谭金哲 鄢玲利 李贵星

Lewis血型系统抗体（简称Lewis抗体）多为天然产生，以IgM型为主，具有补体结合性质，多数在37℃无反应活性，而在室温（20℃～24℃）可发生反应[1]。近年来有较多文献报道了[2-6]由于Lewis抗体导致胎儿新生儿溶血病与输血反应的病例。本实验室检测出一例在37℃下仍具有反应活性的Lewis抗体，现将本例抗-Lea+抗-Leb抗体的分析、鉴定思路汇报如下。

材料与方法

1 病历资料 患者，男，61岁。既往有输血史，临床诊断为上颌窦癌，需术前备血4单位红细胞悬液，完善输血前相关检测时发现不规则抗体筛选结果为阳性，随即进行抗体鉴定和交叉配血试验。

2 试剂与仪器 抗-A、抗-B试剂（上海血液生物医药有限责任公司，批号：20200508），ABO血型反定型红细胞试剂（BIO-RAD，批号：45092791），伯乐抗体筛选红细胞试剂（BIO-RAD，批号：45330751），安迪博特抗体筛选红细胞试剂（安迪博特，批号：202011007），Rh分型卡（四川迈克，批号：0320041），抗-A1、抗-Lea、抗-Leb、抗-Jka、抗-Jkb、抗-Fya、抗-Fyb、抗-M、抗-N、抗-S和抗-s来自荷兰Sanquin，血型检测卡（BIO-RAD，批号：50093.96.52），Liss/coombs凝胶卡（BIO-RAD，批号：50531.60.17），Liss样本稀释液（BIO-RAD，批号：05761.00.11），红细胞酸放散试剂（江苏力博，批号：202012008），抗体鉴定谱细胞试剂（Sanquin，批号：8000451970），DTT试剂由本实验室自制，微柱凝胶卡专用离心机（型号：ID-Centrifuge12 SII），孵箱（型号：ID-Centrifuge37 SI），全自动血型分析仪器（型号：IH-1000）。

3 方法

3.1 ABO/RhD血型检测：利用全自动血型分析仪器对患者标本进行血型检测。

3.2 不规则抗体筛查：用两种不同厂商的抗体筛查细胞，分别进行室温试管法盐水抗筛试验以及37℃ Liss/Coombs凝胶卡抗筛试验，具体操作方法按照《全国临床检验操作规程》[2]。

3.3 抗体鉴定：使用抗体鉴定谱细胞试剂对患者原血清进行室温盐水抗体鉴定和37℃ Liss/Coombs凝胶卡抗体鉴定，具体操作方法按试剂说明书操作。

3.4 Lewis血型、Kidd血型、Duffy血型、MNS血型检测：使用相应的抗体试剂，采用试管法，按试剂说明书进行检测。

3.5 Rh血型：使用Rh血型分型卡，通过微柱凝胶法进行检测。

3.6 唾液中和试验：使用ABO/RhD血型为A型RhD阳性，Lewis血型为Le（a-b+）分泌型的健康人唾液（来自本实验室人员），进行唾液中和试验。经唾液中和后的患者血清做抗体筛查和抗体鉴定试验，具体操作方法按照《全国临床检验操作规程》[2]。

3.7 吸收放散试验：选取O型Le（a+b-）红细胞以及A型Le（a-b+）红细胞分别和患者血清进行吸收放散试验，并对放散液中的抗体进行检测，具体操作方法按照《全国临床检验操作规程》[2]。

3.8 抗体鉴定：再次使用抗体鉴定谱细胞试剂对DTT（0.01M）处理后的患者血清进行室温盐水抗体鉴定和37℃ Liss/Coombs凝胶卡抗体鉴定，具体操作方法按试剂说明书操作。

结 果

1 患者血型 ABO/RhD血型鉴定结果：A型RhD阳性。

2 抗体筛查结果 两种不同厂商的抗体筛查细胞在室温和凝胶卡检测结果均为阳性，结果显示患者体内存在IgM型和IgG型抗体，分别见表1和表2。

表1 患者标本与安迪博特抗体筛选细胞的筛查结果

表2 患者标本与伯乐抗体筛选细胞的筛查结果

3 抗体鉴定 室温盐水抗体鉴定和37℃ Liss/Coombs凝胶卡抗体鉴定结果不能排除抗-Lea、抗-Leb、抗-Fy3、抗-Fya、抗-Fyb、抗-Jkb、抗-M和抗-S，见表3～4。患者Lewis血型为Le（a-b-），Duffy血型为Fy（a+b-），Kidd血型为Jk（a+b+），MNS血型为M（+）N（+）S（-）s（+）。排除患者体内存在抗-Fy3、抗-Fya、抗-Jkb和抗-M。

4 患者Rh血型为DCcEe 排除患者体内存在抗-D、抗-C、抗-c、抗-E和抗-e。

5 唾液中和试验 因分泌型的唾液里有I型的Lea和Leb抗原，我们选取Lewis血型为Le（a-b+）分泌型的健康人唾液，经唾液中和后的患者血清做抗体筛查和抗体鉴定，结果全是阴性。推断患者体内存在抗-Lea+抗-Leb抗体，且排除患者体内存在抗-Fyb和抗-S。

