魏慧慧 刘艳 殷剑峰 苏丽红★ 王玉梅★

游离DNA（cell-free DNA，cfDNA）作为新型的医疗诊断标志物，自发现即迅速整合进入肿瘤液态活检、产前遗传诊断等领域，极大地促进了检测技术的发展，成为重要的辅助诊断手段［1-2］。但血液样品在常温储存及运输过程中，有核细胞极易破裂，导致基因组DNA 释放、降解，造成血浆中游离DNA 成分污染及丰度降低。为确保游离DNA 的质量以及后期检测的准确，保存管中必须添加防腐剂、核酸酶抑制剂以及有核细胞保护剂等添加剂［3］。其中，甘氨酸作为一种游离DNA 保护剂，对细胞腺嘌呤核苷三磷酸（Adenosine triphosphate，ATP）耗竭性损伤具有保护作用［4］。但在国家药品监督管理局颁布的现行行业标准中，除了涉及系列抗凝剂的检测［5］，目前尚未形成对甘氨酸等添加剂的标准检测方法。同时，药典中仅有针对药品中甘氨酸含量的检测方法，但不适合作为游离DNA保存管中添加剂的质量评价方法。本研究建立了游离DNA保存管中甘氨酸的定量测定方法，并选用市场上不同厂家的两种保存管进行应用验证，用于游离DNA保存管的质量控制。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

TD5 离心机，购自湖南赫西仪器装备有限公司；XSE205DU/81G 电子天平，购自梅特勒托利多公司；日立U-3310 紫外可见分光光度计，购自HITECH 公司；SpectraMax M5 酶标仪，购自Molecular Devices 公司。甘氨酸国家标准品（批号140689-201605，100 mg/支），中国食品药品检定研究院提供；茚三酮，纯度99%，购自Alfa Aesar 公司；丙二醇甲醚，优级纯，购自沃凯化学试剂公司；硼氢化钠，分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司；冰醋酸，分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司；……