李翔 董占柱 陈昊 孙欣 包春喜 李英智 牛艺卿 郝明媛 赵志军 杜彦丹★

布鲁氏菌病（Brucellosis）是由布鲁氏菌属的细菌（Brucella）侵入机体，引起传染-变态反应性的人兽共患的传染病。临床上以长期发热、多汗、乏力、关节疼痛、肝脾及淋巴结肿大为特点［1］。人群易感，多因病致贫。布病的诊断以实验室检查为主，结合流行病史、临床表现、影像学手段等综合判断［2］。目前，检测布氏菌的常用技术均存在一定局限性，如血培养技术耗时长、检出率低；虎红平板凝集试验、试管凝集特异性不高；补体结合试验敏感性低；传统聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）操作繁琐涉及生物安全等。微流控芯片-PCR（Microfluidic Chip PCR，MCPCR）技术可将样品制备、反应、分离、检测等集成到一块芯片上并自动完成，具有快速、高通量、低消耗，灵敏、特异等特点［3-4］。其技术已经成功应用于HPV［5］、结核［6］、肿瘤［7］等疾病的检测。近年来布病的国内外的发病率出现逐年上升的势头［8-9］，探究MC-PCR 技术与布氏菌检测相结合，提高布氏菌检测、诊断能力十分必要。

1 材料与方法

1.1 样本来源

收集2021年呼伦贝尔市传染病医院80 例布氏菌试管凝集实验阳性患者血液样本，3 000 r/min转速处理5 min，离心半径15 cm，分离血清，布氏菌悬液及阴性血清样本由内蒙古林业总医院提供。阳性样本及布氏菌悬液均采用56℃30 min 进行灭活，-80℃冷藏。布氏菌质粒为北京睿博兴科生物技术有限公司。

1.2 实验方法

研发适合MC 技术的布氏菌核酸提取试剂、PCR 扩增条件、反向斑点杂交试剂；设计MC-PCR与基因测序符合性测试、比较MC-PCR 法与硕世生物科技qPCR 法、上海之江生物科技TaqMan 探针法、临床诊断结果；……