6 吸收放散试验 选取O型Le（a+b-）红细胞和患者血清进行吸收放散试验，把放散液和O型Le（a+b-）红细胞以及A型Le（a-b+）红细胞反应，结果前者有反应性，后者无反应性；选取A型Le（a-b+）红细胞和患者血清进行吸收放散试验，把放散液和A型Le（a-b+）红细胞以及O型Le（a+b-）红细胞反应，结果前者有反应性，后者无反应性，通过以上吸收放散试验验证患者血清中存在抗-Lea+抗-Leb抗体，其中A型Le（a-b+）红细胞和抗-A1反应阳性。

7 抗体鉴定 用抗体鉴定谱细胞试剂对DTT（0.01M）处理后的患者血清在室温盐水中进行检测；再用抗体鉴定谱细胞试剂对DTT（0.01M）处理后的患者血清在37℃ Liss/Coombs凝胶卡中进行检测，结果经DTT处理后的患者血清与谱细胞在室温盐水中的反应性均为阴性，而在37℃ Liss/Coombs凝胶卡中与谱细胞具有反应性。对两次抗体鉴定结果进行分析，结果显示抗-Lea抗体为IgM型，而抗-Leb抗体为IgM型和IgG型，见表3～4。

表3 抗体鉴定细胞谱

讨 论

Lewis血型抗原是一种较为常见的红细胞膜外I型糖链抗原，ISBT在1998年确认该抗原系统并命名为Le，系统编号为007，直至2019年，该系统已被确认的抗原有6个。Lewis血型抗原的表达主要受到FUT2（Se）和FUT3（Le）基因的调控，编码Lea和Leb两种主要抗原，以及三种常见表型，Le（a-b+）、Le（a+b+）和Le（a-b-），其中，由于受到FUT2基因表达的影响，导致Le（a-b+）为分泌型，Le（a+b-）为非分泌型。Lewis抗原广泛表达于血小板、内皮细胞、肾脏以及泌尿生殖和胃肠道上皮细胞，红细胞表面Lewis抗原是从血浆中吸附上去的，红细胞本身不表达Lewis抗原[3]。抗-Lea抗体通常情况下是天然存在的，仅在表型为Le（a-b-）的人的血浆中存在，抗-Lea抗体以IgM型为主，仅存在IgG型的抗-Lea抗体的情况罕见[4-5]。抗-Leb抗体与抗-Lea抗体的血清学特点较为相似，即抗-Leb抗体主要为IgM型，常在表型为Le（a-b-）的人的血浆中存在。大多数时候Lewis抗体在37℃条件下无活性，因此即使Lewis抗体很常见，但由抗-Lea抗体所致的溶血反应却极少见，而由抗-Leb抗体所致的溶血更加罕见[7]。截至目前，文献报道由Lewis抗体引起的急/迟发型溶血性输血反应病例极少[8-11]。但东南亚人群 Lewis抗体效价强度远远高于欧洲人，若输注Lewis血型不符的红细胞悬液，可能造成严重的溶血性输血反应[6]，因此部分Lewis抗体在临床输血中也具有临床意义。

表4 DTT处理前后患者血清抗体鉴定结果

本例患者的Lewis血型为Le（a-b-） ，经唾液中和试验推断出患者血清中存在罕见抗-Lea+抗-Leb抗体，且抗-Lea+抗-Leb抗体在37℃有反应活性。我们选取O型Le（a+b-）红细胞（来源于抗体筛选细胞）和患者血清进行吸收放散试验，把放散液和O型Le（a+b-）红细胞以及A型Le（a-b+）红细胞反应，结果前者有反应性，后者无反应性，说明存在抗-Lea抗体，且不与Leb发生交叉反应。由于抗-LebH抗体与H有交叉反应，只与O型Le（a-b+）和A2型Le（a-b+）红细胞反应，不与A1或B型的Le（a-b+）红细胞反应，我们选取A型Le（a-b+）红细胞和患者血清进行吸收放散试验，把放散液和A型Le（a-b+）红细胞以及O型Le（a+b-）红细胞反应，结果前者有反应性，后者无反应性，说明存在抗-Leb抗体，且排除抗-LebH抗体。因此通过吸收放散试验验证患者血清中存在抗-Lea+抗-Leb抗体。而本例患者血清用试管法立即离心检测出IgM型抗体，用Liss/coombs卡检测出IgG型抗体，用患者原血清和DTT处理后患者血清分别进行抗体鉴定，结果显示抗-Lea抗体是IgM型，而抗-Leb抗体是IgM型和IgG型。

若在临床上遇到体内有罕见血型抗体的患者，在交叉配血不相合但又需输血治疗时，除抗体鉴定以外，还可采用相应抗体试剂筛检相应抗原阴性的红细胞悬液，再进行交叉配血试验，这样容易选择与患者表型一致的血液成分。由于意外抗体可能出现迅速，为了尽早预防输血反应的发生并确保输血安全，建议在患者距离上一次输血超过24小时后再需要输血时，应重新采集血样并完成抗体鉴定后再进行交叉配血[11]。因此我们在临床输血工作中，遇到患者体内有如本文所报道的罕见抗-Lea+抗-Leb抗体，要适时采用相应的血清学试验来进行抗体鉴定，应重视该抗体会引起交叉配血不相合，并影响临床输血效果。对于使用血清学方法检出Lewis血型抗体患者，应选择相应抗原阴性的红细胞悬液供患者输注，同时应尽可能采用三种介质交叉配血方法来保障临床输血安全。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突