黄翔

摘要：目的：探究不同微生物检验法对结核杆菌检验效果。方法：将肺结核患者作为本次研究对象，对患者采用半巢式实时荧光定量核酸扩增法、抗酸染色直接涂片法、结核菌固体培养基（罗氏）培养法三种检测方法，将病理诊断作为金标准，分析上述三种方法的检出阳性率。结果：半巢式实时荧光定量核酸扩增法检出阳性率高于抗酸染色直接涂片法、结核菌固体培养基（罗氏）培养法阳性率（P<0.05）。结论：在结核杆菌的检验方法中，半巢式实时荧光定量核酸扩增法的敏感度和特异度更高，能够利于疾病的早期治疗，值得研究和推广。

关键词：不同微生物检验法;结核杆菌;检验效果

结核杆菌作为导致结核病的病原体，其传播途径较多，比如消化道、皮肤和呼吸道等，导致机体受到侵犯，引起多种组织器官的结核病，其中以通过呼吸道引起的肺结核最为常见。目前临床对于结核杆菌的检出阳性率是诊断结核病的标准，能够为疾病的早期诊断和治疗提供重要参考依据，但在实验室检查过程中，由于分枝杆菌属的细菌细胞壁脂质含量十分高，导致大量的分枝杆菌酸在肽聚糖层的外层围绕，对染料的穿入造成影响。目前临床一般选择传统的抗酸染色法进行检验，但检出阳性率较低，并且还可出现漏诊情况，而随着实验室诊断技术的不断提高，新的诊断方式也不断出现。本文目的在于探究不同微生物检验法对结核杆菌检验效果，具体内容见下文。

1.资料/方法

1.1基线资料

本次研究对象为肺结核患者，共82例，研究起始时间在2021年5月、终止时间在2022年1月。纳入标准：（1）经影像学诊断确诊为肺结核;（2）患者和家属在参加研究前均签署知情同意书;（3）此次研究获得医学伦理委员会的批准。排除标准：（1）合并其他肺部感染疾病，比如肺炎、支气管扩张、肺癌、支气管异物症;（2）伴有精神异常。患者年龄在18～94岁之间，平均年龄（56.51±2.31）岁，其中男性38例、女性44例。

1.2方法

半巢式实时荧光定量核酸扩增法：将1mL痰液置入试管内，将2mL Xpert消化液加入试管中，并摇震15到30秒钟，将其置于室温内15分钟，保存待检。用无菌吸管取2mL代检样本加入反应盒内，再将反应盒放置在美国Cepheid公司所产的Xpert仪反应舱内，提取DNA，实施检测和扩增操作，并选择专用软件对检测结果进行分析。

抗酸染色直接涂片法：按照痰涂片镜检实验室质量标准手册相关标准进行涂片，选择改良碱性复红法进行染色操作，最后实施抗酸杆菌镜检，按照镜检结果分级报告、标准报告结果。

结核菌固体培养基（罗氏）培养法;将4%NAOH消化液加入痰液中，使用振荡器进行振荡促进痰液化，处理时间应在15-20分钟。选择前处理消化后痰液0.1mL，实施无菌操作，将其接种在培养基斜面上，保证每份标本均同时接种2支酸性改良罗氏培养基，将其放置在37摄氏度的温箱内，每周对菌落生长情况进行观察1次，对于存在菌落生长的标本，需采用抗酸染色明确是否为分枝杆菌。

1.3观察指标

分析三种检测方法的检测阳性率。

1.4统计学方法

在本研究數据中，计量资料用（x±s）形式表示，用T值进行检验，计数资料以（%）的形式表示，并以X2检验，核算软件：SPSS28.00，P<0.05，说明以上数据存在明显差异。

2. 结果

半巢式实时荧光定量核酸扩增法检出阳性率为95.12%、抗酸染色直接涂片法检出阳性率为63.41%、结核菌固体培养基（罗氏）培养法检出阳性率为74.39%，前者检出率高于后两者（P<0.05）。如表1：

3.讨论

肺结核的发病现已成为严重的防治问题，故应更加重视该疾病的早期诊断，并获得结核病的病原体。对于肺结核疾病的诊断而言，结核分枝杆菌作为诊断金标准，但由于其实验室培养时间较长，导致患者延误治疗或无法得到正确治疗。故此，寻求更为简捷、快速、方便的诊断方式十分重要。

目前临床对于结核杆菌的诊断方式较多，包括罗氏固体培养、荧光染色显微镜检查、液体培养基培养检查、分子生物学检查、涂片检查、半巢式实时荧光定量核酸扩增法检查等，其中半巢式实时荧光定量核酸扩增法作为分子生物学检查方法，随着分子诊断技术的不断提高，其主要是使用基于GeneXpert检测系统的半巢式全自动实时荧光体外检测技术，其通过对rpoB的突变状态进行检测，从而对患者的状态进行判断。在本次结果中，将三种检测方法进行比较，发现半巢式实时荧光定量核酸扩增法的检出率最高，究其原因：传统的痰涂片染色法过程较为简陋，并且涂片质量、显微镜标本质量均可受到外界因素的干扰，一般需要大量的菌数目标本才能获得阳性结果，疾病检出率较低;而结核菌固体培养基（罗氏）培养法的步骤十分复杂，在操作过程中容易受到液体悬浮问题的干扰，导致有效样本丢失。而PCR法具有较强的敏感性，并且特异度较高，能够早期发现结核病。

综上所述，半巢式实时荧光定量核酸扩增法能够有效检出结核杆菌，为疾病的治疗提供重要参考依据，值得进一步推广与探究。

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