雷裕 卓志强

[摘要] 目的 了解廈门地区呼吸道合胞病毒（RSV）感染住院患儿不同检测方法的特点。方法  选择2020年1—10月厦门市儿童医院住院的患儿，通过采集患儿鼻咽拭子2份，用荧光免疫方法进行七项呼吸道病毒抗原检测、PCR方法进行三联核酸检测，以及血清1份用于呼吸道病毒五联抗体，收集任一结果阳性的呼吸道合胞病毒感染患儿91例，通过观察阳性率结果对比三种方法的优劣。 结果 91例阳性标本中PCR阳性91例（100%），抗原阳性61例（67.03%），抗体阳性1例（1.11%）。91例RSV感染病例中，诊断为肺炎72例（79.12%），喘息性支气管炎8例（8.79%），支气管炎10例（10.99%），传染性单核细胞增多症1例（1.10%）。19例（20.88%）混合支原体感染，12例（13.19%）混合卡他莫拉菌感染，8例（8.79%）混合肺炎链球菌感染，1例（1.10%）混合流感嗜血杆菌感染。<1岁19例，1～2岁18例，3～4岁39例，>4岁15例。男54例、女37例。平均住院天数5.9 d。结论 通过三种不同检测手段检测病毒核酸、抗原、抗体，结果核酸阳性率最高，其次是抗原，抗体阳性率几乎为0。

[关键词] 呼吸道合胞病毒;呼吸道感染;儿童;检测方法

[中图分类号] R446.5          [文献标识码] B          [文章编号] 1673-9701（2022）10-0092-03

[Abstract] Objective To understand the characteristics of different detection methods for Respiratory Syncytial Virus （RSV） infection in hospitalized children in Xiamen. Methods Children hospitalized in Xiamen Children′s Hospital from January to October 2020 were selected. Two nasopharyngeal swabs were collected， seven respiratory virus antigens were detected by fluorescence immunoassay， triple nucleic acid was detected by PCR， one serum sample was used for respiratory virus quintuplet antibody， and 91 children with RSV infection with positive results were collected. The advantages and disadvantages of the three methods were compared by observing the positive rate. Results Among the 91 positive samples， 91 cases were positive for PCR （100%）， 61 cases （67.03%） were antigen-positive， and 1 case （1.11%） was antibody-positive. Among 91 cases of RSV infection， 72 cases （79.12%） were diagnosed as pneumonia， 8 cases （8.79%） as wheezing bronchitis， 10 cases （10.99%） as bronchitis， and 1 case （1.10%） as infectious mononucleosis. There were 19 cases （20.88%） complicated with mycoplasma infection， 12 cases （13.19%） with Moraxella catarrhalis infection， 8 cases （8.79%） with Streptococcus pneumoniae infection and 1 case （1.10%） with Haemophilus influenzae infection. 19 cases were less than 1 year old， 18 cases were 1-2 years old， 39 cases were 3-4 years old， and 15 cases were more than 4 years old. There were 54 boys and 37 girls. The average hospital stay was 5.9 days. Conclusion The virus nucleic acid， antigen and antibody were detected by three different detection methods. The results showed that the positive rate of nucleic acid was the highest， followed by antigen， and the positive rate of antibody was almost zero.

[Key words] Respiratory syncytial virus; Respiratory tract infection; Children; Detection method5F309200-687F-4754-BCEF-BA3E0A6D4908

呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）可引起所有年龄段人群的急性呼吸道疾病。几乎所有儿童在2岁之前都感染过RSV[1]，再感染也较常见。RSV在鼻咽部复制后感染小细支气管上皮细胞，不感染基底细胞，然后扩展至肺的Ⅰ型和Ⅱ型肺泡细胞，这一过程可能是通过细胞间传播或吸入分泌物完成;RSV的病理表现包括：上皮细胞坏死、偶有细支气管上皮细胞增生、聚集于支气管小动脉和肺小动脉的单核细胞及T细胞浸润，以及血管结构和小气道之间的中性粒细胞浸润。这导致气道阻塞、空气滞留和气道阻力增加，而且与支气管肺泡灌洗液中发现中性粒细胞增多有关。实验室提供及时准确的病原检测报告，对临床医师及时明确病因、控制RSV感染的蔓延、采用特异性针对性治疗方案、防止滥用抗生素都具有重大意义[2-6]。本研究选择通过不同方法的比较从91例RSV感染患儿采用三种不同检测手段进行数据对比，以期能对 RSV的感染提供阳性率高的检测方法，为临床医师选择合适的检测方法提供依据[7]。

1 对象与方法

1.1 研究对象

收集2020年1—10月厦门市儿童医院住院的91例患儿为研究对象。纳入标准：鼻咽拭子、血清标本、痰液标本，检测RSV抗原、核酸及抗体，至少1个结果阳性者。其中男54例，女37例;年龄2个月19 d至5岁7个月，<1岁：19例，1～2岁18例，3～4岁39例，>4岁15例。平均住院天数5.9 d。

1.2 方法

①呼吸道病毒五联抗体检测：抽取调查对象静脉血2 ml，2 h内分离血清，采用免疫荧光（IFA）方法检测血清中肺炎衣原体、肺炎支原体、呼吸道合胞病毒、腺病毒以及柯萨奇病毒的血清IgM抗体。

②七项呼吸道病原抗原：采用Diagnostic Hybrids，Inc公司生产的七项呼吸道病毒检测试剂盒（免疫荧光法），主要通过基于荧光标记单克隆抗体的免疫荧光法，对鼻咽吸取液、痰液的呼吸道合胞病毒进行定性检测。定性检测：急性呼吸道感染患儿住院7 d内留取标本，采用一次性无菌吸痰管吸取1～2 ml深部鼻咽分泌物或痰液，加入少量生理盐水置于收集管中或行纤维支气管镜吸取肺泡灌洗液及时送实验室行直接免疫荧光（direct immunofluorescence assayk，DFA）檢测[8]。

③三联核酸：用无菌的捻拭子或植绒性拭子拭取人鼻咽部分泌物，将鼻咽拭子置入2 ml灭菌的生理盐水中，立即送检。采用核酸多重检测方法检测患者中腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒三种呼吸道病毒病原体，有效期内严格按照说明书进行检测。

1.3 观察指标

无论是一种还是兼并两种以上检测结果呈现阳性，均视为阳性感染。

2 结果

2.1 病毒检测结果

91例患儿中检出RSV-RNA阳性91例，阳性检出率为100.00%，抗原阳性61例（67.03%），抗体阳性1例（1.11%）。见表1。

2.2 临床特点

91例RSV感染病例中，诊断为肺炎72例（79.12%），喘息性支气管炎8例（8.79%），支气管炎10例（10.99%），传染性单核细胞增多症1例（1.10%）。19例（20.88%）混合支原体感染，12例（13.19%）混合卡他莫拉菌感染，8例（8.79%）混合肺炎链球菌感染，1例（1.10%）混合流感嗜血杆菌感染。<1岁19例，1～2岁18例，3～4岁39例，>4岁15例。男54例，女37例。平均住院天数5.9 d。

