刘 旭 周 强 蒲高祥 刘晓梅

四川省遂宁市中心医院肿瘤科，四川遂宁 629000

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是发病于鼻咽部黏膜的上皮性恶性肿瘤。2018 年全球新发患病数达12.8 万例，死亡例数达5 万例[1]。目前，NPC的临床治疗以放化疗为主，但晚期患者生存预后较差，5 年生存率仅为50%[2]。三结构域蛋白59（tripartite motif-containing 59，TRIM59）是一种参与泛素-蛋白质转移过程的蛋白质，可作为先天免疫信号通路中的多功能调节剂[3]。TRIM59 在胶质母细胞瘤、肺癌中发挥促癌功能，如TRIM59 通过上调细胞周期相关蛋白来促进表皮生长因子受体突变的肺腺癌细胞的增殖和迁移[3-4]。蛋白磷酸酶1B（protein phosphatase 1B，PPM1B）是丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶（PP2C）的家族成员，能够负向调控细胞应激反应[5]。据报道，在膀胱癌、乳腺癌等恶性肿瘤中PPM1B 低表达会促进肿瘤细胞的增殖，促进肿瘤恶性进展[6-7]。因此，本研究通过分析NPC 中TRIM59、PPM1B的表达，探讨两者的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2014 年2 月至2018 年2 月四川省遂宁市中心医院（以下简称“我院”）诊治的97 例NPC 患者。纳入标准：①局部组织病理活检明确诊断为鼻咽部鳞癌；②初诊，既往未接受过放化疗等；③患者及家属对本研究知情同意；④临床和随访资料完整。排除标准：①合并鼻咽部急性炎症；②鼻咽部其他类型肿瘤或合并其他脏器肿瘤；③伴心肺等脏器功能不全。其中男60 例，女37 例；年龄35～76岁，平均年龄（59.4±6.1）岁；吸烟史：有33 例，无64 例；TNM 分期：Ⅰ～Ⅱ期65 例，Ⅲ～Ⅳ期32 例；肿瘤分化：高中分化35 例，低分化62 例；淋巴结转移：有55 例，无42 例。本研究经我院伦理委员会审核批准通过。

1.2 研究方法

1.2.1 免疫组织化学染色法检测TRIM59、PPMIB 表达 在手术局部组织活检过程中，取癌组织和癌旁组织（距肿瘤边缘2 cm，病理明确为正常黏膜组织）约50 mg，10%中性甲醛固定，常规石蜡包埋切片。实验步骤按照免疫组织化学染色法检测，试剂盒购于武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司（货号E-IR-R213）。一抗TRIM59 稀释比1∶1000，PPM1B 稀释比1:400，均购于Abcam 公司（货号ab69639、ab244353）。200 倍镜下观察结果（倒置显微镜，日本奥林巴斯株式会社，型号：CKX53），染色评分根据染色强度和阳性染色面积的乘积计算[8]。染色强度：不着色为0 分，浅黄色为1 分，棕黄色颗粒为2 分，颜色深为3 分。染色面积：无着色为0 分，<25%为1 分，25%～50%为2 分，>50%为3分。染色评分≥3 分判定为染色阳性。

1.2.2 随访方法 所有患者出院后开始进行随访，每3个月电话随访1 次，随访内容为患者生存状态，连续随访3 年，随访截至2021 年2 月或患者死亡。

1.3 统计学方法

采用SPSS 21.0 软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（）表示，两组间比较采用t检验；计数资料用例数或百分率表示，组间比较采用χ2检验；相关性采用Spearman 秩相关分析；Kaplan-Meier 生存曲线分析TRIM59、PPM1B 表达对NPC 患者预后的影响，并采用log-rank检验进行差异分析。以P <0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NPC 患者中TRIM59、PPM1B的阳性表达情况

TRIM59 阳性染色主要位于细胞浆和细胞核，PPM1B 阳性染色主要位于细胞核，部分位于细胞浆。NPC 癌组织中TRIM59、PPM1B 阳性表达率分别为69.07%（67/97）、26.80%（26/97）；癌旁组织中TRIM59、PPM1B 阳性表达率分别为28.87%（28/97）、68.04%（66/97）。与癌旁组织比较，癌组织中TRIM59 阳性表达率明显较高（χ2=31.374，P ＜0.001），而PPM1B 阳性表达率明显较低（χ2=33.078，P ＜0.001）。见图1。

2.2 NPC 患者中TRIM59、PPM1B 相关性分析

TRIM59 与PPM1B 表达呈负相关（r=-0.524，P ＜0.001）。

2.3 TRIM59、PPM1B 表达与NPC 患者临床特征的关系

Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移的NPC 患者TRIM59 阳性表达率、PPM1B 阴性表达率高于Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移的NPC 患者（P <0.05）。见表1。

表1 RIM59、PPM1B 表达与NPC 患者临床特征的关系[例（%）]

2.4 TRIM59、PPM1B 表达对NPC 患者预后的影响

对97 例NPC 患者随访2～36个月，中位随访32个月（13～36个月）。随访期间失访3 例，死亡27 例，3 年生存率为71.27%（67/94）。Kaplan-Meier 生存分析结果显示，TRIM59 阳性表达组3 年生存率[63.08%（41/65）] 低于阴性表达组[89.66%（26/29）]（log-rank χ2=4.822，P=0.006）；PPM1B 阳性表达组3年生存率[92.00%（23/25）]高于阴性表达组[63.77%（44/69）]（log-rank χ2=6.041，P ＜0.001）。见图2。

