■陈 博 简晨晨 刘振华 郭钰君 张怀勇 黄艳群 陈 文*

（1.河南农业大学饲料营养河南省工程实验室，河南 郑州 450002；2.汝州市动物卫生监督所，河南 平顶山 467500；3.河南金钱果生物科技股份有限公司，河南 郑州 450000）

在蛋鸡的生产过程中，处于产蛋期的蛋鸡会随着日龄的增大或疾病等原因，致使产蛋性能和蛋品质受到影响，最终导致生产性能降低[1]。抗菌药在畜牧生产中具有较好的作用效果，但其过度使用会导致超级细菌产生、动物产品残留以及环境污染等[2]，严重威胁人类健康。益生菌类微生态制剂可以作为抗生素替代物应用于生产中，其安全性高，可以优化肠道菌群，增强机体免疫功能，促进机体营养消化吸收等[3-4]。芽孢杆菌类益生菌能够在饲料生产条件下保存下来，并且饲喂后对动物机体健康起促进作用[5]。纳豆芽孢杆菌是枯草芽孢杆菌属的一种需氧型革兰氏阳性菌，具有抗菌、助消化、调节机体代谢等作用，可在肠道上段发育并分泌各种酶和维生素，促进小肠黏膜细胞增殖并维持正常的肠道功能[6-9]。目前，已有许多研究报道纳豆芽孢杆菌作为益生菌在禽生产中起营养调控作用（例如，饲粮添加纳豆芽孢杆菌可显著提高蛋鸡产蛋率和平均蛋重[10]等）。有关蛋鸡的研究大多集中在产蛋性能和蛋品质上，在孵化方面涉及相对较少。文章旨在探讨纳豆芽孢杆菌对350 日龄产蛋鸡的孵化性能、蛋品质以及血清生化指标的影响，为纳豆芽孢杆菌在蛋鸡上的应用提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验所用试验动物为350 日龄商品代海兰褐产蛋鸡，由河南鹿邑县满意禽业有限公司提供。试验所用纳豆芽孢杆菌购于日本明治制果药业株式会社，含量≥1×1011个/g。

1.2 试验设计与饲粮

将进行人工授精后的350日龄商品代海兰褐产蛋鸡12栋（每栋约8 500只）随机分为3组，每组4栋，每栋为1 个重复；分别为对照组（基础饲粮）、100 g/t 组（基础饲粮添加100 g/t纳豆芽孢杆菌）和200 g/t组（基础饲粮添加200 g/t 纳豆芽孢杆菌），预试期7 d，正式试验期28 d。试验饲粮为参照NRC（1994）所制的粉状配合饲料，试验组饲粮制备时，纳豆芽孢杆菌先与载体逐级进行充分预混合生产预混合饲料中间体，而后投入饲料混合机中与其余饲料原料进行充分搅拌混匀。各营养指标计算时依据《中国饲料成分及营养价值表（第29 版）》，基础日粮组成及营养水平如表1所示。

表1 基础日粮组成及营养水平（干物质基础）

1.3 饲养管理

饲养管理按照鸡场既有程序进行，每栋采用四层叠层式笼养方式，每笼3 只；本养鸡场小区建有一个饲料供料塔和一个饮水塔，供自动喂料线和自动饮水线使用，每天光照恒定16 h、自然通风，试验期间专人负责饲养，每天喂料2次（7：00、15：00）、自由饮水，进行常规免疫以及鸡舍的卫生清理，每天16：00开始收集鸡蛋，保持栏舍清洁卫生。

1.4 孵化管理

每天收集每栋鸡舍种蛋，剔除不合格种蛋，记录每天入孵蛋数。使用青岛依爱孵化器进行孵化，自动控制温度在38 ℃，自动控制湿度为56%，定时翻蛋，第8 天进行第一次照蛋，挑拣出未受精蛋和血蛋，第18天进行第二次照蛋，挑拣出死胚蛋。

1.5 样品收集

正试期第28 天，空腹12 h 后翅下静脉采集血液样品5 mL，每个重复2只，3 500 r/min离心10 min，用于后续血清指标的检测；每个重复收集鸡蛋5 枚，用于蛋品质常规指标的检测。