3 讨论

儿童90%以上的急性呼吸道感染是由病毒引起的。常见的呼吸道病毒主要包括呼吸道合胞病毒、流感病毒A、流感病毒B、腺病毒、副流感病毒、人冠状病毒、鼻病毒等[9-16]。在发展中国家，RSV感染是所致毛细支气管炎或肺炎患儿死亡的主要病因之一[17-20];而在美国，每年因RSV感染住院的婴儿有75 000～125 000例，尤其多见于早产儿及呼吸系统、循环系统、免疫系统有缺陷的小婴儿。RSV能在全世界引起季节性暴发，每年造成全球100万以上儿童的死亡。在北半球，暴发一般出现在10月或11月至次年4月或5月，1月或2月为高峰期。在南半球，冬季RSV感染流行出现在5月至9月，高峰期在5月、6月或7月。几乎所有儿童在2岁之前都感染过RSV，再感染也较常见。RSV是1岁以下儿童中下呼吸道感染的最常见病因[21]。RSV是一种反义单链RNA病毒，属副黏病毒科。A和B两种亚型在多数RSV暴发中同时出现，A亚型引起的疾病常更严重。亚型中有几种基因型在一个社区中占据优势，优势毒株每年轮换，这可能是导致频繁再感染的原因。RSV主要通过鼻咽黏膜或眼黏膜接触含病毒的分泌物或污染物而传播。直接接触是最常见的传播途径，气溶胶飞沫也可引起传播。RSV可在手和污染物上存活数小时。因此，洗手和接触防护是预防医疗保健相关传播的重要措施[22-23]。RSV感染的潜伏期通常为4～6 d（范围在2～8 d）。RSV在鼻咽部复制后感染小细支气管上皮细胞，不感染基底细胞，然后扩展至肺的Ⅰ型和Ⅱ型肺泡细胞，这一过程可能是通过细胞间传播或吸分泌物完成;1～3 d后出现LRTI（毛细支气管炎或肺炎）。RSV的病理表现包括：上皮细胞坏死、偶有细支气管上皮细胞增生、聚集于支气管小动脉和肺小动脉的单核细胞及T细胞浸润，以及血管结构和小气道之间的中性粒细胞浸润。这导致气道阻塞、空气滞留和气道阻力增加，而且与支气管肺泡灌洗液中发现中性粒细胞增多有关。

RSV感染的临床表现因患者年龄、健康状况以及感染为原发还是继发而异[24]。原发性感染的婴幼儿通常表现为LRTI（毛细支气管炎或肺炎），年龄较大的儿童和成人通常表现为上呼吸道症状或气管、支气管炎。RSV可在儿童中导致严重的下呼吸道疾病、毛细支气管炎、支气管痉挛、肺炎和急性呼吸衰竭[25]。下呼吸道疾病常发生在初次感染时，并可见于50%以上的二次感染。虽然第3次感染之后疾病严重程度下降，但即使在健康成人中也有约1/4有LRTI表现。大约20%的婴儿在出生后的第1年会出现RSV相关的哮鸣音;2%～3%需要住院治疗。RSV反复感染在儿童和年轻成人中频发，可导致明显的上呼吸道症状。其表现包括咳嗽、鼻卡他、鼻溢和结膜炎。与其他呼吸道病毒相比，RSV更可能累及鼻窦和耳。观察性研究表明，对于90日龄以下的伴RSV感染毛细支气管炎的发热小婴儿，菌血症或脑膜炎的风险不到1%～2%;泌尿道感染风险为1%～5%，低于不伴毛细支气管炎的发热婴儿，但也不能忽视。继发性细菌感染在因RSV毛细支气管炎住院的婴儿中也不少见。RSV感染通常呈自限性病程，不会导致明显的长期肺部后遗症。然而，RSV感染与一些患者的复发性哮鸣有关。RSV肺炎导致呼吸衰竭是免疫功能受损宿主中急性发病和死亡的一个重要原因，在造血干细胞移植患者中报道的死亡率为70%～100%。有研究结果显示，RSV感染在肺移植或肾移植患者中似乎不会引起慢性肺功能障碍。5F309200-687F-4754-BCEF-BA3E0A6D4908

