吴 婷

(嘉兴市农业科学研究院桐乡农业科学研究所，浙江 桐乡 314500)

狂犬病是由狂犬病病毒引起的人兽共患病[1]，多见于犬、狼、猫等肉食动物，人都因被病兽咬伤而感染。人患狂犬病后的病死率几近100%，犬类接种疫苗是预防人类狂犬病最具成本效益的方法[2]。通过大规模犬只免疫，提高犬只免疫密度，是实现狂犬病有效控制的主要手段，也是防止人感染狂犬病的有效措施。可以有效改变“狗染病，人打苗”的局面，实现以科学方式、较低投入控制狂犬病的目的。

2021年10月1号起施行的《浙江省动物防疫条例》规定本省对犬只狂犬病实施免费免疫[3]。犬只饲养人携带犬只到畜牧兽医主管部门确定的狂犬病免疫点免费接种狂犬病国产疫苗。本试验通过比较狂犬病国产疫苗(SAD株)与进口疫苗(G52株)犬只免疫后不同阶段抗体水平及消长规律，为今后犬类免疫中狂犬病疫苗的选择提供参考。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1试验动物 随机选取在桐乡市某宠物诊所进行狂犬病疫苗免疫的无临床疾病症状的健康犬只。

1.1.2狂犬病疫苗来源 进口疫苗为国外企业生产的狂犬病灭活疫苗(G52株)，生产日期：20191118，保持期36个月，免疫有效期：12个月。

国产疫苗为国内企业生产的狂犬病灭活疫苗(SAD株)，生产日期：20201005，保持期24个月，免疫有效期：12个月。

1.1.3试剂 狂犬病病毒抗体ELISA检测试剂盒，批号：RV20210907E，购自哈尔滨元亨生物药业有限公司。

1.1.4仪器 Eppendorf单、双道可调移液器；精宏DNP-9162电热式恒温培养箱；TECAN Infinite F50酶标仪。

1.2方法

1.2.1狂犬病免疫方法 采用皮下注射的方法，免疫剂量为1头份/只。注射时严格消毒，遵守操作规范。

1.2.2血样采集 经狂犬病国产疫苗或进口疫苗免疫的犬只分别在免疫后的21-60 d、150-180 d、330-360 d经静脉采血，分离血清。三个阶段分别采集血样各15份。

1.2.3实验室检测 狂犬病抗体采用ELISA抗体检测，按试剂盒使用说明书进行操作。检测的是抗狂犬病IgG总抗体。判定标准：样品A值/临界对照A值平均值≥1.0，抗体阳性；样品A值/临界对照A值平均值<1.0，抗体阴性。

2 结果

2.1不同时间阶段的免疫效果评价 不同时间阶段的狂犬病抗体检测结果见表1。由表1可以看出，在狂犬疫苗免疫后的21-60 d已经能保持较高的抗体水平，国产疫苗(SAD株)合格率为93.33%，进口疫苗(G52株)合格率为86.67%；150-180 d抗体水平合格率分别为93.33%和100%，说明抗体水平整体平稳；330-360 d抗体水平合格率为93.33%和60%。通过近一年时间的追踪分析，国产疫苗(SAD株)免疫效果比较稳定，进口疫苗(G52株)后期抗体水平明显下降；两者总体免疫合格率虽仍维持在70%以上，但此时应加强补免。

表1 狂犬病抗体检测结果

2.2免疫抗体水平及消长规律 不同时间阶段的狂犬病疫苗免疫抗体水平及消长规律见图1。按照ELISA抗体检测试剂盒标注的判定标准：样品A值/临界对照A值平均值≥1.0为抗体阳性；样品A值/临界对照A值平均值<1.0为抗体阴性进行判定。由图1可以看出，在免疫后第21天起两种疫苗均产生了较高水平的抗体，进口疫苗(G52株)的抗体水平整体略高于国产疫苗(SAD株)；在60-150 d，两种疫苗的抗体水平呈平稳向上态势，特别是进口疫苗(G52株)免疫抗体水平上升明显，到150-180 d左右达到峰值；330-360 d国产疫苗(SAD株)依然保持较高的抗体水平，进口疫苗(G52株)的抗体水平有所下降。

不同来源的狂犬病疫苗免疫抗体水平消长曲线见图2，总体来说国产疫苗(SAD株)免疫的抗体水平整体较平稳，抗体阳性率一直保持在90%以上。进口疫苗(G52株)在免疫后的第21天已产生较高的抗体水平，抗体水平持续上升至180 d左右达到峰值100%，随后抗体水平在330-360 d回落至60%。

3 分析与讨论

3.1国产疫苗整体表现优异 从桐乡市某宠物诊所随机抽取的犬免疫国产狂犬疫苗(SAD株)和进口狂犬疫苗(G52株)后的免疫效果来看，两种疫苗均能达到预期的免疫效果。国产疫苗(SAD株)从免疫抗体产生的时间、抗体水平保持的时间，抗体消长规律上表现都不比进口疫苗(G52株)差。

3.2本次试验中可能存在的不足之处

3.2.1样品来源 本试验样品来自宠物诊所随机采取的无临床疾病症状的健康犬只。犬只年龄没有统一，有初次免疫，也有历次免疫。可能存在部分犬只在本次狂犬病疫苗免疫前抗体水平；犬只品种没有统一，有宠物犬，也有田园犬。田园犬更适应本地的气候与环境，身体素质普遍高于其他犬种。存在个体差异。

3.2.2疫苗来源 本试验采用的进口疫苗生产日期是2019年11月18日，而国产疫苗生产日期是2020年10月5日。灭活苗在长时间保存后，可能会出现佐剂包裹力下降、抗原蛋白变性等情况，会直接影响疫苗免疫效果[4]。

近年来受到宣传、习惯等影响，犬只饲养人对国产疫苗的接受程度并不高，多数还是选择进口疫苗。但从本次试验结果来看，国产疫苗和进口疫苗免疫效果相差不大，且国产疫苗在免疫后期仍能保持较高的抗体水平。但国产疫苗还是存在一些短板比如质量有效期比进口疫苗短，适用动物仅适用于犬，未包括猫。因此，不同来源的狂犬病疫苗免疫效果评价仍是值得日后进一步探讨研究的课题。