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抑制电导—离子色谱法测定羧甲基壳聚糖中二甘醇酸

2022-06-23余卫娟殷月芬胡文凌

绿色科技 2022年10期
关键词:阴离子色谱法壳聚糖

余卫娟,殷月芬,胡文凌,李 莉

(1.浙江省嘉兴生态环境监测中心,浙江 嘉兴 314000;2.自然资源部第一海洋研究所,山东 青岛 266061)

1 引言

二甘醇酸是羧甲基壳聚糖的合成过程中氯乙酸脱盐酸缩合的产物[1~3],具有一定的腐蚀性,易导致灼伤。由于羧甲基壳聚糖本身是一种安全无毒的壳聚糖类衍生物,具有抗菌抗感染、抗病毒、抗凝血等作用,与甲壳素、壳聚糖相比,能在中性、碱性及微酸性水中溶解,且性质较稳定,广泛应用于医药、保健品等领域[4~6],因此建立羧甲基壳聚糖的全面质量控制技术非常关键。作为一种重要的残留物,我国医药行业标准严格限制二甘醇酸的含量,按照标准要求,手术用品羧甲基壳聚糖膜剂、粉剂中其含量应不大于0.1%(m/m),在凝胶和溶液中不大于0.01%(m/V)。

文献中用于测定有机酸的方法主要有气相色谱法、高效液相色谱法和离子色谱法[8~11]。气相色谱法分析有机酸一般需要将样品进行甲酯化,前处理过程繁琐;液相色谱法分析有机酸分析中需用反相模式,洗脱溶剂具有一定毒性;而离子色谱法分析低分子量有机酸,无须对样品进行复杂的预处理,就能够很好地分离和同时检测多种有机酸物质,且洗脱溶剂多为碳酸盐体系,因而在环境、食品、药物分析中应用较为广泛。目前,国内外有关二甘醇酸的检测的文献报道很少。

本文建立了手术用羧甲基壳聚糖中二甘醇酸残留量的抑制电导—离子色谱检测法,在15 min之内完成一次测试,方法的检出限、准确度和重复性符合分析方法的要求,为羧甲基壳聚糖的质量安全控制提供一种简便、快速、准确的方法。

2 实验部分

2.1 仪器与试剂

881 Compact IC pro 离子色谱仪,配Magic net色谱工作站,抑制电导检测器(Metrohm公司,瑞士);Metrosep A Supp5 250阴离子分离柱(4.0 mm×250 mm,5 μm)及Metrosep A Supp 4/5 Guard预柱(Metrohm公司,瑞士),NJ-SA-4A阴离子分离柱(4.6 mm×250 mm,10 μm,北京柏奥泰生物技术有限公司); Shodex IC SI-52 4E阴离子分离柱(4.0 mm×250 mm,5 μm ,Shodex公司,日本); Milli-Q50超纯水处理系统(Millipore公司,美国)。

碳酸钠、碳酸氢钠为分析纯试剂(sigma公司,美国);实验用水均为电阻率大于18.2 MΩ的超纯水。8批手术用羧甲基壳聚糖样品及二甘醇酸标准品均由合作实验室提供。

2.2 方法

2.2.1 样品前处理

称取羧甲基壳聚糖膜剂约0.15 g于50 mL容量瓶中,加超纯水溶解,定容到刻度线,摇匀,过0.22 μm滤膜。

2.2.2 色谱条件

阴离子交换色谱柱:Shodex IC SI-52 4E;淋洗液为8.0 mmol/L的碳酸钠溶液;流速为0.8 mL/min;柱温为45 ℃;进样量为20 μL。

3 结果与讨论

3.1 分离柱的选择

采用各分离柱推荐的阴离子分析标准条件为分离条件,对于同一二甘醇酸标准品,比较Metrosep A Supp 5 250、NJ-SA-4A及Shodex IC SI-52 4E三根阴离子分离柱的分离效果,见图1。

对比图1a、图1b、图1c可以看出,在各分离柱推荐的标准条件下,对于Metrosep A Supp 5 250色谱柱,二甘醇酸峰型存在拖尾,二甘醇酸与杂质峰分离度为1.34;对于NJ-SA-4A色谱柱,二甘醇酸峰与杂质峰未能分离;对于Shodex IC SI-52 4E色谱柱,二甘醇酸与杂质达到基线分离,分离度为2.5。由此可见,前两支色谱柱均不能满足定量分析要求,因此选定Shodex IC SI-52 4E作为分析二甘醇酸的分离柱。

图1 不同分离柱分离二甘醇酸效果比较

3.2 淋洗液浓度的优化

由3.1节可知,Shodex IC SI-52 4E分离柱分析二甘醇酸具有较好的效果,但是,在标准分析条件下,其分析时间较长。为提高分析效率,有必要优化淋洗液浓度条件。本文比较了3种淋洗液浓度条件下Shodex IC SI-52 4E的分离效果及所需时间,见图2。图2a、图2b、图2c分别为Na2CO3淋洗液浓度为3.6 mmol/L、8.0 mmol/L、12.0 mmol/L时的离子色谱图。从图2中可以看出,当淋洗液浓度为3.6 mmol/L及8.0 mmol/L时二甘醇酸与杂质峰都能够达到基线分离,随着淋洗液浓度的增大分析时间缩短,然而,增大淋洗液浓度到12.0 mmol/L时,二甘醇酸与杂质峰不能基线分离,另外,实验过程中,淋洗液浓度为12.0 mmol/L时,容易造成色谱柱压力过大,因此最终选定淋洗液浓度为8.0mmol/L。

图2 不同浓度Na2CO3淋洗液分离二甘醇酸的效果

3.3 方法学考察

标准曲线:以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,线性方程为A=0.0287C+0.0111,R2=0.9999。

检出限:由D.L.=(3HN/H)×C,(式中HN为噪音峰高,H为标样中离子的峰高,C为标样中离子的浓度)计算测得二甘醇酸检出限为1.98 μg/L。

精密度:取二甘醇酸标准溶液,连续7次进样,峰面积相对标准偏差RSD=2.30%,保留时间相对标准偏差RSD=0.01%。

加标回收率:采用标准加入法平行测定3个样品中的二甘醇酸,测得平均回收率为95.33%,见表1。

表1 回收率实验结果

3.4 实际样品分析

将8批羧甲基壳聚糖样品分别按照2.2.1所示方法前处理后,在2.2.2所示色谱条件下进行离子色谱分析,测得各羧甲基壳聚糖样品中二甘醇酸含量(mg/g),见表2。

表2 羧甲基壳聚糖中残留二甘醇酸的含量

结果表明,只有第6批产品的含量应小于0.1%(m/m),达到手术用羧甲基壳聚糖粉剂、膜剂的医药卫生行业标准。因此,有必要对每一批次羧甲基壳聚糖的二甘醇酸残留进行检测,采取相应的措施,降低羧甲基壳聚糖的二甘醇酸残留,以达到行业标准要求。

4 结论

本文建立了抑制电导——离子色谱法测定手术用羧甲基壳聚糖中残留二甘醇酸的方法,能够在15min内完成对羧甲基壳聚糖中残留二甘醇酸的测定。实验表明,该方法操作简单、快速,提高了分析效率,能够满足医药行业标准规范的要求。

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