3 讨论

NPC 是鼻咽腔的恶性肿瘤。目前认为，遗传易感性、环境因素、EB 病毒感染等多种因素均参与NPC的发生发展[9-10]。NPC 恶性程度较高，肿瘤分化不良，病理上非角化型鳞癌最为常见[11]。NPC 由于位置隐匿，发现时常为中晚期[12]。放化疗是NPC的首选治疗方式，提高了肿瘤的局部控制率，并延长患者生存时间[13]。但治疗后肿瘤发生复发转移仍然是治疗失败的主要因素[14]。因此，深入研究NPC的疾病机制，寻找能够有效预测NPC 患者预后的分子标志物，有助于临床治疗方式和治疗后随访方案的选择，是近年来的研究热点[15-16]。

TRIM 家族包括70 多个成员，该家族蛋白结构上具有一个RBCC 结构域和N 末端环手指结构域，功能上具有E3 泛素连接酶的作用，参与包括细胞内信号传导、发育、细胞凋亡等细胞过程[17]。TRIM59 在肺癌、乳腺癌、肝癌等许多癌症中表达上调，并且TRIM59高表达患者的远期生存预后较差，是肿瘤患者不良预后的肿瘤标志物[18-19]。本研究结果显示，NPC 患者肿瘤组织中TRIM59的阳性表达率明显较高，提示NPC 中TRIM59 表达上调。TRIM59的表达受到多种因子的调控。既往研究发现，肿瘤中表皮生长因子受体活化能激活细胞周期素激酶5（cyclin-dependent kinase 5，CDK5），CDK5 能够顺式促进TRIM59的表达，促进肿瘤细胞的增殖[3]。此外，本研究结果显示，NPC 患者TRIM59 阳性表达与TNM 分期及淋巴转移有关，提示TRIM59 表达上调参与促进NPC的发生发展。有研究报道，TRIM59 表达能够稳定程序性细胞死亡蛋白10，进而抑制自噬相关蛋白p62 赖氨酸63 位的泛素化，p62 降解减少后激活Ras 家族成员A，促进肿瘤的侵袭和转移[18]。此外，TRIM59 可以被外泌体包裹后释放到肿瘤微环境，激活肿瘤相关巨噬细胞中NLRP3炎症小体，促进巨噬细胞向M2 型转化，促进免疫抑制状态的形成[20]。

PPM1B 是金属依赖性丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶家族的成员。近年来研究发现，PPM1B 作为肿瘤增殖信号传导途径的重要负调节因子，通过直接抑制P38和JNK 途径蛋白激酶的磷酸化激活，发挥抑制肿瘤增殖的作用[21]。既往研究发现，NPC 中存在P38和JNK 途径的过度激活[22]。鉴于PPM1B 对P38和JNK途径的负调节作用，PPM1B 可能是NPC 中潜在的抑癌基因。本研究结果显示，NPC 肿瘤组织中PPM1B 阳性表达率较低，提示NPC 中PPM1B 表达下调。分析其原因可能与非编码RNA的表达调控有关。Yang 等[6]研究发现，肿瘤中PPM1B 受到上游miR-186的表达调控，miR-186 异常升高能够显著抑制PPM1B的表达，促进G1向S 期转换，导致肿瘤过度增殖。此外，本研究结果显示，NPC 中PPM1B 表达与TNM 分期及淋巴转移有关，提示PPM1B 表达下调参与促进NPC的肿瘤进展。PPM1B 在肿瘤中主要发挥肿瘤抑制的作用，Cho 等[23]动物实验结果表明，PPM1B 低表达导致癌基因RhoGDl1的磷酸化激活，RhoGDl1 通过激活RhoA的表达，促进人乳腺癌细胞的增殖和迁移，促进转移。亦有学者在NPC 肿瘤细胞中发现，RhoA信号通路有过度激活的现象[24]。因此，NPC 中PPM1B的低表达可能是通过激活下游RhoA 通路发挥肿瘤促进的作用。本研究结果显示，TRIM59 与PPM1B 呈负相关，提示两者可能存在相互作用的关系。王文忠等[25]报道，NPC 细胞（HNE1）中PPM1B 是TRIM59的下游靶基因，TRIM59 表达升高能够通过靶向抑制PPM1B 表达，促进HNE1 细胞的迁移和侵袭。因此，TRIM59 可能通过抑制PPM1B 发挥促进NPC 肿瘤进展的功能。本研究结果显示，TRIM59 阳性表达、PPM1B 阴性表达患者的生存预后较差。提示检测NPC 癌组织中TRIM59 与PPM1B 表达有助于患者临床预后预测，是新的判断预后的标志物。

综上所述，NPC 中TRIM59 阳性表达率较高，而PPM1B 阳性表达率较低。NPC 中TRIM59、PPM1B的表达与TNM 分期和淋巴转移有关。临床上，可根据TRIM59、PPM1B 表达情况对患者病情、预后进行评估，指导临床治疗方案的选择。但本研究未对TRIM59、PPM1B 之间作用机制进行探索，有待今后深入探索两者的作用机制，为临床提供新的治疗靶点。