1.6 测定指标与方法

1.6.1 产蛋与孵化性能

每天准确记录每组（4 栋）产蛋舍内鸡群基数、产蛋数量、合格种蛋数、受精蛋数、孵化蛋数等，用于计算试验期产蛋鸡的日产蛋率、受精率、孵化率等。

产蛋率（%）=产蛋总数/鸡群基数×100受精率（%）=受精蛋数/入孵蛋数×100受精蛋孵化率（%）=出壳的全部雏禽数/受精蛋数×100

入孵蛋孵化率（%）=出壳的全部雏禽数/入孵蛋数×100

1.6.2 血清指标检测

血清样品用于检测总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、总胆固醇（CHO）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、钙（Ca）、磷（P）、免疫球蛋白G（IgG）、脂多糖（LPS）的含量。其中IgG 和LPS 含量采用ELISA 法进行测定，试剂盒分别购自江苏科晶生物科技有限公司和南京建成生物工程研究所有限公司，其余指标含量采用BECKMAN COULTER AU5800 全自动生化仪检测。

1.6.3 蛋品质检测

电子天平测量蛋黄及蛋壳重，计算蛋黄比和蛋壳比；游标卡尺测量长径和短径，计算蛋形指数；蛋壳厚度测量仪测量蛋壳厚度；多功能蛋品分析仪测定蛋重、蛋白高度、哈夫单位、蛋黄颜色等。

蛋壳比（%）=蛋壳重/蛋重×100

蛋黄比（%）=蛋黄重/蛋重×100

蛋形指数=长径/短径

1.7 数据统计

各试验组在不同试验阶段生产指标数据使用平均值表示，其余数据经Excel 2010 软件初步处理后，采用IBM SPSS Statistics 25对数据进行单因素方差分析，多重比较用Duncan’s 法，使用“平均值±标准误”表示，P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果与分析

2.1 纳豆芽孢杆菌对蛋鸡产蛋及孵化性能的影响（见图1和表2）

表2 纳豆芽孢杆菌对全试验阶段蛋鸡产蛋及孵化性能的影响（%）

图1 各试验组在不同试验阶段生产指标的变化（0～7、7～14、14～21、21～28 d）

由图1 可知，添加200 g/t 纳豆芽孢杆菌的试验组各试验阶段的受精率在数值上均高于另外两组（见图1b）；添加200 g/t纳豆芽孢杆菌的试验组各试验阶段的入孵蛋孵化率在数值上高于对照组（见图1c）；在试验期的14～21、21～28 d内，添加100 g/t 纳豆芽孢杆菌的试验组产蛋率在数值上高于对照组，在试验期的0～7、7～14、21～28 d 内，添加200 g/t 纳豆芽孢杆菌的试验组产蛋率在数值上高于对照组（见图1a）。

如表2所示，正式试验前（第0天）各组的产蛋率无显著差异（P>0.05），与对照组相比，饲粮添加100 g/t和200 g/t 的纳豆芽孢杆菌28 d 后产蛋率在数值上有上升趋势（P>0.05），添加200 g/t 的纳豆芽孢杆菌后，受精率和入孵蛋孵化率在数值上有上升趋势（P>0.05）。

2.2 纳豆芽孢杆菌对产蛋鸡蛋品质的影响（见表3）

表3 纳豆芽孢杆菌对蛋鸡蛋品质的影响

由表3 可知，与对照组相比，饲粮添加100 g/t 和200 g/t 纳豆芽孢杆菌对蛋鸡蛋品质指标中的蛋形指数、蛋壳强度、哈夫单位、蛋黄比等无显著影响（P>0.05），但两个试验组的蛋重和蛋壳厚度在数值上高于对照组（P>0.05）。

