

2.2 不同临床特征非小细胞肺癌患者非小细胞肺癌组织中HIF-2α和MMP7 表达情况的比较

不同性别、年龄、吸烟史、肿瘤直径、肿瘤类型非小细胞肺癌患者非小细胞肺癌组织中HIF-2α和MMP7 阳性表达率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。腺癌、低分化、有淋巴结转移、临床分期为Ⅲ～Ⅳ期非小细胞肺癌患者非小细胞肺癌组织中HIF-2α阳性表达率分别明显高于鳞状细胞癌、中高分化、无淋巴结转移、临床分期为Ⅰ～Ⅱ期的患者，差异均有统计学意义（χ2=35.583、23.223、9.720、22.952，P＜0.01）。腺癌、低分化、有淋巴结转移、临床分期为Ⅲ～Ⅳ期非小细胞肺癌患者非小细胞肺癌组织中MMP7 阳性表达率分别明显高于鳞状细胞癌、中高分化、无淋巴结转移、临床分期为Ⅰ～Ⅱ期的患者，差异均有统计学意义（χ2=12.080、27.537、15.043、22.773，P＜0.01）。（表1）

表1 不同临床特征非小细胞肺癌患者非小细胞肺癌组织中HIF-2α和MMP7的表达情况

2.3 HIF-2α和MMP7 表达的相关性

经Spearman 等级相关性分析，HIF-2α与MMP7表达呈正相关（r=0.348，P＜0.05）。（表2）

表2 非小细胞肺癌组织中HIF-2α和MMP7 的表达情况

3 讨论

肺癌主要是原癌基因激活和抑癌基因失活的病理过程引起的，其临床症状主要为咳嗽、发热等。仅20%的肺癌患者在疾病早期能够有效切除病灶，因此，对肺癌患者进行准确的病理分期可为治疗策略制订及预后评估提供依据[6-9]。肺癌的早期诊断率较低，病死率较高，手术切除是治疗肺癌的主要方式，但术后患者的5 年生存率较低，死亡原因多数为远处转移和复发，提示手术切除并不能有效根治肺癌[10]。分析肺癌的生物学机制，选择合适的分子标志物，有助于患者治疗和预后判断。随着近年来分子生物学和免疫学的不断发展，非小细胞肺癌的研究逐渐受到临床关注，但目前关于非小细胞肺癌的分子生物学机制尚处于探索阶段，其诊断及预后指标较多，且各有特点[11-12]。

缺氧是肿瘤恶性增殖过程中的普遍现象，肿瘤细胞能够通过活化HIF 对缺氧产生应激反应[13]。HIF 对肿瘤细胞增殖的影响涉及细胞分化、细胞代谢等生物学过程。MMP7 可作用于细胞外基质和基底膜，进而参与肿瘤细胞的浸润和转移[14]。既往有研究显示，MMP7 在外周血、骨髓、成纤维细胞中不表达，仅在上皮起源的肿瘤中表达，因此可通过检测患者的外周血、骨髓中MMP7 水平判断是否发生转移[15-16]。本研究结果显示，非小细胞肺癌组织中HIF-2α和MMP7 阳性表达率均高于癌旁组织，HIF-2α和MMP7 阳性表达与非小细胞肺癌病理类型、分化程度、淋巴结转移情况、临床分期密切相关，且HIF-2α与MMP7 表达呈正相关，表明HIF-2α和MMP7 在非小细胞肺癌中的异常表达与肿瘤的浸润和转移有关，联合检测有助于判断患者预后。本研究中，HIF-2α主要表达于非小细胞肺癌的细胞质中，其在肿瘤坏死周围均呈高表达，HIF-2α高表达反映其在缺氧调节中发挥作用[17-18]。在缺氧环境下，HIF-2α可增强肿瘤供血能力，增加无氧糖酵解以适应缺氧，同时HIF-2α可以增强肿瘤细胞的侵袭能力，提高化疗耐受阈值[19-20]。MMP7 可减弱细胞外基质和肿瘤细胞的连接，加快肿瘤转移，其在结直肠癌、胃癌等多种恶性肿瘤中均呈高表达，研究MMP7 在肺癌中的表达及临床意义有助于判断肺癌患者的预后[21-22]。肿瘤转移是一个复杂的过程，是否形成转移灶受机体免疫状况、局部微循环等多个方面的影响，因此需要对参与研究的患者进行长期随访，明确HIF-2α和MMP7 与肿瘤转移和复发的关系，寻找更科学有效的治疗方案，在微转移时给予针对性治疗，扼杀早期的肿瘤细胞，争取良好预后[23-24]。然而，本研究的样本量较少，未进行长期随访，后续需要进行多中心、大样本量的深入研究。

综上所述，HIF-2α和MMP7 在非小细胞肺癌组织中高表达，其异常表达与肿瘤的浸润和转移有关。