对于具有典型毛细支气管炎的既往体健婴幼儿，临床疑诊RSV感染通常便足够。在这类患儿中鉴定RSV不太可能影响治疗。如果鉴定RSV会影响临床治疗，则应进行RSV感染的实验室诊断。RSV的实验室诊断可通过分析呼吸道分泌物及血清抗体实现。对于健康儿童，鼻腔冲洗的检出率最高，但如果鼻腔冲洗不可行，鼻咽拭子或咽拭子可能也是适用的。对于插管患者或正接受支气管镜检查的患者，应进行气管吸引或支气管肺泡灌洗。确诊标准是在HEp-2细胞中分离出RSV。发现典型的病毒空斑伴合胞体形成，联合免疫荧光染色能确诊。可利用抗原捕获技术实现快速检测，不到30 min即可完成。这些检查具有相对高水平的敏感度和特异度，是大部分临床实验室的主要诊断方法。

本实验数据显示，91例患儿中PCR阳性91例（100%），抗原阳性61例，检出率67.03%，抗体阳性1例（1.11%）。91例呼吸道合胞病毒（RSV）感染病例中，诊断为肺炎72例（79.12），喘息性支气管炎8例（8.79%），支气管炎10例（10.99%），传染性单核细胞增多症1例（1.10%）。19例（20.88%）混合支原体感染，12例（13.19%）混合卡他莫拉菌感染，8例（8.79%）混合肺炎链球菌感染，1例（1.10%）混合流感嗜血杆菌感染。<1岁19例，1～2岁18例，3～4岁39例，>4岁15例。男54例，女37例。平均住院天数5.9 d。数据显示呼吸道合胞病毒（RSV）是引发儿童急性呼吸道疾病常见病原，0～4岁RSV高发，男女比例相当，RSV可在儿童中导致严重的下呼吸道疾病、毛细支气管炎、支气管痉挛、肺炎和急性呼吸衰竭，易混合肺炎支原体、卡他莫拉菌、肺炎链球菌感染。通过三种不同检测手段检测病毒核酸、抗原、抗体，结果核酸敏感度最高，其次是抗原，抗体在本次实验中阳性率几乎为0。

综上所述，荧光定量RT-PCR荧光探针法检测核酸和直接免疫荧光检测病毒抗原的阳性检出率均高于血清抗体的检测。荧光定量RT-PCR技术具有快速、敏感、特异度强等特点，越来越多地应用到医学临床检测。RT-PCR荧光探针法结合PCR和荧光探针两种技术，具备敏感度高、漏检率低及特异度高的特点，进一步提高检测的准确度。直接免疫荧光（DFA）检测的是RSV抗原，其在感染RSV后产生时间较抗体快，该方法虽然操作简单，出结果快，适用于临床早期检测。但由于体内RSV特异性抗体产生慢，且滴度低，检测的敏感性不高，因此通过对患者血清抗体测定来诊断RSV感染，不能为临床医师及时提供诊疗依据，且这种检测抗体的免疫学方法反映的是感染的间接指标，不能替代直接的病原学检测。

[参考文献]

[1]   Tramuto F，Maida CM，Napoli G，et al. Burden and viral aetiology of influenza-like illness and acute respiratory infection in intensive care units[J].Microbes Infect，2016， 18（4）：270-276.

[2]   秦茵茵，吴国锋，秦笙.九项呼吸道联检试剂对多种呼吸道感染病原体检测的临床意义[J].中华生物医学工程杂志，2012，18（2）：124-127.

[3]   任吟莹，黄莉，王美娟，等.儿童呼吸道人副流感病毒感染临床特征及流行病学特点[J].中华实用儿科临床杂志，2017，32（4）：270-274.

[4]   钱昕，于新芬，赵敏，等.杭州市急性呼吸道感染婴幼儿中副流感病毒3型遗传进化及其感染特征研究[J].中华预防医学杂志，2016，50（3）：255-260.

[5]   Meissner HC，Murray SA，Kiernan MA，et al. A simultan eous outbreak of respiratory syncytial virus and parainfluenza virus type 3 in a newborn nursery[J].J Pediatr，1984，104（5）：680-684.

[6]   劉厚明，邬文燕，王君，等.深圳地区急性呼吸道感染病毒病原谱分析[J].检验医学与临床，2019，16（13）：1844-1846.