2.3 纳豆芽孢杆菌对产蛋鸡血清生化指标的影响（见表4）

表4 纳豆芽孢杆菌对蛋鸡血清生化指标的影响

由表4 可得，与对照组相比，饲粮添加200 g/t 的纳豆芽孢杆菌后，可显著降低蛋鸡血清白蛋白、低密度脂蛋白胆固醇和钙的含量（P<0.05），显著提高高密度脂蛋白胆固醇含量（P<0.05），血清尿素氮和总胆固醇水平具有降低趋势，但未达到显著水平（P>0.05）。

2.4 纳豆芽孢杆菌对产蛋鸡血清IgG 和LPS 的影响（见表5）

表5 纳豆芽孢杆菌对蛋鸡血清IgG和LPS的影响

由表5 可知，与对照组相比，饲粮中添加100 g/t和200 g/t 纳豆芽孢杆菌蛋鸡血清IgG 水平极显著升高（P<0.01）；与对照组相比，饲粮中添加100 g/t 纳豆芽孢杆菌后血清LPS在数值上略有下降，但差异不显著（P>0.05），而添加200 g/t纳豆芽孢杆菌可极显著降低血清LPS含量（P<0.01）。

3 讨论

3.1 纳豆芽孢杆菌对产蛋鸡产蛋及孵化性能的影响

禽类的产蛋量及孵化性能是禽类养殖的重要生产指标。舒英等[11]研究发现，在蛋鸡饮水中添加不同浓度的复合微生物制剂（主要成分为植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌等）可显著提高受精蛋孵化率。林萌萌等[12]研究结果表明，在饮水中添加由枯草芽孢杆菌、乳酸菌等组成的微生态制剂可显著提高蛋鸡的产蛋率。李玉清等[13]研究结果显示，在饲粮中添加益生菌制剂可提高蛋种鸡的产蛋率，改善种蛋受精率、受精蛋孵化率等。王大一等[14]研究发现，在饲粮中添加复合益生菌制剂后可明显提高种鹅产蛋率。本试验结果显示，在350日龄蛋鸡饲粮中添加100 g/t和200 g/t的纳豆芽孢杆菌对产蛋率及孵化性能有一定改善作用，表明纳豆芽孢杆菌对提高蛋鸡产蛋性能有一定效果。

3.2 纳豆芽孢杆菌对产蛋鸡蛋品质的影响

微生物制剂在蛋鸡生产中有着广泛应用，最常使用的一类是芽孢杆菌类的微生物制剂。芽孢杆菌在生物体内代谢过程中可以产生有机酸或者通过促进乳酸菌增殖间接产生酸性环境，抑制有害菌生成的同时促进钙、磷吸收，进而改善蛋品质。于雷等[10]研究表明，饲粮添加芽孢杆菌制剂可显著提高蛋鸡蛋重。Fathi等[15]发现，日粮中添加400 g/t的枯草芽孢杆菌可显著增加鸡蛋的蛋壳厚度，并提高高温环境下蛋壳质量和破碎力。李福彬等[16-17]研究表明，在试验饲粮中添加适量的芽孢杆菌可以改善蛋鸡的蛋黄颜色及哈夫单位等。蛋形指数是鸡的种质分类指标之一，特定的鸡种往往具有一定的蛋形指数，适当的蛋形指数可减少储存、包装或运输中破蛋和裂纹蛋的比率，且蛋形指数亦与种蛋的孵化率密切相关[18]，张春珍等[19]研究结果证实了蛋形指数在1.30～1.35范围内的种蛋孵化率极显著高于蛋形指数在1.16～1.29和1.36～1.49范围内的种蛋孵化率。在本试验中，添加不同浓度纳豆芽孢杆菌对蛋品质指标中的蛋壳强度、哈夫单位、蛋黄比等无显著影响，各组的蛋形指数在1.30～1.31，均处于较高孵化率范围内。与此同时，试验结果也显示饲粮添加100 g/t 和200 g/t 纳豆芽孢杆菌后鸡蛋的蛋重和蛋壳厚度有上升趋势，这对提高蛋鸡生产中的整体效益有一定促进作用。

3.3 纳豆芽孢杆菌对产蛋鸡血清生化指标的影响

有研究报道，在饲粮中单独添加枯草芽孢杆菌或与纳豆芽孢杆菌复合添加，可以改善机体血清生化指标[20-21]。血清中总蛋白、白蛋白等指标的水平可以反映机体中蛋白质的沉积和利用能力。钙、磷在鸡蛋的形成中起重要作用，是影响蛋壳质量的主要因素。李福彬等[17]发现在饲粮中添加2×109CFU/kg 的多黏芽孢杆菌后蛋鸡血清钙含量显著下降。吕尊周等[22]研究发现，在蛋鸡饲粮中添加400 mg/kg 的抗菌肽粗提物后显著降低血清中白蛋白含量，其推测可能是产蛋率的提高导致机体蛋白质转移为蛋中的蛋白质。本试验中得到与前人相似的研究结果，即在饲粮中添加200 g/t 的纳豆芽孢杆菌可显著降低蛋鸡血清钙和白蛋白含量，血清中大量钙磷以及白蛋白转移至鸡蛋，致使该试验组的产蛋率和蛋壳厚度呈现上升趋势。血清高密度脂蛋白可以将身体内的胆固醇运送到各个器官，以此来提高机体免疫力，预防高血脂等，低密度脂蛋白将携带的胆固醇堆积在血管和动脉壁上，从而造成血脂动脉粥样硬化等。Wang 等[23]研究指出，在肥胖小鼠模型上，经过纳豆芽孢杆菌8 周的治疗后，小鼠血清三酰甘油和总胆固醇水平降低。本试验结果表明，日粮添加200 g/t纳豆芽孢杆菌显著提高了蛋鸡血清高密度脂蛋白胆固醇水平、降低了低密度脂蛋白胆固醇水平，同时在该添加浓度下，血清总胆固醇水平也具有下降趋势，这些结果进一步证实了纳豆芽孢杆菌的使用可能对产蛋鸡机体健康有益。

3.4 纳豆芽孢杆菌对产蛋鸡血清IgG及LPS的影响

免疫球蛋白是一种免疫活性分子，共分为5 类，其中免疫球蛋白G的含量最高，具有抗菌、抗病毒、调节免疫等作用。甄玉国等[3]研究结果表明日粮中添加复合益生菌培养物后可显著提高肉仔鸡血清IgG 含量。郭军蕊等[21]指出枯草芽孢杆菌及其与苜蓿多糖在饲粮中联合使用可显著提高蛋鸡第1、4周血清IgG含量。王星等[6]的研究表明，在饲料中添加纳豆芽孢杆菌能显著增强肉鸡免疫反应。胥振国等[24]研究发现，在AA 肉鸡饲粮中添加100 mg/kg 或150 mg/kg 的纳豆芽孢杆菌提高了肉鸡的免疫水平。本试验结果表明，在试验第28天时，饲粮中添加100 g/t和200 g/t的纳豆芽孢杆菌均可以极显著升高蛋鸡血清IgG的含量，表明益生菌的使用可以提高产蛋鸡的免疫水平。

细菌LPS存在于革兰氏阴性细菌外膜中，它诱导炎症反应的发生，因此机体中LPS含量突然增加可能会加重机体的炎症反应。谢亚娜等[25]研究发现，大鼠血清中TNF-α、LPS 的表达下降，可以抑制大鼠炎性反应的发生；Wang 等[26]和Tsui 等[27]的研究发现，益生菌的使用可以降低机体由LPS 引起的炎症反应。本次试验结果表明，饲粮添加200 g/t的纳豆芽孢杆菌后极显著降低蛋鸡血清LPS的含量，从而可能减轻蛋鸡炎症反应的发生。

4 结论

综上所述：①饲粮中添加200 g/t的纳豆芽孢杆菌后，对350日龄蛋鸡产蛋性能及孵化性能有一定改善作用。②饲粮中添加200 g/t 的纳豆芽孢杆菌可以显著提高蛋鸡血清高密度脂蛋白胆固醇和免疫球蛋白G的含量，降低血清低密度脂蛋白胆固醇、白蛋白、钙和脂多糖的含量，增加了营养物质的吸收利用，同时减轻炎症反应的发生并提高机体免疫能力。