[7]   柳晓琴，崔亚利，沈川，等.7360例呼吸道感染儿童病毒抗原七联检的临床结果分析[J].国际检验医学杂志，2019，40（11）：1333-1336.

[8]  Henrickson KJ. Parainfluenza viruses[J].Clin Microbiol Rev，2003，16（2）：242-264.

[9]   Denny FW，Clyde WJ. Acute lower respiratory tract infections in nonhospitalized children[J].J Pediatr，1986，108（5 Pt 1）：635-646.

[10]  Glezen WP，Frank AL，Taber LH，et al. Parainfluenza virus type 3：Seasonality and risk of infection and reinfection in young children[J].J Infect Dis，1984，150（6）：851-857

[11]  Murphy B，Phelan PD，Jack I，et al. Seasonal pattern in childhood viral lower respiratory tract infections in melbourne[J].Med J Aust，1980，1（1）：22-24.5F309200-687F-4754-BCEF-BA3E0A6D4908

[12]  Gomez M，Mufson MA，Dubovsky F，et al. Phase-I study MEDI-534，of a live，attenuated intranasal vaccine against respiratory syncytial virus and parainfluenza-3 virus in seropositive children[J].Pediatr Infect Dis J，2009，28（7）：655-658.

[13]  Moscona A. Entry of parainfluenza virus into cells as a target for interrupting childhood respiratory disease[J].J Clin Invest，2005，115（7）：1688-1698.

[14]  Cai XY，Wang Q，Lin GY，et al. Respiratory virus infections among children in South China[J].J Med Virol，2014，86（7）：1249-1255.

[15]  Tsukagoshi H，Ishioka T，Noda M，et al. Molecular epide- miology of respiratory viruses in virus-induced asthma[J].Front Microbiol，2013，4：278.

[16]  Dong W，Chen Q，Hu Y，et al. Epidemiological and clinical characteristics of respiratory viral infections in children in Shanghai，China[J].Arch Virol，2016，161（7）：1907-1913.

[17]  季伟，陈正荣，周卫芳，等.2005—2011年苏州地区急性呼吸道感染住院儿童病原学研究[J].中华预防医学杂志，2013，47（6）：497-503.

[18]  Kasel JA，Frank AL，Keitel WA，et al. Acquisition of serum antibodies to specific viral glycoproteins of parainfluenza virus 3 in children[J].J Virol，1984，52（3）：828-832.

[19]  Spriggs MK，Murphy BR，Prince GA，et al. Expression of the F and HN glycoproteins of human parainfluenza virus type 3 by recombinant vaccinia viruses：Contributions of the individual proteins to host immunity[J].J Virol，1987，61（11）：3416-3423.

[20]  Tran DN，Pham TM，Ha MT，et al. Molecular epidemiology and disease severity of human respiratory syncytial virus in Vietnam[J].PLoS One，2013，8（1）：e45 436.

[21]  黃志英，程宝金，林红，等.3483例儿童急性呼吸道感染病毒病原学分析[J].儿科药学杂志，2014，20（8）：38-40.

[22]  容嘉妍，黄娟，王桂兰，等.广东省中山地区2011—2012年冬春季急性呼吸道感染住院患儿病毒病原学分析[J].中外医疗，2014，33（3）：126-127.

[23] Venkatesh MP，Weisman LE. Prevention and treatment of respiratory syncytial virus infection infants：An update[J].Expert Reu VacciIeS，2006，5（2）：261-268.

[24]  张海邻，李孟荣.呼吸道合胞病毒感染危险因素分析及严重度评价[J].实用儿科临床杂志，2005，20（4）：369-371.

[25]  袁艺，宋国维，杜军保，等.北京地区住院急性呼吸道感染患儿的病毒病原检测分析[J].实用儿科临床杂志，2006， 21（6）：348-351.

（收稿日期：2021-05-17）5F309200-687F-4754-BCEF-BA3E0A6D4908